BCA蛋白浓度测定说明书

BCA蛋白浓度测定说明书 作液在室温可稳定24小时。 BCA蛋白浓度测定试剂盒 2、 试管编号，按以下操作。 管 号 S0 S1 S2 S5 S10 S20 S40 样品x 产品编号 产品名称 包装 O (µl) 20 19.5 19 17.5 15 10 0 20 H2 CHEM001 BCA蛋白浓度测定试剂盒 102ml , 样品制备液(µl) 4 4 4 4 4 4 4 , 蛋白 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 液(µl) 0 0.5 1 2.5 5 10 20 包装 清单 安全隐患排查清单下载最新工程量清单计量规则下载程序清单下载家私清单下载送货清单下载 : 样品体积 , , , , , , , 4 反应体积 24 24 24 24 24 24 24 24 产品编号 产品名称 包装 BCA工作液(ml) 0.7 0.7 0.7 0.7 0.7 0.7 0.7 0.7 CHEM001A BCA试剂A 100ml 待定 蛋白浓度(µg/µl) 0 1 2 5 10 20 40 CHEM001B BCA试剂B 3ml CHEM001C 蛋白标准(2mg/ml) 1.2ml 注:1)标准曲线一般做4个点加一个空白。实际使用中，可以根据待测样品的估计蛋白— 说明书 1份 浓度选取上表标准蛋白管S0-S40的任意4个点加一个空白。2)为了排除干扰，反应中 需要加与样品用量等体积的样品制备液。3)如果样品用量变化，表中所加的样品制备液产品简介: 需做相应调整。 增强型BCA蛋白浓度测定试剂 (Enhanced BCA Protein Assay)是常用蛋白浓度测定方法之一。 3、 56?放置30分钟。(注:也可以室温放置2小时，或37?放置60分钟。BCA法测定蛋 白浓度时，吸光度会随着时间的延长不断加深。并且显色反应会因温度升高而加快。如Viagene的BCA测定试剂测定方法简单，稳定性好，灵敏度高和抗干扰性强。增强型BCA法 果浓度较低，适合在较高温度孵育，或延长孵育时间)。 测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质影响，可以兼容样品中高达5%的SDS，5%的 Triton X-100，5%的Tween 20, 60, 80。能够耐受低浓度的EDTA、EGTA、二硫苏糖醇，但高4、 用分光光度计，在562nm测定光密度读数(540-595nm之间的波长也可使用)。根据标准浓度螯合剂和还原剂可能会对测定有影响。增强型BCA蛋白浓度测定试剂适合用于测定曲线计算出蛋白浓度。 Western Blotting样品，EMSA核提取液的蛋白浓度。检测灵敏度达到10μg/ml。 B. 微孔板法测定。 按照本说明书操作，每套试剂可进行145次比色杯法测定或500次微板法测定。 1、 根据待测定样品数算出所需BCA工作液总体积(每个样品需0.2ml工作液)按50体积比色杯法测定的BCA工作液用量较微板法多，但抗干扰性强，结果更准确。 BCA试剂A加1体积BCA试剂B(50:1)配制适量BCA工作液，充分混匀。BCA工 作液在室温可稳定24小时。 使用说明: 2、 参照上表中的蛋白标准液用量，加0、0.5、1、2.5、5、10、20ul蛋白标准液到96孔板的A. 比色杯法测定 标准品孔中。加dHO补足体积至20ul。加与样品用量相同体积的样品制备液到标准孔中。 21、 根据待测定样品数算出所需BCA工作液总体积(每个测定需0.7ml工作液)，按50体积 BCA试剂A加1体积BCA试剂B(50:1)配制适量BCA工作液，充分混匀。BCA工 4 1 3、 加适当体积样品到96孔板的样品孔中。加dHO使反应体积与蛋白标准孔的体积相同。 产品使用文献: 2 4、 各孔加入200ul BCA工作液，56?放置30分钟 (注:也可以室温放置2小时，或37?, Genya Hrang,Chrfan Luo, Xingyuan Gu, Zhongkai Wu,Zhiping Wang Zhiming Du, Chengheng 放置60分钟。BCA法测定蛋白浓度时，吸光度会随着时间的延长不断加深。并且显色反Hu, and Lilong Tang, Mechanical Strain Induces Expression of C-Reactive Protein in Human 应会因温度升高而加快。如果浓度较低，适合在较高温度孵育，或延长孵育时间)。 Blood Vessels, Journal of Pharmacology And Experimental Therapeutics, 2009; DOI: 10.1124/jpet.109.150961 5、 用酶标仪在562nm测定光密度读数(540-595nm之间的波长也可使用)。根据标准曲线计 算出蛋白浓度。 , 吴雨田,陈燕凌,佘菲菲,唐南洪,王小茜,李秀金， 幽门螺杆菌对胆管癌细胞增殖与凋亡及细 胞核转录因子 NF-KB 表达的影响， 中国病原生物学杂志,2009年04期30 保存条件: , 张泓，李磊，毛恩强，汤耀卿，张圣道， NF-kB 圈套技术在小鼠重症急性胰腺炎并发肺A液与B液放室温保存。蛋白标准液须在-20?冻存。本试剂盒自订购之日起一年内有效。 损伤中的实验研究， 中华肝胆外科杂志, 2009年15卷1期 注意事项: , GY Wang, GH Chen, H Li, Y Huang, GS Wang, N Jiang and BS Fu, Rapamycin-treated mature 比色杯法需要使用普通的分光光度计。微板法测定需使用96孔板与酶标仪。测定波长为dendritic cells have a unique cytokine secretion profile and impaired allostimulatory capacity, 540-595nm之间，562nm最佳。 Transplant International, 2009, June 01 , 为了加快BCA法测定蛋白浓度的速度可以适当用微波炉加热。加热条件需要实验确定。 , Fei Ling, Jiaqi Li, Yaosheng Chen, Hongli Du, Yingjie Mei, Delin Mo and Chong Wang, Cloning and characterization of the 5′-flanking region of the pig adiponectin gene, Biochemical , 为了安全，请穿实验服并戴一次性手套操作。 and Biophysical Research Communications, 2009 381(2): 236-240 常见问题: , Le-Yu Wang, Hai-Yi Wang, Jun Ouyang, Lei Yu, Bing Chen, Jian-Qiang Qin, Xiao-Zhong Qiu, 1、 是否每次测定时都需要制作标准曲线, Low concentration of lipopolysaccharide acts on MC3T3-E1 osteoblasts and induces 建议每次测定时都做标准曲线。因为BCA法测定时颜色会随着时间的延长不断加深，并proliferation via the COX-2-independent NFκB pathway, Cell Biochem Funct. 2009 且显色反就的速度和温度有关，所以除非精确控制显色的时间和温度，否则每次都要做27(4):238-242 标准曲线。 , S. Xie, R. Nie, J. Wang, F. Li, W. Yuan, Transcription factor decoys for activator protein-1 2、 测定标准曲线时发现随着标准品浓度的增加吸光度或颜色没有明显变化。可能的原因是(AP-1) inhibit oxidative stress-induced proliferation and matrix metalloproteinases in rat 样品制备液中含有严重干扰BCA法测定蛋白浓度的物质。有这种情况时，需要换样品制cardiac fibroblasts, Translational Research, 2009 153:17-23 备液或改用不同的蛋白测定试剂。 , 郑培永, 张 莉, 柳 涛, 王 淼, 邢练军, 季 光, 下丘脑S T A T3在非酒精性脂肪性肝病大 鼠发病中的作用及降脂颗粒 的干预，世界华人消化杂志 2009年17卷8期:753-757 , Xie S, Nie R, Wang J, Li F, Yuan W., Transcription factor decoys for activator protein-1 (AP-1) inhibit oxidative stress-induced proliferation and matrix metalloproteinases in rat cardiac fibroblasts. 1, Transl Res., 2009 153(1):17-23. 4 1 4 1