KOD-Plus
kod,plus,是世界最高保真水平的pcr酶 。kod酶是toyobo(东洋纺)公司专利产品，在国际上享有盛誉。2005年nature报道反应速度最快的pcr酶。toyobo根据pcr反应的不同要求制成kod,plus,及kod dash，成为新时代的
标准
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酶，也是公司的招牌产品。
该酶是以从鹿儿岛县小宝岛的含硫气孔中分离出来的超嗜热原始菌Thermococcus kodakaraensis KOD1由来的KOD DNA polymerase
为基础开发的高保真性PCR用酶。在本公司的PCR酶中保真性最高。最适用于克隆。
特征
?最适合于克隆反应，具备超群的准确性
kod dna多聚酶的特点是具有很高水准的准确性，而kod-plus的准确性则有了更大的提高，具有taq dna多聚酶82倍左右的pcr可信度，最适合于克隆。
?通过热启动pcr，提高了pcr的性能
通过采用两种抗kod单克隆抗体，抑制了pcr反应前常温状态下的多聚酶活性和3`?5`核酸外切酶活性。不需其他特殊操作即可进行热启动pcr。抗体的阻断作用在94?、2分钟预热下即发生失活，不需要冗长的变性步骤，实现了高特异性 的pcr反应。
?伸长性、扩增效果的提高
对pcr反应缓冲液的组成进行了最优化重组，使之较以往的kod dna多聚酶相比伸长性及扩增效果均有所提高，可对更多种类的目标物进行pcr反应。
?超群的耐热性
因来源于超嗜热原始菌，其耐热性比taq dna多聚酶还要高，在100?、1小时的热处理候仍可保持约70%的活性。故可以将热变性步骤的温度设定提高，对gc含量高的
模板
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等具有特异性高级结构的样品非常有利。
用途
?pcr
因准确性高，特别适用于pcr产物的克隆。另外，由于通过抗体法实现热启动反应，所以能够轻松简便地实施高特异性的pcr反应。伸长性、扩增效率也很高， 可以进行更多种类目标物的pcr反应。
Memo? 关于Polymerase
应用于PCR的DNA polymerase大致可分为2大类。一类是从嗜热菌中分离出来的被称为pol?型的聚合酶，以Taq、Tth DNA polymerase
为代表。另一类是从超嗜热Archaea(古生菌)中分离出来的被称为α型的聚合酶，KOD、Pfu DNA polymerase属于该类。α型酶具有pol?型酶所没有的3'?5核酸外切酶活性。该活性被称为Proof-reading(校正)活性，与PCR的保真性有着非常深厚的渊源。KOD DNA
，表现出很高的保真性。但具备polymerase利用该Proof-reading活性
该活性的酶一般被认为对PCR反应效率有不好的影响。KOD -Plus- Neo通过应用新的延伸增强剂、热启动法、以及Buffer组分的改良，大大提高了PCR效率。
Memo? 什么是热启动,
在室温条件下配制PCR反应溶液时，配制过程中聚合酶会开始反应。在室温下由于引物的特异性降低，很容易产生非特异性反应等副反应。另外，KOD DNA polymerase具有很强的3'?5'核酸外切酶活性(Proof reading活性)，这也是产生副反应的原因之一。热启动法是指在高温阶段，激活聚合酶活性的方法，迄今为止已有好多种方法。其中最严格的是使用中和抗体的方法。KOD -Plus-和KOD -Plus-Ver.2中由于混合了抗KOD DNA polymerase抗体，在常温状态下可完全抑制聚合酶的活性。而该抑制作用在PCR的预变性阶段完全失活，对PCR没有任何影响。
kod plus高保真酶 怎么加A尾巴,
方法一:直接加0.5ul Taq，70度，10min 即可，但是这种方法效率较低，但是简单，快速。
方法二:PCR产物，切胶回收，浓缩后加10*PCR buffer 1ul， dATP (2mM) 1ul， Taq 0.5ul， 加水至补充体积至10ul，70度 20-30min即可
浙公网安备 33021202002483