动脉血栓模型建立的方法学研究

动脉血栓模型建立的方法学研究 中国医学影像技术2007生箜鲞筮塑巴兰兰!!!:!!!:! Methodologicalstudyonmakingarterythrombusmodel ?13? XIAHong-mei.GAOYun-hua,BIANAi一,m,LIUPing,LIUZheng (DepartmentofUltrasound.XinqiaoHospital,theThirdMilitaryMedicalUniversity,Chongqing400037'China) [Abstract]0bjectiveTosetupakindofarterialthrombusmodelwhichadaptstoultrasonicevaluation.MethodsThe methodsincludingFeC13erosion(groupA),regionalthrombininjection(groupB)andphysicsextrusioninjuryofendotheli— um(groupC)wereusedin25rabbits.ResultsThrombusinabdominalarterywasmadeingroupsAandBsuccessfully. ObstructthrombusinfemoralarterywasmadeingroupCwhilenotinitsabdominalartery.ConclusionThetypeof thrombusresultedfromFeC13erosionismixedpattern,whichiSsimilartospontaneousthrombusinclinic.Itisconduceto reachreliabilityofdiagnoseandtherapeuticsexperimentinthrombi. [Keywords]Arterialthrombus;FeC13}Animals,laboratory 动脉血栓模型建立的方法学研究 夏红梅,高云华,卞爱娜,刘平,刘政 (第三军医大学新桥医院超声科,重庆400037) [摘要]目的建立一种简单,快速而又适合超声 评价 LEC评价法下载LEC评价法下载评价量规免费下载学院评价表文档下载学院评价表文档下载 的动脉血栓模型.方法25只新西 兰大白兔,分为3组,分别采 用FeC1.化学腐蚀法(A组),注入凝血酶法(B组)及动脉钳夹+挤压血管外膜法(C组) 建立动脉血栓模型.结果A组及 B组实验兔均成功建立腹主动脉血栓模型.C组兔股动脉梗阻性血栓模型成功建 立,但实验段腹主动脉未见血栓形成. FeCl.腐蚀法形成的血栓为一种混合型血栓.结论FeC1.诱发的血栓模型可靠,形成简便,快捷,结构更接近于临床白发 性血栓形成的组织学形态特征,有助于血栓症诊断与治疗实验的科学性和可信性. [关键词]动脉血栓}三氯化铁;动物,实验 [中图分类号]Q95—3;R445.1[文献标识码]A[文章编号]1003—3289(2007)01—0013—04 建立体内动脉血栓模型的方法有多种,基于本研究的设 计目的,形成的血栓至少需要满足两个条件,一是血栓的组织 结构类似于人类临床白发性血栓,二是非梗阻性,即不堵塞动 脉管腔,利于造影剂的循环与超声显像观察.因此,为建立合 适的动脉血栓模型,我们在方法学上进行了一些探索. 1材料与方法 1.1实验动物新西兰大白兔25只,雌雄不限,体重2.1, 2.6kg,由本院动物室提供. 1.2实验试剂与仪器速眠新麻醉剂,由本院动物室提供; 三氯化铁(FeC1.),购白重庆市化学试剂公司;凝血酶,石蜡 油,动脉夹等;超声仪器为GE公司Vivid7型超声诊断仪. 1.3实验方法将实验兔随机分为三组:FeC1.诱发组(A 组)15只,根据浸润时间另分为3小组:30min(A1组),50 [基金项目]本研究受国家自然科学基金项目资助(30500123). [作者简介]夏红梅(1970一),女,湖北人,博士,副主任医师.研究方 向:声学造影与心血管疾病超声.E-mail:xiahm_007@sina.corn [通讯作者]高云华,重庆第三军医大学新桥医院超声科,400037. E-mail:xqgaoyh(~yahoo.corn.cn [收藕日期]2006—09—23[修回日期]2006—1卜22 min(A2组),80min(A3组)三个时间段各5只;注入凝血酶 组(B组)5只;动脉钳夹+挤压组(C组)5只. FeC1.诱发组:用速眠新对实验兔进行肌肉麻醉(0.2 ml/kg).耳缘静脉建立静脉通道,仰卧位固定,剑突下腹正 中部脱毛,备皮.剑突下腹正中切口,打开腹腔,游离上段腹 主动脉约1.0cm,近端和远端各放置一根备用结扎线,在超 声图像上确定近端和远端结扎线的位置,获取该段血管的基 础状态超声图像(二维+彩色多普勒)并储存.然后,在该段 腹主动脉后壁放置一长约1.0cm的石蜡薄膜,在石蜡薄膜与 腹主动脉后壁之间放置一长约0.8cm的浸透了7OFeC1. 溶液的滤纸片],分别选取浸润时间为30min,50min,80 min三个时间段.获取各时间段该段血管的模型建立后超声 图像(二维+彩色多普勒)并储存. 注入凝血酶组:用速眠新对实验兔进行肌肉麻醉(0.2 ml/kg).耳缘静脉建立静脉通道,仰卧位固定,剑突下腹正 中部脱毛,备皮.剑突下腹正中切口,打开腹腔,游离上段腹 主动脉约1.0cm,近端和远端各放置一根备用结扎线,在超 声图像上确定近端和远端结扎线的位置,获取该段血管的基 础状态超声图像(二维+彩色多普勒)并储存.然后,以血管 夹夹闭约1cm的腹主动脉,再以注射器将10U凝血酶和 恸与模型建盘前红色屉瓶(图j?E 轻.模型建立后宴验段管l内流 由花乜的流信号血流柬变细 彩色多普勒往AI纽厦A2I实骑段 m管内均nf探硬花乜的黼汛号 (!).在A绁啦段lm管内倥- 探及少量呐血流信哆3)颛谱多 好勒:模型建正时l卜常兔腔{-动棣 血流颇c4)比较.在A】,A2组免 雀噎段眦篱瞳内科高速的札流惜 (5)在A3组兔验段血管腔洲 得低述,低幅的血流顺潜(圈6). 注人凝血府组;彩色多普袖在宴 啦段血管腔内术探豫血i】『c信号 ., , . 动怵钳夹十挤fl,纽彩色多勒 8. ,9在验段腹』动脉管胖内显月;血流信 目】R?J棋建DFl目目2口?l几DFl目号熳流速束发现'显蕾化但在动 目T...【蚯f?l蜡『致日jFelI,《?f日m&肺血管睦内探驶血溉信号c (nFIl目4验&t自血cPW)目目5Fc[I蒋:2z病理结构评价In1诱发 R自?m血桂tPW目惜显目6FeL'I诱验&:将宴蝓段腹主动脉纵行刨开.可见 ‰i自iPw.阻m5目1F^段}阻晴红色的附壁帆梓^1组附壁m柞 ? liem(2【】【,)目8m挤诱?臃血HEi.较少薄A2组l咐壁血栓约l据l, …',目9自*m*析自mH【?0,2/3的血管腔;A3组柠r姑几乎 整个血管腔光镜F证实为混型血 2mJ免自倬血混怂渡沣^浚段血管腔内iorain后获取枪.血栓结}句致密.町血管皮细胞连接点的分离及内皮细 浚段血管的模型建立后超市蚓像(维}彩色多咎勒'井储眦走向紊乱,胞浆脱落大量m小扳小形成l少量的山 存u细胞利红细胞(罔7) 动脉钳央挤压组用速眼新对贫验兔进行肌肉麻醉注^凝m酶组:血栓占据儿于偿个m臂膝光镜下见血 (02ml/)耳缘静脉建立静脉通道?仰卧位周定?剑突下拴结构松散. 为f色m栓. 腹巾部及右下肢脱毛?备皮剑突F腹正切口+打不腹动脉钳兜+挤压组:血性占据整个股动脉血管腔光镜 腔游离上段腹主动肚约lc】rm艘右侧胜动脉约10…分F证实为红色血栓.?I【栓结构较紧密(图8,9)腹主动脉内 男ll鹱皇动脉及般曲脉的近端和远端各放置一根备用结扎束见血栓J成 线-超声像上确定近端和远端结扎线的位置,获取波段血3讨论 管的基础状畚超声图像(二维+彩乜多普勒)并储存然后?3l关于动脉血栓动物模型建n打法的选择体内大血管 以血管史夹闭约lm的腹主动脉,股动脉?用于术平滠反复血栓形成动物模型的建立方法宵多种. 经典的动物动脉棒 挤压宴验段咖管壁t{h后获取饿殷管的模型建立后超声模犁制备方法为注人凝血酶法或损伤动脉内幢法本实 刳像<-维彩色客普勒)什储存a验埘建立适合超自造影研究的血性模型进行r探索研究笈 d病理检测将实验段动脉切片?蜡包埋,HF.染色后班沣^凝血酶方法虽然简单.但膨成的m结椅松散.太 进行检查符合人体临床自发性柞形成的组织学形态特征.钳吏结音 2结果局部持?协对较小的动脉可行.但对适合于超声观察的较大 2I动脉血栓模型建芷情况A组15只及B纠5只验兔的动脉则不太容易成功.口r能与大动脉内血流景较大,m流建 均成功建立腹主动脉血栓模刊其中?A3组和B组均为梗阻度较高有关球囊拉伤或管外膜直流电刺澈后.电可导 闭塞性血性?A1纽干?A2组却非梗阻性血栓致血管内膜内皮细胞受拉.馓活血液中血小饭濡发凝血过稗. c组5日兔股动脉桠性血栓模型成功建屯.但赛验段血栓形成成功卑:l壹高,但造些法均鞋为复杂而且.容易 腹土动脉丰见血栓形成控制血栓形成的大概程度. 22动脉血栓评价在针对血栓靶向趋声造影剂用于捧血栓显像研究前 22l超声评价FcCl羼发组二维趟声与模型建且前比本研究封儿种动脉血拴模型的建由法避行r筛选研究. 鞍,模型建后变验段血管管腔灾情晰?隐约可见附壁氘扮I~et:l诱导建立的动脉血 栓模型星一种混台型m傩.即血椎 回声?健轮廓清晰一m管后壁变粗糙?回声增强彩色多普的组喊包括纤维蛋白,激 活的血小板丑细胞这也是一 中国医学影像技术!生箜鲞箜塑!gg:!!:!!:! 种在猝死或急性心肌梗塞后的冠状动脉内发现的血栓模 型.而且,该方法形成的血栓结构致密,更接近于临床白发 性血栓形成的组织学形态特征,有助于以后溶栓实验的科学 性和可信性.实验结果显示这种模型可靠,形成简便,快捷, 血栓模型成功率100,而且可以控制血栓形成的大概程度. 显微镜下观察由FeC1.导致的内皮损伤包括内皮细胞连接点 的分离及内皮细胞走向紊乱,胞浆脱落,使得内皮下结构裸 露,导致血小板黏附与激活,纤维蛋白酶产生,血小板小梁形 成.而激活的血小板具有大量糖蛋白?b/?a受体 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 达,该 受体能与本实验所选择的肽类配体特异性结合,这一点可作 为靶向微泡渗入到血栓团块深面主要的理论基础. 根据文献报道口我们采用了70浓度的FeC1.溶液.在 浸润时间上分为30rnin,50rain,8Ornin三个时间段.在实验 中发现,时间太短(3omin)诱发的血栓太小,不足以到实验结 束时即会溶掉;而时间太长(80min)则会导致动脉管腔的闭 塞,不利于造影剂在管腔的流通与观察;FeC1.滤纸片浸润动 脉管壁50min较为适宜,形成的血栓约占据1/4,1/3的血 管腔,既有利于造影剂在管腔内流动,也有助于观察附壁血栓 的显影效果. 3.2关于动脉血栓模型的应用冠状动脉或外周动脉血栓 形成是各种疾病发生或死亡的主要原因.模拟人类疾病的动 物血栓模型的建立已广泛应用于抗栓或溶栓治疗研究]. 急性心肌梗死发病机制是冠脉内急性血栓形成,当冠脉 内膜受损,管腔痉挛和狭窄形成湍流等均可激活血小板,使其 黏附和聚集性增加,血小板黏附于受损内膜下的胶原上,通过 血小板间的相互作用而形成血小板聚集物,在纤维蛋白,红细 胞,白细胞等参与下形成血栓,激活的血小板又释放血栓素等 活性物质,反过来又促进血小板聚集和血管收缩,加速血栓形 成D].文献报道电刺激法,冠状动脉狭窄法以及冠脉内注入 药物法等均可诱发冠脉血栓形成致急性心肌梗塞.但多数方 法引起闭塞性冠脉血栓形成的时间很短(30min内),与人类 冠脉血栓形成的病理过程相距较远.傅良武等妇采用改良 的微电流刺激冠脉内膜方法诱发冠脉血栓形成致急性心肌梗 塞模型,为研究冠脉血栓形成,急性心肌梗塞和评价抗血栓药 物疗效提供了一个较理想的模型.研究表明,对于犬冠脉左 旋支,采用动脉钳夹,将冠脉血流量调至减少到峰流量的 30左右时,结合微电流刺激,以9V,160A直流电刺激冠 脉左旋支内膜,连续6h,成功建立冠状动脉血栓模型.病理 检查见所形成血栓呈条索状充满冠脉左旋支管腔,血栓弹性 好;左旋支内膜不规则,内皮脱落,内弹力板断裂,管腔内血栓 由血小板,白细胞,红细胞和纤维蛋白构成,类似于人类动脉 血栓. FeCl.诱发的血栓模型作为一种混合型动脉血栓模型被 广泛应用于鼠,兔等动物叭.由于铁的化学氧化作用,导致 内皮损伤,引起血小板的激活与黏附.血栓形成是一个凝血 酶原以及溶血系统共同作用的结果n.血小板在血栓形成 的开始阶段起到了最主要的作用.血小板在各种刺激因素的 作用下,其糖蛋白?b和ma结合形成?b/ma受体,并在细 胞膜上表达.纤维蛋白原,凝血因子,纤维粘连蛋白等通过精 ? 15? 氨酸一甘氨酸一门冬氨酸(RGD)系列连接到血小板糖蛋白 (GP)?b/ma受体上.所有激活剂激活血小板的最终生物途 径是粘连蛋白与GP?b/ma受体结合将相邻血小板连接成 一 个整体.血小板GP?b/llIa受体是血小板聚集,血栓形成 的最终共同途径.以往的文献报道所用FeC1.浓度都很 高,一般在10,70的范围,最近文献研究报道,成功诱 发鼠颈动脉血栓形成的FeC1.最低浓度阚值在2.5(时间范 围为10,60min).而且,血管闭塞的时间与FeC1.的浓度相 关,FeC1.浓度越高,动脉血管闭塞越快.但在观察抗栓药的 治疗效果方面就会越困难,因为需要提高抗栓药的浓度,但过 高的抗栓药浓度会导致机体正常的凝血系统破坏.因此,在 实验中掌握FeC1.适宜浓度也较为关键,特别是在观察溶栓 效果的实验中尤其重要.本实验中我们没有考虑这个方面, 主要是基于快速,有效形成血栓的原因.但在以后的靶向微 泡助溶实验中,我们将对这一问 题 快递公司问题件快递公司问题件货款处理关于圆的周长面积重点题型关于解方程组的题及答案关于南海问题 作进一步的探讨. [参考文献] E13KurzKD.MainBW.SanduskyGE.Ratmodelofarterialthrom— bosisinducedbyferricchloride[J].ThrombRes.1990,60(1):269— 280. 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