扫描电镜制样
扫描电镜常规制样方法 方法一:植物叶片单固定扫描电镜制样方法
1( 取材
将叶子切成5-10mm长方形6-10片。
2( 固定
放入2.5%戊二醛+2%多聚甲醛固定液中进行抽气(样品无气泡产生,全部沉
于底部即可),固定12小时以上。
3(脱水
用乙醇逐级脱水30%?50%?70%?80%?90%乙醇,每20 分钟更换一次
(70%以前放置4?C冰箱内), 100%乙醇每20分钟一次,共5次(70%乙醇
以后放置室温脱水)。
4. 替换
将乙醇倒掉,换叔丁醇,每20分钟一次,共5次。第5次浸过样品即可,放
置冰箱冷冻层(-20?C左右)30分钟或过夜。
5. 干燥
用JFD-310冷冻干燥仪进行干燥。
6. 粘台
将上下
表
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皮分别粘在具有双面胶带的样品台上。
7. 镀膜
用JFC-1600离子溅射镀铂金膜厚约10nm。
8. 观察并拍照
利用JSM-6360LV扫描电子显微镜进行观察并拍照。 注明:此方法适合植物根、茎样品
方法二:植物叶片单固定扫描电镜制样方法
1. .取材
将叶子切成5-10mm长方形6-10片。
2预固定
放入2.5%戊二醛+2%多聚甲醛固定液中进行抽气(样品无气泡产生,全部沉
于底部即可),固定12小时以上。
3( 冲洗
0.1M磷酸缓冲液进行冲洗3次,每40分钟一次。 4(双固定
用1%四氧化锇(OsO4)进行固定2.5-3小时。 5(冲冼
0.1M磷酸缓冲液进行冲洗3次,每5分钟一次。 6(脱水
7. 用乙醇逐级脱水30%?50%?70%?80%?90%乙醇,每20 分钟更换一次
(70%以前放置4?C冰箱内), 100%乙醇每20分钟一次,共5次(70%乙醇
以后放置室温脱水)。
8. 替换
将乙醇倒掉,换叔丁醇,每20分钟一次,共5次。第5次浸过样品即可,放
置冰箱冷冻层(-20?C左右)30分钟或过夜。 9. 干燥
用JFD-310冷冻干燥仪进行干燥。
9(粘台
将上下表皮分别粘在具有双面胶带的样品台上。 10.镀膜
用JFC-1600离子溅射镀铂金膜厚约10nm。 11. 观察并拍照
利用JSM-6360LV扫描电子显微镜进行观察并拍照。 注明:此方法也适合根、茎
注明:此方法适合植物根、茎样品
方法三:花粉扫描电镜直接观察制样方法
1. 将花粉直接粘在具有双面胶带的样品台上。 2.用JFC-1600离子溅射镀金膜约10nm。
3. 利用JSM-6360LV扫描电子显微镜进行观察并拍照。
注明:此方法适合植物花粉自身干燥,无分泌污染物。
方法四:花粉扫描电镜单固定制样方法
1. 取材
将花粉拨到1.5ml离心管中。
2. 固定
放入2.5%戊二醛+2%多聚甲醛固定,固定12小时以上。 3. 冲洗
0.1M磷酸缓冲液进行冲洗3次,每40分钟一次。 4(脱水
用乙醇逐级脱水30%?50%?70%?80%?90%乙醇,每10 分钟更换一次
(70%以前放置4?C冰箱内), 100%乙醇每10分钟一次,共5次(70%乙醇
以后放置室温脱水)。
5. 替换
6. 将乙醇倒掉,换叔丁醇,每10分钟一次,共5次。第5次浸过样品即可,放
置冰箱冷冻层(-20?C左右)30分钟或过夜。 7. 干燥
用JFD-310冷冻干燥仪进行干燥。
9(粘台
将花粉涂上双面胶带的样品台上。
10.镀膜
用JFC-1600离子溅射镀铂金膜厚约10nm。 11. 观察并拍照
利用JSM-6360LV扫描电子显微镜进行观察并拍照。
注明:此方法适合植物花粉野外采集固定(FAA)样品
方法五:蜡叶标本花粉扫描电镜制样方法
1. 将花粉或花药放至1.5ml离心管中,加入冰醋酸,浸泡12小时。 2. 用镊子将花药全部捣碎,离心4分钟将上清液倒掉。
3. 加入1:9(硫酸:醋酸酐),放置金属水浴100?,5-15分钟(时间长短跟
据花粉外壁污染轻重而定)。
4. 再次离心倒掉上清液,加入纯水清洗三次以上,每次经过离心。 5. 加乙醇30%,50%,70%,每级乙醇进行超声波5分钟,离心4分钟。 6. 花粉直接滴台,自然干燥后,用JFC-1600离子溅射镀铂金膜厚约10nm。 7. 利用JSM-6360LV扫描电子显微镜进行观察并拍照。
方法六:蜡叶标本种子扫描电镜制样方法
1. 用95%乙醇直接清洗种子,用毛笔将种子外壁轻轻刷干净。 2. 种子放在滤纸上自然干燥。
3. 干燥后种子直接粘在双面胶带的样品台上。
用JFC-1600离子溅射镀铂金膜厚约10nm。 4.
5. 利用JSM-6360LV扫描电子显微镜进行观察并拍照。
注明:此方法适合干燥种子、昆虫。