题目:石蜡切片技术实验报告
学院:农学院,专业:植物学,姓名:张永丰,学号:2011202010
目的
掌握石蜡切片技术,为以后的科研中切出合格的实验装片做准备。并观察植物叶的横切面内部结构。
材料:已经固定好的女贞叶
方法与操作步骤
一、 脱水:依次使用下列浓度的乙醇脱水
50%乙醇—70%乙醇—85%乙醇—95%乙醇—100%乙醇—100%乙醇
每步两个小时。
二、 透明:依次通过下列试剂进行透明
1、1/2无水乙醇1/2二甲苯(加少许番红粉末,对材料进行附染)两个小时
2、二甲苯两个小时
3、二甲苯一个小时
三、 浸蜡:浸蜡步骤如下
1、 将材料瓶中的二甲苯取出1/2,加入剩余二甲苯的体积3/2倍的石蜡液于36℃温箱中处理35小时
2、 换用纯石蜡液于60℃温箱中处理2小时,再换一次纯石蜡液处理2小时
四、 包埋与切片
1、 在提前准备好的纸盒中放入少量蜡液。
2、 片刻后放入材料,避免形成断层还要注意材料摆放的位置和方向。
3、 及时将蜡块冷却,防治形成结晶。
4、 修块与粘连:将多余的石蜡切除,使蜡块成为梯形;将蜡块一正确的方向粘连在枕木上。
5、 切片:利用切片机将蜡块切成薄片。切片厚度为8~10μm,以每分钟40~50转为宜。
6、 粘片与展片:在载玻片上滴一滴黏贴剂和一滴蒸馏水用牙签涂匀,将蜡带光面朝下固定于载玻片上,放到展片台上经加温使其充分展开。
7、 干燥:将展好的片放于36℃温箱中干燥16小时
五、脱蜡:切片分别经过下列步骤进行脱蜡
二甲苯 30min 1/2二甲苯1/2无水乙醇 5min无水乙醇 5min 95%乙醇5min 85%乙醇 5min 70%乙醇 5min
六、染色:染色分为番红染色和固绿染色两步
1、番红染色:将载玻片放入盛有番红染液(1%番红,70%乙醇)的染缸中染色22小时
2、固绿复染:载玻片依次经过一下处理
70% 1min 85% 1min 95% 1min 固绿染液(0.1%固绿,95%乙醇)20秒
3、 脱水:95% 1min 100% 1min 100%1min
4、 透明:1/2二甲苯1/2无水乙醇 1min 二甲苯 1min 二甲苯
七、封片
中性树胶封片,干燥
八、镜检
将封好的装片在显微镜下观察,并挑选清晰的具有叶横切面典型结构特征的部位拍照。
结果与
分析
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一、 结果分析
叶脉
木质部
韧皮部
栅栏组织
表
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皮(远轴面)
表皮(近轴面)
二、 方法分析
1、 包埋是材料放置的位置不正确加之材料较大,为切片带来较大困难,以致切片效果不理想。
2、 番红染色时间短,观察结果中应该是红色的部位不明显。
3、 固绿复染时间短,表皮细胞染色不清晰。
4、 材料固定时间过长,或者处理过程中使得材料变脆,切片时把叶的远轴面表皮与叶片脱离,使得观察结果中的很多叶片没有远轴面表皮。
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