柱层析分离容量法测定甜菊甙

菊科植物甜叶菊叶子中含有丰富的甜菊甙，是食品工业天然无毒的甜昧添加剂原料，并具 有治疗糖尿病 的药效。关于其糖甙含量的测定，国内外报导的有薄膜扫描法、液相色谱法、气相 色谱法、薄层层析法和重量法 未曾见到应用柱层析分离，容量法测定的 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 。鉴于薄膜扫描、 液相 色谱、气相色谱等仪器分析虽然快速 、准确 ，但因仪器昂贵使一般普通实验室或基层单位 难以应用 ；而重量法测定虽然一般实验室也可应用分析 ，但仍以其手续繁琐、费时，相对误差较 大等缺点 ，也不是普通实验室理想的测定方法。因此我们研究采用中性氧化铝作柱层析分离， 容量法测定甜菊甙含量的方法，既具有能快速、准确地进行测定，分析结果与菠层扫描法相一 致·同时还具有测定仪器简单、试剂易得 ．普通化学分析工作者都能掌握使用 ，测试成本低等优 点，是普通实验室较理想的方法。在工农业生产中，对品种选育和产吕质量控制都有一定的实 用意 义。 一 、 测定原理 甜叶菊叶子含有丰富的糖甙能溶于水，在用水浸提过程中其他大量的叶绿素、树脂、腊质 、 蛋白质等杂质也随之溶于水中．使之不能用容量法直接进行测定，故必须对其水提取液进行分 离纯化。我们采用提取液用醋酸铅沉淀后 ，通过中性氧化铝层析柱，得到澄清纯度较高的甜菊 甙水溶液。再经加酸水解成为配基异掏体。此配基异构体是一种不溶于水的甾酮酸 ．它除 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 现 揍基的特性外，还有羧基的 显酸性。因此可将 甾酮酸溶解于 乙醇中(见下列反应式)，最后用 0 DSN NtOH 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 溶液进行滴定，酚酞作指示剂，终点显粉红色。计算求出甜蒲甙的含量。 O一&一矗 cH； №s 瘩 球自卑 ◇。 一 r，、 ∞ 。 c^ooHA 口 +5 +H 0 二 、仪 器 、试剂及原材料 uV—— 260紫外分光光度计 甚析住 J-2emL2 0~m(可厢 jmI直开三移液管截击滴管头部改制)。 维普资讯 http://www.cqvip.com 抗州食品科技 1995年第 2期总第 37期 真空泵 ：在缓冲瓶上安装三通活塞和压力表．控制直空度。 l0 H2SO． 10，《Pb(AC)： 0．1 酚酞指示 剂 中性氧化铝吸附剂 ；分析纯中性氧化铝在 200"C烘 2小时活化，放在干燥器中冷却备用。 基准甜菊甙制备 ：将甜菊甙样品(温州第二制药厂产品，含糖甙 80 左右)，用热 甲醇溶 解，冷却至室温 ，开始析出甜菊甙结晶．然后过滤，再用甲醇洗涤至得白色结晶．经真空干燥后 得到甜菊甙纯样品 将纯品水溶液在 uV——260紫外分光光计紫外区扫描．即在渡长 208nm 处有一最大吸收值 ．与有关资料报导相一致(注 1) 并用该纯品配制系列标准溶液 ，选择波长 为 208nm，利用 uv—— 260紫外分光光度计测定并绘制标准曲线(详见衷 --)．其相关系数为 0．9995．达到预期的要求。 表 1 甜菊甙标准曲线表 甜菊甙浓度(ug／n-,1) l0 20 30 40 50 60 吸光度 0．051 0．O98 0．1 44 0．1 88 0．235 0．280 K= 2．1493 B= 一 0．0068 R= 0．9995 原材料：本省新昌县甜叶菊试验基地大面积种植的品种．60℃烘干粉碎备用。 三、测定方法 l、甜萄戒样品的提取： 准确称取甜叶菊样 品2克于 250毫升有迥魂装置的锥形瓶中，每次加水 30rrd在沸水浴上 迥流提取半小时．将每一样品滤液全部集中在同一烧杯中，浓缩至 30ml，趁热慢慢加入 10 Pb (Ac)：4n-,1，使沉淀老化一小时后用滤纸过滤．用热水洗涤沉淀 1—5次，再将滤液浓缩至 30ml。 2、柱 层析 分 离： 用少量脱脂药棉塞在层析管底部，上盖一层滤纸，并用少量水湿润。然后用水调成糊状的 氧化铝立酃加入拄中 ．至吸附高度为 lO厘米为止．并在液层上部盖一层滤纸．再接在真空泵 上，把上述已处理的滤渡全部移入层析管中，根据滤液速度逐渐增大真空度。待提取液几乎全 部进入氧化铝时．连续用热水洗涤层析管，使甜菊甙随热水一起流入 500ml抽滤瓶中，每次 l 0m1．洗 |一5次 ．最后把全部滤液移入 250ml锥形瓶中．浓缩至 30m1．再加入等体积的 l0％ H2SO．在水浴上通流水解 1．5小时，放冷过滤 ，滤渣用水}申洗，洗至滤液近中性(PH值 6—6．5) 为止．彝去滤液。 3、容 量法测定 ： 将上述滤渣用 95 乙醇溶解在 250ml锥形瓶中．洗净后将滤纸一起移入瓶中．(约 60m1)． 加 0．1 酚酞指示剂 5—6滴，用 0．05N N．OH标准液蒲定 ．至溶液显粉红邑半分钟不褪色为终 点 。 1、计算 甜菊甙总 含量 ：— NV L ~0 — 5 0 。。 N——N．OH标准溶液当量浓度 V——消耗 N．OH标准溶液的体积 (毫升) 维普资讯 http://www.cqvip.com 抗州食品科技 [995年第2朝总第 37期 805——甜菊甙分子量 w—— 甜菊甙的重量 (克) 四、测定结果和讨论 I、回收率测定 结襄； 我们采甩本方法测定回收率，一方面以精制糖甙为基准测定回收率，另一方面在精翩糖甙 中加入佯品，同时测定回收率。重复三次，每次均设平衡样，取其平均值(详见表 2)。 表 2 回收率测定结果 佯品用量《克， 耱甙含量理论值( ) 糖甙音量涮定值( ) 回收率( ) 精制耱甙 甜菊叶样品 精制糖甙 甜菊叶样品 精制糖甙 甜菊叶样品 精制糖甙 甜菊叶样品 0．】983 95．44 o．I 992 10O．OO 9 B．d2 97．04 O．2000 99．27 0+l005 I 0003 】 32 0．i002 1．0002 1OO．00 J3．71 97．04 J3．21 97．04 96．35 O．】007 1．0005 l3．】0 甜菊叶糖甙含量以薄膜扫描法测定值为基准，按 13．71 计算 。由表可知，不论样品或精 制品，其回收率均在 95 以上 ，获得较满意的结果。 2、不同方 法测定结 景； 我们选用同一洋品分别采取薄膜扫描法，重量法和本法等三种不同方法测定其糖甙含量 ， 其中薄膜扫描法由江苏省植物研究所帮助测试，作为该实验的标准方法测定的甜菊甙含量与 薄膜扫描 相一致 ．分析精度、准确度都 比重量法高，并具有测定方法比重量法简单方便，快 速 ．分析试剂成本较低等优点 ，是普通实验室测定甜菊甙较理想的方法 。 3、中性氧化铝作层析柱的作硐： 由于甜菊甙水提取液中的色素、蛋白质 、腊质等杂质在采用 (Ac)z沉淀过滤后 ，溶液中 仍有许多邑素等杂质 ，干扰容量法测定，使滴 定终点无法观察掌握。选用中性氧化铝作吸附剂 后．由于氧化铝对杂质吸附性强、而不吸附甜叶菊搪甙，使甜菊甙水提取液通过层析柱后，层析 清晰 ．甜菊甙与其他杂质分离完全 ，解决丁滴定终点难以掌握的难题，促使容量法在甜菊甙测 定中的应用．弥补了其他方法不足之处．提高了分析精度和准确度，获得满意结果。 表 3 不同方法测定甜菊甙含量结果表 项 目 薄膜扫描法 重量法 柱层析、容量法 甜菊糖甙含量测定值 13 ． 17 l 4．87 l 4．92 l5．75 l 3．9O l3．57 l 3．d2 ( ) l1．70 15．34 14．22 l 3．35 l 3．35 l3+64 甜菊糖含量平均值( ) l 3．i7 l d．88 l3．5d 相对偏差 ( ) ≤1．44 ≤2．66 极 差(? ) 1．12 D．55 标准差(S) 0．d045 O．2l3l 变异系教(CV 0．27l 8 0．OI574 注 ；江 苏省 植物 研 冤所 黄 应森 、郭夏桂等 同志 帮助 硐薄膜扫描法剥试甜 萄叶标 准样 谨 致 谢意 ： 维普资讯 http://www.cqvip.com