改良还原型辅酶I四唑蓝还原酶(NADH-TR)染色法改良还原型辅酶I四唑蓝还原酶(NADH-TR)染色法
改良还原型辅酶I四唑蓝还原酶(NADH-TR)氧化酶组织化学染色法
固定:不需要固定
切片:冰冻切片10um
试剂配制:
染色液
还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)-Sigma N8129 8mg 硝基四唑氮蓝(Nitro blue tetraolium-Sigma N6876) 10mg
0.2mol Tris HCl缓冲液pH7.4 10ml
二甲亚砜(DMSO) 0.5,1ml 以上试剂临用前新鲜配制,配制方法将NNADH,NBT,Tr...
改良还原型辅酶I四唑蓝还原酶(NADH-TR)染色法
改良还原型辅酶I四唑蓝还原酶(NADH-TR)氧化酶组织化学染色法
固定:不需要固定
切片:冰冻切片10um
试剂配制:
染色液
还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)-Sigma N8129 8mg 硝基四唑氮蓝(Nitro blue tetraolium-Sigma N6876) 10mg
0.2mol Tris HCl缓冲液pH7.4 10ml
二甲亚砜(DMSO) 0.5,1ml 以上试剂临用前新鲜配制,配制方法将NNADH,NBT,Tris-Hcl混合后加入DMSO然后用玻璃棒搅拌2-3分钟,过滤后使用。
根据上面配方我们在应用时进行了一点变通下面是我们采用的配制方法:
A液
还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)-Sigma N8129 8mg 0.2mol Tris HCl缓冲液pH7.4 5ml
还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)溶解于Tris HCl缓冲液中。
B液
硝基四唑氮蓝(Nitro blue tetraolium-Sigma N6876) 10mg
0.2mol Tris HCl缓冲液pH7.4 5ml
硝基四唑氮蓝(Nitro blue tetraolium)溶解于Tris HCl缓冲液中。
C液
二甲亚砜(DMSO) 10ul
A液和B液分别分装到EP管中,每管50ul,-20?储存。临用时室温解冻, A液50ul和B液50ul混合再加入C液10ul。可以染1,2张肌肉组织冰冻切片。长期(6个月)-20?储存染色不会产生任何影响。这种变通可以免去每次染色前称量繁琐过程。
染色步骤
1. 冰冻切片放入湿盒中滴加染色液置37?恒温箱10,20mins。 2. 流水冲洗1min。
3. 蒸馏水洗3次。
4. 甘油-明胶封片。
结果:基质网和线粒体呈紫蓝色,?型肌纤维比?型肌纤维颜色黑些,血管壁同时也被染色。
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