氨基酸的纸层析
生物化学实验报告
氨基酸的纸层析
一、实验目的
掌握氨基酸纸上层析的方法和原理，学会分析未知样品的氨基酸成分。
二、原理
滤纸层析是以滤纸为惰性支持物的分配层析，滤纸纤维上的羟基具有亲水
性，吸附一层水作为固定相，有机溶剂为流动相。有机相流经固定相支持物时，与
固定相之间连续抽提，使物质在两相间不断分配而得到分离。溶质在滤纸上的移动
速度用Rf值表示：
原点到层析斑点中心的距离
Rf ＝_______________________
原点到溶剂前沿的距离
物质结构、溶剂系统的物质组成等因素都会影响Rf值。 三、试剂和器材
1. 试剂
0.5%茚三酮溶液、标准氨基酸溶液
溶剂系统： 正丁醇－88％甲酸－水(15：3：2，V/V)
2. 器材
层析缸、毛细管、电吹风
四、操作步骤
1、取直径13cm圆形滤纸一张用铅笔过圆心做两条相互垂直的线，在距每条线上
距离圆心1cm处打点作记，作为点样处，并分别在其边缘上标上测、谷、对、丙
字样(注意：点样点要小，多次点样，吹干，混合氨基酸尤其要多点几次)。
2、用打孔器在滤纸圆心扎一小孔，（约3-5mm直径）另取滤纸条卷成筒状捻紧如灯心，后用毛细玻管分别蘸取测定液、谷氨酸、对照液、丙氨酸溶液各一小滴在滤
纸相应点样处点样。点样直径不超过3mm。
3、将捻紧的滤纸条从滤纸相应点样背面插入小孔，突出滤纸面约0.5mm。
4、加2.0ml层析溶剂于表面皿中，表面皿放在直径10cm的培养皿正中，将滤纸平放在培养皿上，使滤纸芯位于表面皿中央且浸入层析溶剂，取另一同样大小的培
养皿反向盖上。
5、待溶剂前沿距滤纸边缘3cm时，即可取出。用铅笔划出溶剂前沿后，用电炉烘
干。
6、将滤纸平方在培养皿上，喷雾0.1％茚三酮乙醇溶液，再用电吹风烘干。观察出
现的紫色弧形斑。计算各色斑Rf值。
思考题：
1. 什么叫做转氨基作用?
答：转氨基作用是氨基酸代谢中的一个重要反应。 在氨基转移酶（转氨酶）的
作用下催化某一氨基酸的α-氨基转移到另一种α-酮酸的α-酮基上生成相应的
氨基酸，原来的氨基酸则转变为α-酮酸。氨基转移酶广泛分布于机体的各个器
官、组织中。
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2.如何通过得到的弧形斑证明有丙氨酸的存在？ 答：不同的氨基酸具有各自独特的结构特点，它们在相同的层析溶剂中移动的速
度和距离主要取决于其本身的结构。通过滤纸上所得实验条带和样品条带离圆心
距离之间的比较，发现实验条带和丙氨酸所在条带处于同一个圆上，即离圆心的
距离相同，因此，得出实验组溶质里含有丙氨酸。 实验名称：血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳 实验目的：
1.掌握醋酸纤维膜电泳的基本原理及其临床意义；
2.熟悉电泳仪器的使用和操作。 试剂器材：
pH8.6巴比妥缓冲液，醋酸纤维膜，血清蛋白，染色液。
实验原理：
血清蛋白在pH8.6的巴比妥缓冲液中以负离子形式存在，
分子大小、形状各有差异。在电场作用下，可在醋酸纤维膜上
分离成。A、α1、α2、β、γ五条区带。电泳结束后，将醋酸纤
维膜置于染色液。使蛋白固定并染色，再脱色（洗去多余染
料）。将染色后的区带分别剪开，将其溶与碱液，进行比色测
定，计算各区带的百分数。
实验步骤：
1、准备与点样
1）将已充分浸透的醋酸纤维膜取出，用滤纸吸去多余的缓
冲液。在膜的无光泽面距一端处点样（膜不能折；在膜上标记
记号）。
2）用点样器蘸血清少许（不能看见有液滴形成），按在点
样处（点样要与膜边缘垂直，且大小均匀，点样条要细，点样
量要稍微多点）。
2、电泳
将膜无光泽面向下，点样端置于阴极，膜与电极紧密接触
（不能留有气泡），平衡5min。通电，电压100V时间1 h。
3、染色
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生物化学实验报告
电泳结束，将膜放入氨基黑10B染色，3min后取出，漂洗，反复几次，至背景漂净为止。用滤纸吸干薄膜。
06级生物科学2班
宋茜 40608064
刘芳 40608089
魏小丽 40608091
黄玮 40608095
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