糖链的序列测定—高碘酸氧化法及Smith降解法
实验 > 生化分子 > 糖链的序列测定—高碘酸氧化法
()
高碘酸氧化和Smith降解
高碘酸可选择性断裂糖分子中的邻二羟基或邻三羟基处,生成相应的多糖醛,甲醛或甲酸.反应定量进行,每开裂1个C—C键消耗1分子高碘酸.通过测定高碘酸的消耗量及甲酸的释放量,可以判断糖苷键的位置,直链多糖的聚合度,分支多糖的分支数等.Smith降解是将高碘酸氧化产物还原后酸水解,再鉴定水解产物,从而推断糖苷键的位置与分支点等.以葡萄糖为例,以1—2或1 —4位键合的糖基经高碘酸氧化,平均每个糖基消耗1分子高碘酸,且无甲酸释放;1—3位键合的糖基不被高碘酸氧化;1—6位键合的糖基或非还原末端糖基经高碘酸氧化,消耗2分子高碘酸同时释放1分子甲酸.
【实验原理】
高碘酸可以选择性地氧化和断裂糖分子中连二羟基或连三羟基处，生成相应的多糖醛、甲醛或甲酸。反应定量地进行，每开裂—个C-C键消耗一分子高碘酸。通过测定高碘酸消耗量及甲酸的释放量，可以判断多糖分子中糖苷键的位置、类型、多糖的分枝数目和取代情况等。
【实验材料】
1. 实验器材
紫外分光光度计。
2. 实验试剂
(1)溴甲酚蓝指示剂:0.1克溴甲酚蓝溶于250ml蒸馏水中（含1.43毫升0.1mol/L氢氧化钠）。
(2) 30mmol/L高碘酸钠溶液。
高碘酸钠 基本信息
中文名称:高碘酸钠
英文名称:Sodium periodate
中文别名:过碘酸钠;偏高碘酸钠
英文别名:Sodium Metaperiodate; Sodium Metapriodate; Sodium (Meta)Periodate; Sodium Tetroxoiodate(Vii); Sodium meta periodate
CAS:7790-28-5[1]
EINECS:232-197-6
分子式:NaIO4
分子量:213.8918
高碘酸 简介
中文名称： 高碘酸
英文名称： periodic acid
正高碘酸
英文别名:pentahydroxy-lambda~5~-iodane oxide[1]
CAS No.： 10450-60-9
分子式： H5IO6
分子量： 227.94
理化特性：
主要成分： 纯品
外观与性状： 无色或白色结晶，无臭，有潮解性。
熔点(℃)： 122
沸点(℃)： 140(分解)
相对蒸气密度(空气=1)： 7.9
溶解性： 溶于水、乙醇，微溶于乙醚。
主要用途： 用作氧化剂。
高碘酸钠制备：
氯气氧化法 将碘在水介质中，通入氯气进行氧化生成高碘酸，经分离杂质后，加入氢氧化钠溶液中和至pH2～3，生成高碘酸钠溶液，再经提纯、分离杂质、蒸发浓缩、冷却结晶、离心分离、干燥，制得高碘酸钠成品，其反应方程式：
HIO4+NaOH→NaIO4+H2O
(3) 乙二醇。
(4) 0.01mol/L氢氧化钠溶液。
【实验操作】
1. 制作
标准
excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载
曲线：
取6支干燥试管，按下表操作
管号
0
1
2
3
4
5
高碘酸钠（ml）
0
0.5
1.0
1.5
2.0
4.0
蒸馏水（ml）
4.0
3.5
3.0
2.5
2.0
0
各取0.1 ml，定容至25 ml，在223nm处测定光密度
A223
横坐标为高碘酸钠毫摩尔数，纵坐标为光密度值，绘制标准曲线。
2. 样品测定
称取多糖样品25mg，用少量水溶解，加入30mmol/L高碘酸钠溶液,定容至25ml，置于暗处,室温下进行反应，于0，6，12，24，36，48…小时间隔取样0.1 ml，蒸馏水稀释250倍后，使用紫外分光光度计在223nm处测定光密度。至光密度值达一稳定值时，加乙二醇破坏过量的高碘酸以终止反应。由此光密度值根据标准曲线计算出高碘酸的消耗量。取2ml上述反应溶液，测定甲酸的生成量。剩余部分进行Smith降解。
3. 甲酸测定：
取2ml上述反应溶液，加一滴溴甲酚蓝作指示剂，用0.01mol/L氢氧化钠溶液滴定甲酸的释放量。
【注意事项】
为避免发生超氧化，反应溶液的pH值应控制在3~5，而且一定要在低温、避光处进行
实验 > 生化分子 > 糖链的序列测定—Smith降解法
()
Smith降解是将高碘酸氧化产物用硼氢化合物(如硼氢化钾或硼氢化钠)还原成稳定的多羟基化合物。然后进行适度的酸水解，用纸层析鉴定水解产物，由水解产物可以推断多糖各组分的连接方式及次序。 以葡聚糖为例，其反应式如下图： 以1→2位键合的糖基经高碘酸氧化，平均每个糖基仅消…
Smith降解是将高碘酸氧化产物用硼氢化合物(如硼氢化钾或硼氢化钠)还原成稳定的多羟基化合物。
然后进行适度的酸水解，用纸层析鉴定水解产物，由水解产物可以推断多糖各组分的连接方式及次序。
以葡聚糖为例，其反应式如下图：
以1→2位键合的糖基经高碘酸氧化，平均每个糖基仅消耗一分子高碘酸，并且无甲酸释放；
Smith降解后产生甘油。
以1→4位键合的糖基经高碘酸氧化，平均每个糖基仅消耗一分子高碘酸，并且无甲酸释放；
Smith降解后产生赤藓醇。
以1→3位键和的糖基不被高碘酸氧化；
Smith降解后仍为原来糖。
以1→6位键和的糖基或非还原末端基（1→6）经高碘酸氧化，消耗二分子高碘酸，同时释放一分子甲酸；
Smith降解后产生甘油。
本实验通过纸层析检测终产物中的甘油、赤藓醇和糖。
【实验材料】
0.1mol/L醋酸。
2mol/L硫酸。
硼氢化钾。
纸层析试剂及器材：除显色剂外，同实验二。
硝酸银显色剂：
A: 16%硝酸银水溶液: 丙酮为1：9（V/V）。
B: 1%NaOH乙醇溶液(W/V)。
C: 6mol/L氢氧化铵。
【实验操作】
1. 还原和水解
高碘酸氧化后经乙二醇处理的溶液对流水透析48小时，蒸馏水透析24小时，于40℃以下减压浓缩至10ml左右，加入70mg硼氢化钾于室温、暗处搅拌18小时~24小时以还原多糖醛。用0.1 mol／L醋酸中和至pH6~7，对流水透析48小时，蒸馏水透析24小时，减压蒸干，加1 mol／L硫酸2ml，封管，100℃水解8小时，用碳酸钡粉末中和，定量滤纸过滤，滤液减压浓缩后，通过纸层析
方法
快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载
检测。
2. 纸层析
操作详见实验2（单糖组成分析）。展层后，将滤纸取出，自然干燥，喷上试剂A ，自然干燥，将滤纸浸入试剂B中，待斑点显出后，再浸入试剂C中以洗去滤纸上的氧化银，然后用水冲洗1小时左右，风干。以正丁醇：乙酸：水=4：l：5为展层剂时，甘油的Rf为：0.48，赤藓醇的Rf为：0.35。
浙公网安备 33021202002483