青龙衣化学成分及抗肿瘤作用研究进展

青龙衣化学成分及抗肿瘤作用研究进展 1，21，21，21，21，2 严琴琴，曲中原，邹翔，陆婉，季宇彬 (1. 国家教育部抗肿瘤天然药物工程研究中心，哈尔滨 150076;2. 哈尔滨商业大学生命科 学与环境科学研究中心，哈尔滨 150076) 摘要 青龙衣主产于东北三省，以黑龙江省资源蕴藏量最大。近年来对青龙衣中 化学成分及抗肿瘤作用的研究有很多报道，其中萘醌及其苷类、多糖类等具有明 显的抗肿瘤作用。本文对青龙衣的国内外文献进行综述。 关键词 青龙衣;化学成分;抗肿瘤作用 The chemical composition research and anti-tumor activity research of Exocarpium Juglandis Immaturum ，，，，，1212121212YAN Qin-qin, QU Zhong-yuan, ZOU Xiang , L u Wan , JI Yu-bin (1. Engineering Research Center of natural antineoplastic drugs，Ministry of Education; 2.Center of Research and Development on Life Sciences and Environmental Sciences, Harbin University of Commerce, Harbin 150076) Abstract Exocarpium Juglandis Immaturum produces mainly in the three northeastern provinces and Heilongjiang Province resources reserves is the largest.In recent years, there are a lot of reports about the research of the chemical constituents and anti-tumor functions of Exocarpium Juglandis Immaturum. Naphthoquinone, glycoside and polysaccharide have manifest anti-tumor effects.This article mainly to sum up the domestic and foreign literate on the Exocarpium Juglandis Immaturum. Keywords Exocarpium Juglandis Immaturum; Chemical constituent; Anti-tumor functions 青龙衣是胡桃科胡桃树属植物核桃(Juglands mandshurica Maxim.)和胡桃 楸(Juglands ragia L.)未成熟果实的干燥果皮，主产于东北、山东、河北等地。 青龙衣始载于《开宝本草》，称为胡桃青龙，《救急方》中称为青胡桃皮，自《山 [1]东中草药手册》称为“青龙衣”后，现多延用此名称。青龙衣辛、苦、涩、平， [2]有清热解毒、祛风疗癣、止痛止痢的功效。青龙衣具有广泛的药用价值，特别 是其抗癌活性，越来越受到重视。本文对青龙衣化学成分及抗肿瘤作用研究进展 作以综述，为进一步研究和开发。 1青龙衣化学成分研究进展 据文献报道青龙衣主要含有萘醌及其苷类、黄酮及其苷类、二芳基庚烷类、 [3-4]鞣质、萜类、多糖类和矿物质等化合物。 [5]1955年Bocle首次从青龙衣中分离并鉴定了胡桃醌。我国学者许绍惠等 于1985年从山核桃的新鲜青皮、枝皮和根皮中分离出胡桃醌，并鉴定了结构。 新鲜青龙衣中胡桃醌含量较高，达0.42%，随着存储时间的延长，胡桃醌含量逐 [6]渐减少，存储9年的青皮中只含有0.09%。许多学者还从胡桃科植物的果实青 皮、叶和根皮中分离提纯出5,8-二羟基-l,4萘醌和5-羟基-3,3'-双胡桃醌等胡桃醌 [7-8]的衍生物。 [9]张捷莉等利用GC-MS法分离鉴定了青龙衣中主要挥发性物质，分别为(E)-4,8-二甲基-1,3,7-壬三烯、松香芹酮(pinoearvone)、松香芹醇((pin'iocarveol)、)、桃金娘烯醛(myrtenal)、桃金娘烯醇(myrtenol)、(E,E)-4,8,12-三甲基-1,3,7,11-十三碳四烯、石竹烯环氧化物、马鞭草烯醇(verbenol)、马鞭草烯酮(verbenone)及萜品油烯(terpinolone)。 [10]刘全宇将青龙衣乙醇提取物用氯仿萃取，氯仿部分和水部分分别用AB-8型大孔树脂、硅胶柱色谱等 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 进行分离，得到5个化合物，分别为正二十九烷醇(nonacosylalcol)、正三十一烷醇(hentriaeontanol aleohol)、正三十二烷醇(dotriacontane alcohol)、β-谷甾醇(β-sitosterol)和葡萄糖(glueose)。其中正三十一烷醇(hentriaeontanolalcohol)、正三十二烷醇(dotriacontanoalcohol)为在青龙衣中首次 [11]分离得到。刘薇等将青龙衣提取物依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，各萃取部位用硅胶柱层析，分离纯化得到3个化合物，分别为青龙素A，齐墩果酸，正二十九烷烃。其中青龙素A是首次从该植物中分离得到的新天然产物，齐墩果酸系首次从该植物中分离得到。 [12]周靖等用气相色谱-质谱法测定了青龙衣中脂肪酸的成分，主要为十六碳酸、十八碳酸、十六碳烯酸、十八碳烯酸、十八碳二烯酸、十八碳三烯酸，所含脂肪酸虽然数量较少，但含有对人体有益的不饱和脂肪酸，可以加以利用。 [13]季宇彬等采用水提醇沉法提取青龙衣粗多糖，运用Sevage法除蛋白，HO22 脱色，纯化后的多糖以HPCE 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 单糖组成，苯酚-硫酸比色法测定糖质量分数。青龙衣粗多糖提取率为38.07%，精制多糖以葡萄糖计多糖含量为76.08%;主要单糖组分为半乳糖(Gal) 、葡萄糖(Glu) 、阿拉伯糖(Ara) 、鼠李糖(Rha) 、果糖(Fru)，其百分比分别为42.998%、23.30%、16.03%、10.123%、7.549%。 [14]周靖等采用火焰原子吸收分光光度法定性定量测定青龙衣中钙、铁、锰、镁、钾、锌、铜等7种元素的含量。 2青龙衣的抗肿瘤研究 青龙衣具有镇痛、抗菌、消炎、抗肿瘤等作用。最初用于镇痛，且具有作用时间长、无成瘾性及无毒副作用等优点。经过多年的临床用药经验，发现其对肿瘤有非常明显的抑制作用。虽然目前对青龙衣的抗肿瘤有效活性成分众说不一，但青龙衣具有抗肿瘤作用是公认的。 2.1青龙衣粗提物的抑瘤作用 [15]文姝等以Western Blot方法检测青龙衣提取液作用后的K细胞的p53、526p21蛋白 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 达，结果p53、p21蛋白表达量均有增加，从而抑制周期蛋白依赖性激 [16]酶活性，使细胞停滞于G期。徐巍等研究表明青龙衣可显著抑制人肝癌1 [17]SMMC-7721细胞生长、繁殖，且与作用时间、剂量呈明显相关性。王少东等研究表明青龙衣水提浸膏对体外小鼠肉瘤S细胞有直接杀死作用，且药物浓度180 和作用时间与效应关系显著。 兰英等对青龙衣水提物体内外实验结果表明青龙衣水提物不仅在体外可协同亚剂量ConA 促进小鼠脾细胞TNF 的诱生，也可能在体内经代谢产生的中间 产物对脾淋巴细胞产生TNF的功能有影响，或者通过对机体其他系统或途径间接 [18-20]影响脾淋巴细胞功能，增强其产生TNF，从而起到抗肿瘤及免疫调节作用 。采用硫代巴比妥酸缩合法测定青龙衣水提物对小鼠脂质过氧化程度的影响，结果显示青龙衣可降低小鼠血清及脾细胞培养上清中MDA的质量浓度，而降低机体 [21]内脂质过氧化程度。以青龙衣乙醇提取部分注射肿瘤小鼠，结果小鼠血浆中MDA含量降低， 且随着注射量的增加MDA逐渐降低，而SOD的含量与阴性对照组相 [22]比较则增加，且试验肿瘤小鼠血浆中的SOD含量随着注射量的增加逐渐增加。 [23]李生正等人采用BSLB法对青龙衣抗肿瘤活性成分进行了初步筛选，发现青龙衣醋酸乙酯提取物对Brmie Shrmip幼体半数致死浓度LC为79. 1023mg/mL，其具50 有抗肿瘤活性。病理学及电镜超微结构的观察，用青龙衣治疗后，癌组织中心部 [24]位有些癌细胞破碎，胞核裸露，胞质消失，呈坏死状改变。 2.2青龙衣中醌类抗肿瘤研究 2.2.1粗萘醌的抗肿瘤作用 [25]高奎滨等对青龙衣醇提物中粗萘醌等进行了抗肿瘤的实验，研究表明粗萘醌对多种体内移植性肿瘤有明显的抑制作用，体外杀伤细胞的作用更强，且毒性较低，其他成分的提取物也有不同程度的抑瘤作用。 2.2.2胡桃醌的抗肿瘤作用 胡桃醌是青龙衣中具有明确抗肿瘤作用的有效成分，其抗肿瘤作用机制国内外均有报道。胡桃醌可以抑制体外培养的肿瘤细胞的增殖作用，其抗肿瘤作用是 [26][27]直接杀伤肿瘤细胞。许绍惠等报道胡桃醌对小鼠自发性乳腺癌和移植性乳腺癌有明显的抗癌活性，可使艾氏腹水癌细胞的有丝分裂异常。有文献报道胡桃 [28]醌对宫颈癌细胞株的增殖有明显抑制作用，并使细胞在G/M期阻滞。张野平2 [29]等应用同位素掺入方法发现，以胡桃醌0.1mg/mL和0.025mg/mL作用5h，对HePA小鼠细胞DNA合成抑制为高峰，分别为71.5%和60%。实验证明胡桃醌对肿瘤细胞DNA的合成有明显的抑制作用，且随剂量的增长作用增强。通过电子显微镜观察胡桃醌主要影响HePA 细胞线粒体，低浓度可使部分线颗粒体嵴减少，高浓度可使大部分细胞质中的线粒体空泡化。从而使增殖的肿瘤细胞因能量供给 [30]缺乏而受到增殖限制，从而达到抑瘤作用。Kamei等进行了醌类化合物抑制细胞生长试验，发现胡桃醌主要抑制细胞生长的S期，化合物中酚羟基的个数越多细胞毒性越大。 [31]Varga等发现胡桃醌可以堵塞人外周血淋巴细胞的钾离子通道，而钾离子通道保持活性被认为是细胞生长和T细胞增殖的先决条件，因此他们认为胡桃醌的这一作用即使不是唯一的，也是胡桃醌诱导细胞凋亡的重要方式。 Pinl是一个重要的促肿瘤发生、发展因子。研究报道胡桃醌是Pinl的抑制剂，对宫颈癌细胞株的增殖具有抑制作用，去Pinl表达，抑制Ras/Neu引起的细胞转化， [32]使肿瘤细胞在G/M期阻滞，并更易于凋亡。 2 [33]Michelle等报道胡桃醌能够降低p53基因表达和诱导h2ax快速磷酸化使细胞死亡，可能是胡桃醌通过快速磷酸化细胞周期的各个阶段的h2ax，并且使p53 蛋白水平剧烈下降，从而诱导细胞DNA损伤，诱发细胞凋亡。此外，胡桃醌可通过直接修饰巯基基团使RNA转录起始前复合物断裂，抑制细胞mRNA的合成， [34]直接阻断转录，起到抗肿瘤作用。 2.2青龙衣中多糖类抗肿瘤研究 [35]王晓晶等研究发现经腹腔注射青龙衣多糖后，荷瘤小鼠机体内红细胞微黏度均有不同程度的下降，即膜脂流动性提高，增强红细胞免疫黏附肿瘤细胞的能力提高机体免疫能力，而发挥其抗肿瘤作用的。 [36]2+季宇彬等研究发现青龙衣多糖可以降低H肿瘤细胞的Ca-ATPase、22 ++2+Na/K- ATPase 和Mg- ATPase 的活性。青龙衣多糖降低了肿瘤细胞ATPase 的活性，可能是其抗肿瘤的机制之一。进一步研究发现青龙衣多糖能显著降低细胞内阳离子的浓度，对红细胞具有保护作用，增强了红细胞的免疫功能，这可能 [37]是青龙衣多糖抗肿瘤作用机制之一。 2.3青龙衣中其它成分抗肿瘤研究 [25]高奎滨等用青龙衣鞣花酸成分腹腔注射50mg/kg和10mg/kg分别治疗小鼠自发和移植性乳腺癌，结果表明均有抑制作用，尤以对自发肿瘤作用明显且能增加自发瘤鼠体重。青龙衣中琥珀酸有抑制DNA拓扑异构酶作用，逆没食子酸 [38]对小鼠自发性和移植性腺癌有明显抑制作用。 2.4青龙衣抗肿瘤的临床研究 近几十年来在消化系统肿瘤及其它肿瘤的治疗中应用较多。核桃楸对胃癌、食道癌、肝癌及肠癌等均有显著疗效，尤其是青龙衣对各期及术后食管贲门癌的 [39]总有效率为53 % ，对早期食管贲门癌的有效率为76%。北京军区总医院也将其广泛试用于多种肿瘤，认为对食道癌、贪门癌等具有改善症状，减小痛苦，增进食欲及镇痛、生血、保肝等作用，亦能使某些瘤体缩小或消失。河南安阳地区用于治疗食管癌、胃癌，近期疗效均较满意。 青龙衣粉针也有抑瘤作用。有研究报道青龙衣粉针具有明显抑制小鼠移植性肉瘤S作用，并能显著延长荷瘤小鼠的生存期。青龙衣粉针还对人胃腺癌180 SGC-7901细胞有明显的细胞毒作用。青龙衣粉针不仅具有阻滞细胞周期从G期1向S期移行的作用，还具有在适当剂量、适当时间条件下促使G期细胞凋亡的作0 用，并能通过抑制S期而抑制肿瘤细胞DNA合成。TEM检测结果显示，改变线粒体 [38]结构和功能很可能是青龙衣粉针诱导肿瘤细胞发生凋亡的机制之一。 青龙衣糖膏可治疗多种消化道肿瘤，如胃癌、食道癌、结肠癌及肝癌等，具有改善血象及保肝消炎作用，并且有显著的镇痛作用，经过长期临床应用证明， [40]青龙衣糖膏对治疗浅表性胃炎，解除胃脘疼痛具有非常明显的效果。 综上，青龙衣具有明确的抗癌活性，经过多年的研究，青龙衣在临床上已经得到广泛应用，是一种有前景的抗肿瘤新药。目前，抗肿瘤新药研究更关注对已知有效的抗癌植物药的开发，其原因在于有的放矢和节省财力。青龙衣的研究现状大部分还停留在初级阶段，所以在已有的研究基础上深入探讨其药效物质基础并从分子水平阐明其抗肿瘤作用机理将更有意义。 参考文献 [1] 江苏新医学院.中药大词典(下)[M].上海:上海科学技术出版社1986:1544. 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