大花红景天愈伤组织的诱导

大花红景天愈伤组织的诱导 大花红景天愈伤组织的诱导 西藏植保《西藏科技92008年2期(总第179期) 大花红景天愈伤组织的诱导 白玛玉珍李宝海次仁措姆 (西藏自治区农牧科学院中心实验室,西藏拉萨850032) 摘要:通过对大花红景天[Rhodiolacrenulata(Hook.f.etThoms.)S.H.Fu]不同外植体叶,叶柄,茎,根 的愈伤诱导 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 明,以叶或叶柄的效果最好,诱导频率可达70%以上.三种类型的愈伤组织中结构松散, 红或绿色愈伤组织诱芽容易,不同激素种类和浓度的组合对愈伤组织的诱导和分化效果不同. 关键词:大花红景天愈伤组织诱导 中图分类号:R282.71 大花红景天[Rhodiolacrenulata(Hook.f.et Thoms.)S,H.Fu]属景天科多年生草本植物,又称宽 瓣红景天,圆齿红景天,藏语称苏罗马保,为2005年版 《中国药典》收载品种.分布在云南西北部,四川西部 和西北部,西藏和青海省,多生长在海拔2800,5000m 的山坡草地,灌丛,高IIJ砾石滩及石缝中.由于生存条 件恶劣,长期经受缺氧,干燥及强紫外线等环境的影 响,形成独特的营养成分,含有丰富的红景天甙,黄酮, 多种维生素和微量元素,还含有机体所必需的17种氨 基酸.具有抗缺氧,抗寒冷,抗疲劳,抗辐射,抗病毒, 延缓机体衰老,防止老年疾病,抗微波辐射及兴奋大脑 和脊髓等多种功能,是一种适用于特殊地区开发,用以 增强人体适应能力的药物.另外,也可以研制成饮料 饮用. 近年来,随着人们对大花红景天的不断深入研究 与开发利用,自然状态生长的大花红景天资源受到了 严重的威胁.因此,加快其人工繁殖,缓解资源开发与 保护的矛盾已成为当务之急,采用试管技术繁殖大花 红景天种苗并进行人工栽培,是有助于解决这一问 题 快递公司问题件快递公司问题件货款处理关于圆的周长面积重点题型关于解方程组的题及答案关于南海问题 的一项重要途径. 1材料与方法 1.1实验材料 本实验材料为大花红景天(Rhodiolacrenulata)的 茎,叶,叶柄,根,来源于西藏自治区拉萨市墨竹工 卡县. 1.2方法 1.2.1外植体的处理:分别选取大花红景天幼嫩的 茎,叶,叶柄,根作为外植体来诱导愈伤组织.在超净 工作台上,先用70%的乙醇浸泡材料30s,再用0.1的 HgC1浸泡5,lOmin,然后用灭过菌的无菌水冲洗3, 5次,再用无菌滤纸将外植体表面的水吸干,将其切成 大小相近的小块(约5mm的叶片),然后接种到不同 激素浓度配比的诱导培养基上. 74 1.2.2培养条件:实验所采用的基本培养基是MS培 养基,附加各种激素,每升培养基加蔗糖30g,琼脂6g, 各种培养基的pH值均为5.8. 设计 领导形象设计圆作业设计ao工艺污水处理厂设计附属工程施工组织设计清扫机器人结构设计 光照培养和暗培 养,温度为18,25?.另外设计两种温度对照培养, 分别为5,15?培养和18,25?培养.光照10,16h/ d,光照强度约为1500,2000Lx,结合自然光照800Lx 左右. 1.2,3愈伤组织的诱导:外植体MS基本培养基上生 长一个月,将试管苗叶或叶柄切成小块接种到MS基 本培养基和附加不同浓度NAA,2,4一D和6一BA的 各种培养基上,诱导愈伤组织. I.2.4分化培养:将叶或叶柄形成的愈伤组织转到含 不同浓度IAA,6一BA和NAA的MS培养基上,诱导愈 伤组织分化.当苗长至2.5,3.5cm时,将苗转移到 生根培养基上诱导根的形成.各种培养基pH=5.8. 2结果与分析 2.1不同外植体对愈伤组织诱导的影响 本试验采用的培养基为1/2MS+6一BAO.5mg/L +NAA2,4一D2.Omg/L和1/2MS+6一BAO.5mg/L+ NAA3.0mg/L.结果表明,用大花红景天的幼叶或叶 柄作为外植体,都易诱导出愈伤,诱导率高达70%以 上;用幼茎或根作为外植体难以诱导出愈伤组织,诱导 率很低,只有20%左右.因此确定幼叶或叶柄为大花 红景天诱导愈伤的最佳外植体. 2.2温度对愈伤组织状态的影响 大花红景天均生长在3500m以上的高海拔地区, 生长环境典型特殊,其特点是低氧,低温,昼夜温差大, 强紫外线照射等,年均气温在2.7,8?之间.因此, 本实验设计了5,15?和18,25?两个温度来探索其 愈伤组织的分化生长情况.经过实验得出,在5, 15?和18,25?均能诱导出愈伤组织并且可以分化, 只是在5,15?诱导愈伤组织的速度很慢,需要35d 以上,愈伤组织比较致密,继代所需时间较长,一般在 《西藏科技))2008年2期(总第179期)西藏植保 60d.而18,25?时,20d左右就可以长出愈伤组织, 愈伤组织相对松散,继代时间较短,25,30d就可以继 代.因此可以根据实际需要来选用不同的温度. 2.3光照对愈伤组织状态的影响 光照是组织培养中的重要外界条件之一,它对外 植体生长和分化有很大的影响.在光照培养和暗培养 条件下,均获得了大花红景天的愈伤组织,但愈伤组织 的状态,分散程度不同.实验过程中,无菌外植体接种 10d左右,叶片的四周就开始膨大.光照培养下,20d 左右都开始诱导出大量的淡绿色或浅黄色愈伤组织, 继而变为绿色.继代培养后,大花红景天愈伤组织呈 ,含水量大.而暗培养条件 现绿色或红色,结构疏松 下,愈伤组织大多呈白色或淡绿色,分散性较好.继代 培养后,愈伤组织变为浅绿色,表面呈蓬松的白毛状, 含水量大,结构比较松散.可能是由于光照下,愈伤组 织发生光合作用生成叶绿素而使组织呈现绿色,同时 由于花青素的形成而出现红色,而在黑暗条件下,组织 不能进行光合作用,故呈现白色或黄色. 2.4不同浓度激素组合对愈伤组织诱导的影响 激素是植物组织培养器官分化的关键因素,形成 器官的类型由培养基中不同激素的相对浓度控制,而 不是这些物质的绝对浓度决定.大花红景天叶片外植 体在接种到附加不同浓度植物生长激素的MS培养基 后,经过一段时间培养均可产生愈伤组织,但叶片在不 同培养基上愈伤组织诱导率存在十分明显的差异(见 下表).培养4周后,在添加0.1mg/L6一BA和 1.0mg/LNAA的1/2Ms培养基上开始形成绿色愈伤 组织,但愈伤组织诱导率很低,仅为21.67%;而在添 力口0.5mg/L6一BA和3.0mg/LNAA或0.5mg/L6一 BA和2.0mg/L2,4一D的1/2MS培养基上形成了黄, 红,绿等不同色泽的愈伤组织,其中黄色与红色愈伤组 织结构疏松,而绿色愈伤组织相对致密,且诱导率高达 70%,其中绿色,黄色与红色愈伤组织分别占50%, 12.33%与7.67%. 随着6一BA与NAA浓度的上升,愈伤组织诱导 率上升,其形成的愈伤组织色泽有黄,绿2种,且生长 较为迅速.综上所述,不同植物激素组合的培养基对 叶片外植体的愈伤组织均有明显影响,但添6一 BA0.5mg/L+2,4一D2.0mg/L或6一BA0.5mg/L+ NAA3.0mg/L的1/2Ms培养基对叶片愈伤组织诱导 最为有效. 不同激素组合对叶片愈伤组织形成的影响(mg/L) 2.5继代培养 将愈伤组织产生的丛芽分别接种到附加1.0mg/L 6一BA和0.1mg/LNAA的MS培养基上,芽开始增 殖,每30,60d继代1次,增殖4,6倍.分生芽逐渐 形成独立小植株,部分丛芽可长出幼根. 2.6生根与移栽 切取高2,3cm的芽体,接种于生根培养基上,7 , 10d即可产生根原基突起.10,25d后,根长3, 5cm,平均每株生根5条,生根率达98%.待苗高达 4cm以上进行移栽,移栽成活率达75%以上. 3讨论 在本研究中,以大花红景天叶片,根,茎作为外植 体,全面研究其愈伤诱导形成的适宜条件:在愈伤组织 诱导方面,以叶片作为外植体诱导组织效果最好,诱导 频率可达70%以上,三种类型的愈伤组织中,结构疏 松,呈颗粒状的绿色或红色愈伤组织分化能力最强,不 同激素种类和浓度的组合对愈伤组织的诱导效果 不同. 经过4年多的研究试验,不仅掌握了诱导温度,光 照等因素的影响,而且以大花红景天的叶片作为外植 体诱导愈伤组织,再生出完整植株,并成功地移栽成 活,这为大花红景天的快速人工繁殖,提供了一条崭新 的生长途径.这不仅可以解决大规模开发的原料供求 矛盾,还可使野生资源得到科学,合理的保护,从而实 现资源开发和利用的可持续发展. 编校陈莎莎 75