微生物的接种和移种

实验1  微生物的接种和移种 一．实验目的 1.明确无菌操作在接、移种操作中的重要性。 2.能采用不同接种工具独立进行接、移种操作。   微生物接、移种操作是进行微生物实验和相关研究的基本操作技能。无菌操作是微生物接、移种操作的关键。由于培养基种类及实验器皿等不同，所用接种方法不尽相同。斜面接种、液体接种、固体接种和穿刺接种操作均以获得生长良好的纯种微生物为目的。因此，接种必须在一个无杂菌污染的环境中进行严格的无菌操作。由于接、移种方法不同，采用的接种工具也有区别，如固体斜面培养体转接时用接种环；穿刺接种时用接种针，液体转接用移液管等。 二  实验条件及器材 1 无菌室的准备 在微生物实验中，一般小规模的接、移种操作，使用无菌接种箱或超净工作台；工作量大时使用无菌室接种，要求严格的在无菌室内再结合使用超净工作台。 1.1  无菌室的 设计 领导形象设计圆作业设计ao工艺污水处理厂设计附属工程施工组织设计清扫机器人结构设计 无菌室的设计可因地制宜，但应具备下列基本条件： ⑴无菌室要求严密、避光，隔板以采用玻璃为佳。但为了在使用后排湿通风，应在顶部设立百叶排气窗。窗口加密封盖板，可以启闭，也可在窗口用数层纱布和棉花蒙罩。无菌室侧面底部应设进气孔。最好能通入过滤的无菌空气。 ⑵无菌室一般应有里外两间。较小的外间为缓冲间，以提高隔离效果。 ⑶无菌室应安装拉门，以减少空气流动。必要时，在向外一侧的玻璃隔板上安装一个双层的小型玻璃橱窗，便于内外传递物品，减少进出无菌室的次数。 ⑷室内应有照明、电热和动力用的电源。 ⑸工作台台面应抗热、抗腐蚀，便于清洗消毒。可采用橡胶板或塑料板铺敷台面。 1.2  无菌室内的设备 ⑴无菌室的里外两问均应安装日光灯和紫外线杀菌灯。紫外灯常用规格为30W，吊装在经常工作位置的上方，距地高度2.0～2.2m。 ⑵缓冲间内应安排工作台供放置工作服、鞋、帽、口罩、消毒用药物、手持式喷雾器等，并备有废物桶等。 ⑶无菌室内应备有接种用的常用器具，如酒精灯、接种环、接种针、不锈钢刀、剪刀、镊子、酒精棉球瓶、记号笔等。 1.3  无菌室的灭菌 ⑴熏蒸  在无菌室全面彻底灭菌时使用。先将室内打扫干净，打开进气孔和排气窗通风干燥后，重新关闭，进行熏蒸灭菌。常用的灭菌药剂为福尔马林(含37％～40％甲醛的水溶液)。按6～10ml／m3的 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 计算用量，取出后，盛于铁制容器中，利用电炉或酒精灯直接加热(应能随时在室外中止热源)或加半量高锰酸钾，通过氧化作用加热，使福尔马林蒸发。熏蒸后应保持密闭12h以上。由于甲醛气体具有较强的刺激作用，所以在使用无菌室前1～2h在一搪瓷盘内加入与所用甲醛溶液等量的氨水，放入无菌室，使其挥发中和甲醛，以减轻刺激作用。除甲醛外，也可用乳酸、硫磺等进行熏蒸灭菌。 ⑵紫外灯照射  在每次工作前后，均应打开紫外灯，分别照射30min，进行灭菌。在无菌室内工作时，切记要关闭紫外灯。 ⑶石炭酸溶液喷雾  每次临操作前，用手持喷雾器喷5％石炭酸溶液，主要喷于台面和地面，兼有灭菌和防止微尘飞扬的作用。 1.4  无菌室空气污染情况的检验 为了检验无菌室灭菌的效果以及在操作过程中空气的污染的程度。需要定期在无菌室内进行空气中杂菌的检验。一般可在两个时间进行：一是在灭菌后使用前，一是在操作完毕后。 取牛肉膏蛋白胨琼脂和马铃薯蔗糖琼脂两种培养基的平板各3个，于无菌室使用前(或在使用后)，在无菌室内揭开，放置台面上，半小时后重新盖好。另有一份不打开的作对照。一并放30℃下培养，48h后检验有无杂菌生长以及杂菌数量的多少。根据检验结果确定应采取的措施。 无菌室灭菌后使用前检验时，应无杂菌。如果长出的杂菌多为霉菌时， 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 明室内湿度过大，应先通风干燥，再重新进行灭菌；如杂菌以细菌为主时，可采用乳酸熏蒸，效果较好。 2  接、移种工具的准备 最常用的接种或移植工具为接种环。接种环供挑取菌苔或液体培养物接种用。环前端要求圆而闭合，否则液体不会在环内形成菌膜。根据不同用途，接种环的顶端可以改换为其他形式如接种针等。 玻璃刮铲是用于稀释平板涂抹法进行菌种分离或微生物计数时常用的工具。将定量(一般为0.1ml)菌悬液置于平板表面涂布均匀的操作过程需要用玻璃刮铲完成。 移液管吸管的准备：无菌操作接种用的移液管常为lmL或10mL刻度吸管。吸管在使用前应进行包裹灭菌。 3  仪器设备、材料和工具的准备 3.1菌种：酵母菌斜面保藏菌种。 3.2培养基：基本培养基（YPD培养基、马铃薯葡萄糖培养基）。 3.3器材：超净工作台，高压蒸汽灭菌锅，接种环、接种针、玻璃刮铲、刻度吸管、培养皿、三角瓶、试管、酒精灯、不锈钢刀、剪刀、镊子、酒精棉球瓶、记号笔等。 三  实验 内容 财务内部控制制度的内容财务内部控制制度的内容人员招聘与配置的内容项目成本控制的内容消防安全演练内容 1斜面接、移种操作 斜面接种是从已生长好的菌种斜面上挑取少量菌种移植至另一支新鲜斜面培养基上的一种接种方法。具体操作如下： ⑴贴标签  接种前在试管上贴上标签，注明菌名、接种日期、接种人姓名等。贴在距试管口约2～3cm的位置。(若用记号笔标记则不需标签)。 ⑵点燃酒精灯 ⑶接种  用接种环将少许菌种移接到贴好标签的试管斜面上。操作必须按无菌操作法进行。简述如下： ①手持试管  将菌种和待接斜面的两支试管用大姆指和其他四指握在左手中，使中指位于两试管之间部位。斜面面向操作者，并使它们位于水平位置。 ②旋松管塞  先用右手松动棉塞或塑料管盖，以便接种时拔出。 ③取接种环  右手拿接种环(如握钢笔一样)，在火焰上将环端灼烧灭菌，然后将有可能伸入试管的其余部分均灼烧灭菌，重复此操作，再灼烧一次。    ④拔管塞  用右手的无名指、小指和手掌边先后取下菌种管和待接试管的管塞，然后让试管口缓缓过火灭菌(切勿烧得过烫)。见图1—5(a)所示。 ⑤接种环冷却  将灼烧过的接种环伸入菌种管，、先使环接触没有长菌的培养基部分，使其冷却。 ⑥取菌  待接种环冷却后，轻轻沾取少量菌体或孢子，然后将接种环移出菌种管，注意不要使接种环的部分碰到管壁，取出后不可使带菌接种环通过火焰。见图1—5(b)所示。 ⑦接种  在火焰旁迅速将沾有菌种的接种环伸入另一支待接斜面试管。从斜面培养基的底部向上部作“Z”形来回密集划线，切勿划破培养基。有时也可用接种针仅在斜面培养基的中央拉一条直线作斜面接种，直线接种可观察不同菌种的生长特点。见图1—6所示。 ⑧塞管塞  取出接种环，灼烧试管口，并在火焰旁将管塞旋上。塞棉塞时；不要用试管去迎棉塞。以免试管在移动时纳入不洁空气。 ⑨将接种环灼烧灭菌。放下接种环，再将棉花塞旋紧。 2  液体接种操作 ⑴用斜面菌种接种液体培养基时，有下面两种情况：如接种量小，可用接种环取少量菌体移入培养基容器(试管或三角瓶等)中，将接种环在液体表面振荡或在器壁上轻轻摩擦把菌苔散开，抽出接种环，塞好棉塞，再将液体摇动，菌体即均匀分布在液体中。如接种量大，可先在斜面菌种管中注入定量无菌水，用接种环把菌苔刮下研开，再把菌悬液倒入液体培养基中，倒前需将试管口在火焰上灭菌。 ⑵用液体培养物接种液体培养基时，可根据具体情况采用以下不同方法： 用无菌的吸管或移液管吸取菌液接种；直接把液体培养物移入液体培养基中接种；利用高压无菌空气通过特制的移液装置把液体培养物注入液体培养基中接种；利用压力差将液体培养物接入液体培养基中接种(如发酵罐接入种子菌液)。 3  平板接种操作 固体接种最普遍的形式是用菌液接种固体料，包括用菌苔刮洗制成的悬液和直接培养的种子发酵液。接种时可按无菌操作法将菌液用玻璃刮铲均匀涂布于固体料上。接种所用菌液量一般为0.1ml，若接种量过大往往导致菌种生长过密不利于菌种分离或微生物计数等操作。 4  穿刺接种操作 穿刺接种技术是一种用接种针从菌种斜面上挑取少量菌体并把它穿刺到固体或半固体的深层培养基中的接种方法。经穿刺接种后的菌种常作为保藏菌种的一种形式，同时也是检查细菌运动能力的一种方法，它只适宜于细菌和酵母的接种培养。具体操作如下： ⑴贴标签。 ⑵点燃酒精灯。 ⑶穿刺接种，方法如下： ①手持试管。 ②旋松棉塞。 ③右手拿接种针在火焰上将针端灼烧灭菌，接着把在穿刺中可能伸入试管的其他部位，也灼烧灭菌。 ④用右手的小指和手掌边拔出棉塞。接种针先在培养基部分冷却，再用接种针的针尖沾取少量菌种。 ⑤接种有两种手持操作法。一种是水平法，它类似于斜面接种法。一种则称垂直法，如图1—7所示。尽管穿刺时手持方法不同，但穿刺时所用接种针都必须挺直，将接种针自培养基中心垂直地刺入培养基中。穿刺时要做到手稳、动作轻巧快速，并且要将接种针穿刺到接近试管的底部，然后沿着接种线将针拔出。最后，塞上棉塞，再将接种针上残留的菌在火焰上烧掉。 ⑷将接种过的试管直立于试管架上，放在37℃或28℃恒温箱中培养。24h后观察结果 1.接种时如何保证无菌条件？ 2.接种以后的接种工具如何消毒？