培养基灵敏度验证
方案
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1． 验证目的：
通过对培养基的灵敏度验证来增加无菌检查的可信度。
2．原理：
不同种培养基内加入符合其生长条件的已知菌株做生长实验，根据加入定量细菌的生长情况来评价该培养基灵敏度。菌量越少说明培养基灵敏度越高。
3．仪器设备：
无菌室(操作间净化级别小于10000级，局部净化小于100级，室温18-26C，相对湿度40-60%)、恒温培养箱（30-35C）、恒温培养箱（20-25C）、高压灭菌器、干烤箱（250C）、相差显微镜等。
培养基：需气菌、厌氧菌培养基（硫乙醇酸盐培养基，中国药品检定所购买，生产批号：980115）；真菌培养基（改良马丁培养基，中国药品检定所购买，生产批号：980115）。
测试菌种： 金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、白色念珠菌、生孢梭菌。
4．验证实施
4．1培养基配制：
分别称取硫乙醇酸盐培养基7.5克，改良马丁培养基7.0克，分别加250ml蒸馏水,热溶解，分装10ml/管，高压灭菌116C 20 分钟。
4． 2测试菌的培养：
在无菌操净台内，分别取金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、生孢梭菌菌液少量，接种在硫乙醇酸盐流体培养基（10ml/管）中，在30-35C培养24小时；取白色念珠菌菌液少量，接种在改良马丁培养基中在20-25C培养24小时。此时的培养液称为原菌液。
4．3测试菌计数：
采用原菌培养液直接稀释、计数板计数法：
1． 分别取已经培养好的原菌液1 ml，用生理盐水稀释10倍。
2． 用一片干净的盖玻片盖在一干净计数玻片上。
3． 吸少量含菌培养液接触盖玻片的边缘。
4． 在相差显微镜400倍下观察，并且按一小方块所见的每一个细菌大约相当2107细菌/ml 计算细菌浓度。
4．4原菌液稀释：
将上述原菌液根据细菌计数结果，分别用生理盐水稀释至 10~100个菌/ml。
4．5灵敏度实验：
分别将（4）稀释菌液1ml接种到（1）配制的10 ml/管培养基中，每种菌液接种3管培养基，以未接种的培养基为阴性对照，按规定的条件培养5天并逐日记录。
4．6结果判定：
以每种菌液接种的培养基不得少于2管呈阳性，即该培养基的灵敏度符合要求。
5．附录：
附录1 培养基配制记录
附录2 培养基灭菌测试记录
附录3 测试菌培养观察记录
附录4 测试菌计数记录
附录5 测试菌稀释记录
附录6 灵敏度观察记录
附录1
培养基配制记录
日期
培养基名称
培养基用量（g ）
蒸馏水用量（ml）
配制人
复核人
附录2
培养基测试记录
培养基名称
温度
管数
测试结果
实验人
复核人
第一天
第二天
第三天
附录3
测试菌培养观察记录
测试菌名称
温度
管数
生长情况
实验人
复核人
附录4
测试菌计数记录
测试菌名称
管号
结果（2×107个/ml）
平均值（2×107个/ml）
实验人
复核人
附录5
测试菌稀释记录
测试菌名称
管号
记数结果
稀释倍数
稀释菌含量
实验人
复核人
附录6
灵敏度观察记录
测试菌名称
管号
温度
观察结果
实验人
复核人
第一天
第二天
第三天
第四天
第五天
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