拟南芥愈伤组织诱导试验

拟南芥愈伤组织诱导试验 摘要 拟南芥外植体在MS培养基和不同的激素组合下都能不同程度地形成愈伤 组织并进一步形成植株。不同浓度的激素组合诱导拟南外植体形成芥愈伤组织的 效率不同。1.5mg/L6-BA和0.01mg/LNAA、0.5mg/L6-BA和0.1mg/LIAA、2.0mg/LZT和0.2 mg/LNAA、1.5mg/LZT和 0.2mg/LIAA的激素组合诱导出愈伤组织的效率最高。 关键词 愈伤组织 拟南芥 MS培养基 Arabidopsis callus induction test Abstract Arabidopsis explants on MS medium with different hormone combinations can be formed in varying degrees, the formation of callus and further plants. Combination of different concentrations of hormone induction of the Arabidopsis mustard explants callus formation efficiency of different.1.5mg/L6-BA and 0.01mg/LNAA, 0.5mg/L6-BA and 0.1mg/LIAA, 2.0mg/LZT and 0.2 mg / LNAA, 1.5mg/LZT and 0.2mg/LIAA combination hormone induced callus the most efficient organization. Key words callus Arabidopsis MS medium 拟南芥(Arabidopsis)又称鼠耳芥，是十字花科拟南芥属植物，它有许多生态变 种, 有很短的生命周期(5—6周) , 染色体数目少, 其单倍体基因组约为7 x 1) 碱基对, 在高等植物中是最小的,主要分布在亚洲、非洲和欧洲，我国华东、中 南、西南及新疆也有分布，有许多生态型。作为植物发育生物学和分子生物学研 究的重要模式材料，在国际植物发育生物学研究和植物分子生物学领域的突破性 进展中，拟南芥扮演了十分重要的角色。开展拟南芥的植株再生和悬浮细胞系培 养工作具有重要的意义。 因此长期以来一直是植物细胞遗传学研究的经典模式材料同时也是植物胚 胎学的重要研究对象。近年来植物学家对拟南芥菜进行了广泛的人工诱变, 分离 和鉴定出各种各样的突变体, 在分子水平上研究其基本生命现象、发育和分化、 形态发生和遗传传递等 拟南芥菜的组织培养、细胞培养已有报道但多是做为基因转化的基础研。对 于其愈伤组织的起源、增殖和再分化的研究却不多见本文的目的是通过细胞形态 学方法来研究愈伤组织的诱导和植株再生过程。 1(材料与方法 1.1 材料 野生型拟南芥叶片; 萘乙酸(NAA )、6-苄基腺嘌呤( 6-BA)、生长素(IAA) 玉米素(ZT)、蔗糖、琼脂粉等试剂。 1.2 方法 1.2.1拟南芥愈伤组织诱导培养基 以MS培养基为基本培养基, 附加一定种类和质量浓度的激素。设置附加。将上述培养基调pH至5. 8, 121?灭菌20分钟。MS培养基及不同培养基的激素浓度配比分别见 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 1和表2。 表1:Ms基本培养基组成 分类 药品名称 含量(mg/L) 硝酸钾 1900(mg/L) 硝酸铵 1650(mg/L) 大量元素 硫酸镁(七水合) 370(mg/L) 氯化钙(二水合) 44 0(mg/L) 磷酸二氢钾 170(mg/L) 铁盐 硫酸亚铁(七水合) 27.8(mg/L) EDTA-,,盐 37.3(mg/L) 硫酸锰(四水合) 22.3(mg/L) 钼酸钠(二水合) 0.25(mg/L) 硼酸 6.2(mg/L) 微量元素 硫酸锌(七水合) 8.6(mg/L) 硫酸铜(五水合) 0.025(mg/L) 碘化钾 0.83(mg/L) 氯化钴(六水合) 0.025(mg/L) 肌酸 100(mg/L) 烟酸 0.5(mg/L) 有机元素 甘氨酸 2(mg/L) 有机元素 维生素B6 0.5(mg/L) 维生素B1 0.1(mg/L) 碳源 蔗糖 30(g/L) 琼脂 0.45% 表2:不同培养基激素种类及浓度配比 6-BA浓度NAA浓度(mg/L) IAA浓度(mg/L) 0 0.01 0.05 0.1 0.2 0 0.01 0.05 0.1 0.2 (mg/L) 0 0.5 1.0 1.5 2.0 ZT浓度NAA浓度(mg/L) IAA浓度(mg/L) 0 0.01 0.05 0.1 0.2 0 0.01 0.05 0.1 0.2 (mg/L) 0 0.5 1.0 1.5 2.0 1.2.2叶片处理 选取野生型拟南芥,用清水冲洗干净，在超净工作台内,用75% 乙醇消毒30s,用无菌蒸馏水冲洗5 次，然后用0.1%的升汞浸泡消毒8分钟，最后用无菌蒸馏水冲洗8次，或直接选用无菌培养的拟南芥。 1.2.3愈伤组织诱导 将处理好的拟南芥叶片用刀片切出伤口后置于愈伤组织的诱导培养基上, 每个培养瓶接种3片，每种浓度组合做3组平行实验。放入光照培养箱中在25?温度条件下光照培养。待培养2周后, 观察愈伤组织状态, 统计不同培养基中, 不同浓度激素配比的拟南芥愈伤组织的诱导率、生根率和长苗率。 2实验结果与分析 2.1实验结果 培养两周后，观察愈伤组织诱导情况，并统计不同培养基中,不同浓度激素配比的拟南芥愈伤组织的诱导率、生根率和长苗率。统计结果分别如表3-5所示。 表3 拟南芥愈伤组织的诱导率统计结果(%) 6-BA浓度NAA浓度(mg/L) IAA浓度(mg/L) (mg/L) 0 0.01 0.05 0.1 0.2 0 0.01 0.05 0.1 0.2 0 0 33 33 33 33 0 0 0 0 0 0.5 67 33 33 100 67 11 0 0 11 0 1.0 33 0 0 0 0 22 11 0 0 0 1.5 67 67 33 33 0 0 0 0 0 0 2.0 33 33 0 33 0 22 0 0 0 0 ZT浓度NAA浓度(mg/L) IAA浓度(mg/L) (mg/L) 0 0.01 0.05 0.1 0.2 0 0.01 0.05 0.1 0.2 0 0 0 0 0 0 0 11 11 11 22 0.5 11 11 0 0 0 0 0 11 22 0 1.0 0 0 0 11 11 0 0 0 11 11 1.5 11 11 11 0 11 0 0 0 11 22 2.0 0 11 11 0 11 0 11 22 0 表4 拟南芥愈伤组织的生根率统计结果(%) 6-BA浓度NAA浓度(mg/L) IAA浓度(mg/L) (mg/L) 0 0.01 0.05 0.1 0.2 0 0.01 0.05 0.1 0.2 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0.5 0 0 33 0 0 0 0 11 11 0 1.0 0 33 0 0 33 0 0 0 0 0 1.5 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 2.0 0 0 33 0 33 11 0 0 0 0 ZT浓度NAA浓度(mg/L) IAA浓度(mg/L) (mg/L) 0 0.01 0.05 0.1 0.2 0 0.01 0.05 0.1 0.2 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0.5 0 0 0 0 0 0 0 0 11 11 1.0 0 0 0 11 11 0 0 0 0 0 1.5 11 0 11 0 0 0 0 0 0 11 2.0 0 0 0 0 0 0 0 11 0 0 表5 拟南芥愈伤组织的长苗率统计结果(%) 6-BA浓度NAA浓度(mg/L) IAA浓度(mg/L) (mg/L) 0 0.01 0.05 0.1 0.2 0 0.01 0.05 0.1 0.2 0 67 0 67 33 0 0 0 0 0 0 0.5 0 33 67 67 33 0 0 0 0 0 1.0 33 0 0 33 67 0 0 0 0 0 1.5 0 0 67 0 0 0 0 0 0 0 2.0 0 33 0 33 33 0 0 0 0 0 ZT浓度NAA浓度(mg/L) IAA浓度(mg/L) (mg/L) 0 0.01 0.05 0.1 0.2 0 0.01 0.05 0.1 0.2 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0.5 0 0 0 0 0 0 0 0 11 11 1.0 0 0 0 11 11 0 0 0 0 0 1.5 11 0 11 0 0 0 0 0 0 11 2.0 0 0 0 0 22 0 0 11 0 0 诱导的叶片、诱导的愈伤组织，愈伤组织长出的苗，诱导的根分别如下图1-4所示: 图1 诱导的叶片 图2 诱导的愈伤组织 图3 愈伤组织长出的苗 图4 诱导的根 2.2结果分析与讨论 由上面统计结果可知:1.5mg/L6-BA和0.01mg/LNAA、0.5mg/L6-BA和0.1mg/LIAA、2.0mg/LZT和0.2 mg/LNAA、1.5mg/LZT和 0.2mg/LIAA的激素组合可以诱导出较多愈伤组织。1.0mg/L6-BA和0.2mg/LNAA、0.5mg/L6-BA和0.1mg/LIAA、1.0mg/LZT和0.1 mg/LNAA、2.0mg/LZT和 0.05mg/LIAA能诱导组织生根。0.5mg/L6-BA和0.1mg/LNAA、2.0mg/LZT和0.2 mg/LNAA、1.5mg/LZT和 0.2mg/LIAA能诱导组织长苗。 本次实验结果显示在培养过程中大部分拟南芥叶片组织死亡，分析原因可能是实验用的叶片太嫩，在消毒处理时处理时间过长，大部分叶片被杀死，因此部分拟南芥在培养中没有诱导出愈伤组织。 3 参考文献 【1】黄百渠.拟南芥菜种子贮藏蛋白性质的鉴定.植物学报。 【2】列格鲁基乌(罗)(汪健菊译).拟南芥菜离体器官形成—一种模式系统.国外 遗传育种。 【3】陆文棵(2002)花叶千年木愈伤组织直接再生花芽。Acta Botanica sinica， 44:113—116。 【4】庞基良，林波，梁海曼(1994)几种生长调节剂对离体培养黄瓜子叶直接开 花的作用(简报)。植物生理学通讯，30:185(188。 【5】厉秀茹, 王今朝, 崔海英.低温及碳源对拟南芥菜胚愈伤组织诱导和植株再 生的影响[J].北京农学院学报,1 9 9 7,1 2 (3):1-6.