土壤酸性磷酸酶活性测定
土壤有机磷转化受多种因子制约,尤其是磷酸酶的参与,可加速有机磷的脱磷速度。在pH 4-9 的土壤中均有磷酸酶。积累的磷酸酶对土壤磷素的有效性具有重要作用。研究证明,磷酸酶与土壤碳、氮含量呈正相关,与有效磷含量及pH也有关。磷酸酶活性是评价土壤磷素生物转化方向的强度的指标。
磷酸苯二钠比色法
试剂配制
(1)0.5%磷酸苯二钠(用缓冲液配制)。
pH5醋酸盐缓冲液。
a.醋酸盐缓冲液(pH=5.0)
A:0.2mol/L 醋酸溶液(11.5mL,稀释至1000mL)
B:0.2mol/L 醋酸钠溶液(16.4g C2H3O2Na 或27.2g C2H3O2Na·3H2O 定容至1000mL)
14.8ml A + 35.2ml B混合即得
氯代二溴对苯醌亚胺试剂:取0.125g 2,6-二溴苯醌氯酰亚胺,用10ml 96%乙醇溶解,贮于棕色瓶中,存放在冰箱里。保存的黄色溶液未变褐色之前均可使用。
酚的标准溶液:
酚原液——取1g重蒸酚溶于蒸馏水中,稀释至1L,贮于棕色瓶中。
酚工作液——取10ml 酚原液稀释至1L(每毫升含0.01mg酚)。
甲苯。
0.3%硫酸铝溶液。
标准曲线绘制:取1、3、5、7、9、11、13ml 酚工作液,置于50ml容量瓶中,每瓶加入5ml 缓冲液和4滴氯代二溴对苯醌亚胺试剂,显色后稀释至刻度,30min后比色测定。以吸光度为横坐标,浓度为纵坐标(mg)绘成标准曲线。
操作步骤
称5g风干土置于200ml三角瓶中,加2.5ml 甲苯,轻摇15min后,加入20ml 0.5%磷酸苯二钠(用醋酸盐缓冲液配制),仔细摇匀后放入恒温箱,在37℃下培养24h后于培养液中加100ml 0.3%硫酸铝溶液并过滤。
吸取3ml 滤液于50ml 容量瓶中,然后按绘制标准曲线所述
方法
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显色。用硼酸缓冲液时,呈现蓝色,在分光光度计上于660nm 处比色。
结果计算
磷酸酶活性,以24h后1g土壤中释出的酚的毫克数
表
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示。
酚(mg)=a*8
式中 a—从标准曲线上查得的酚毫克数
8—换算成1g 土的系数