分子生物学常用母液的配置
方法
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(1)0.5M EDTA,PH=8.0
往175ml超纯水中加入46.525克Na2EDTA 2H2O,然后加入10克的NaOH,在磁力搅拌器上溶解,用酸度计测量PH值,根据PH值决定再次加入NaOH的量,直至调节PH值至8.0,然后定容至500ml,灭菌后贮存备用。
(2)1M Tris-Hcl, PH=8.0
在160ml超纯水中加入24.2克的Tris碱,然后用浓盐酸调PH值至8.0(约需8.4ml的浓盐酸),最后用超纯水定容至200ml。(用酸度计测PH值)。灭菌后贮存备用。
(3)TE缓冲液(10mM Tris-Hcl, PH=8.0;1 mM EDTA,PH=8.0)
配置100 ml溶液需加入:
①1M Tris-Hcl, PH=8.0 1.0ml
②0.5 M EDTA,PH=8.0 0.2 ml
③超纯水98.8 ml
灭菌后贮存备用。
(4) 5M Nacl
称146克Nacl 溶于400 ml 超纯水中,然后用超纯水定容至500 ml。
(5) 3.0 NaAc,PH=5.2
称24.6克乙酸钠,溶于70 ml超纯水中,然后用冰乙酸调PH值至5.2,最后定容至100 ml。(6)5M KAc
在50 ml 超纯水中溶49.1克的KAc,然后定溶至100 ml。
(7) 2%CTAB提缓冲液(用于DNA提取)
①1M Tris-Hcl, PH=8.0 20 ml 100 mM
②0.5 EDTA,PH=8.0 8 ml 20 mM
③5M Nacl 56 ml 1400 mM
加入CTAB 4克,水浴(65℃)或用磁力搅拌器加热溶解,冷却至室温后定容至200 ml。
灭菌后备用。
(8)氯仿/异戊醇(24:1)
氯仿96 ml
异戊醇4 ml
(9)SDS法提取DNA缓冲液(现用现配)配40 ml (最后定容至40 ml)
母液量终浓度
①1M Tris-Hcl, PH=8.0 4ml 100 mM
②0.5 EDTA,PH=8.0 4ml 50 mM
③5M Nacl 1.2 ml 150 mM
④10%SDS 8 ml 2%(V/W)
⑤巯基乙醇30~800μl 0.07~2%(v/v)
(10) 10%SDS 溶于80 ml 无菌超纯水中,然后定溶至100 ml。
(11)电泳加样缓冲液(6×)(0.1%溴酚蓝;30%甘油)。使溴酚蓝充分溶解后,于4℃保存。
(12)1×TBE :54gTris ,27.5g硼酸,20 ml 0.5 M PH=8.0 的EDTA,定容到1L,然后加4L蒸馏水。
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