雷公藤多甙对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑组织单胺类递质含量的影响

雷公藤多甙对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑组织单胺类递质含量的影响 雷公藤多甙对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑 组织单胺类递质含量的影响 JournalofZhengzhouUniversity(MedicalSciences)Nov.2005Vo1.40No.6 理学基础,它不仅向肿瘤提供营养,促进肿瘤的生 长,而且也通过肿瘤血管向机体输出大量的肿瘤细 ,导致肺癌的远处转移,胞因此,抑制肿瘤的血管生 成不仅是治疗肺癌的主要抗癌战略,亦是控制肺癌 侵袭,转移,改善患者预后和提高生存率的重要措 施.研究表明VEGF在人类多种肿瘤如成骨肉 瘤,膀胱癌,肺癌等均有较高水平的表达,高度恶性 的肿瘤细胞其VEGF—mRNA的表达明显高于低度恶 性的肿瘤细胞,并以自分泌或旁分泌方式,作用于血 管内皮细胞或肿瘤细胞.Qi等应用免疫组化 法发现肺癌等多种实体瘤均有VEGF及其受体的高 表达,且与肿瘤血管计数有关. 研究发现,VEGF是特异的血管内皮细胞刺激 因子,可与血管内皮细胞膜上的?型酪氨酸激酶受 体结合,从而刺激内皮细胞增殖,迁移,还可促进血 管内物质渗出,成为肿瘤细胞转移的基础.因 此,VEGF在肿瘤的生长,发展和转移过程中起着重 要作用,. 作者采用LSAB法对人肺癌组织进行检测发 现,VEGF在肺癌组织,癌旁组织和良性病变组织均 有表达.其表达水平与肺癌患者的性别,年龄,吸烟 与否,肺癌的组织学类型无关(P>0.05),而与肺癌 肿块大小,淋巴结转移与否,P-TNM分期有关(P< 0.O1),与癌细胞分化程度呈负相关.提示VEGF参 与了肺癌的发生,发展,且与肺癌的恶性程度关系密 切,可作为肺癌生物学行为的一项评估指标. 参考文献 ? 1061? 1周清华主编.肺癌基础研究与临床治疗进展.北京:北京 科学出版社,1999.142 2车国卫,周清华.血管内皮生长因子在肺癌中的表达及 临床应用研究.中国肺癌杂志,2001,4(1):77 3车国卫,张世雯.肺癌侵袭和转移的分子机制及其调控 的研究进展.中国肺癌杂志,2001,4(2):121 4TamuraT.Molecular—targetedtherapy.GanToKagakuRyo— ho,2003,30(2):198 5TsunemiT,NagoyaS,KayaM,eta1.Postoperativepro— gressionofpulmonarymetastasisinosteosarcoma.ClinOr— thopRalatRes,2003,(407):159 6DelmotteP,MartinB,PaesmansM,eta1.VEGFandsurviv— aIofpatientswithlungcancer:asystematicliteraturereview andmeta—analysis.RevMalRespir,2002,19(5Pt1):577 7QiSY.Expressionofvascularendothelialgrowthfactorandmi— erovesseldensityinovariantumor.AiZheng,2003,22(3):320 8车国卫,周清华,唐梦琳,等.肺癌中的血管生成及其临 床意义探讨.中国肿瘤临床,2002,29(9):609 9卫小红,杜凤兰,王鸿雁,等.血管内皮生长因子与转化生 长因子B在非小细胞肺癌的表达及其相关性.西安交通 大学(医学版),2003,24(1):43 10BernsEM,KlijnJG,LookMP,eta1.Combinedvascular endothelialgrowthfactorandTP53statuspredictspoorre- sponsetotamoxifentherapyinestrogenreceptor—positivead- vancedbreastcancer.ClinCancerRes,2003,9(4):1253 (2004—12.17收稿) 雷公藤多甙对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑组织单胺类递质含 量的影响 张艳?贾丹辉刘宗文何关霞张钦宪 i)郑州大学基础医学院药理学教研室郑州4500522)河南省肿瘤病理重点实验室郑州4500523)河南省医学科学研 究所药理室郑州4500034)郑州大学基础医学院组织学与胚胎学教研室郑州450052 ?女,37岁,硕士,副教授,研究方向:心脑血管药理学研究 关键词雷公藤多甙;脑缺血再灌注;去甲肾上腺素;多巴胺;5.羟色胺;大鼠 中图分类号R971 摘要目的:观察雷公藤多甙(TwP)对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤脑组织单胺类神经递质含量的影响.方 法:Wistar大鼠60只,随机均分为6组.假手术组,缺血再灌注组每d灌胃生理盐水,尼莫地平(Nim)组,雷公藤多 河南省教育厅自然科学基础研究 计划 项目进度计划表范例计划下载计划下载计划下载课程教学计划下载 项目97310010 ? 1062?郑州大学(医学版)2005年11月第4O卷第6期 甙高,中,低剂量组,分别给予Nim10mg/kg,TWP45mg/kg,30mg/kg,15mg/kg,灌胃给药,1次/d,连用5d.末次 给药后1h,采用线栓法制作大鼠大脑中动脉局灶性缺血再灌注模型,用荧光分光光度计测定缺血2h再灌注1h 时各组大鼠大脑皮层及纹状体去甲肾上腺素(NE),多巴胺(DA),5-羟色胺(5一HT)含量.结果:缺血再灌注组大鼠 大脑皮层及纹状体NE,DA,5-HT含量均较假手术组降低;与缺血再灌注组比较,雷公藤多甙各组及尼莫地平组大 鼠大脑皮层及纹状体NE,DA,5-HT含量均升高(P<O.05).结论:雷公藤多甙可减少缺血再灌注期间单胺类神经 递质的释放. Effectoftripterygiumwilfordiipolyglycosidumonmonoamineneurotrans— mittersinratswithfocalcerebralischemia—repeffusioninjury ZHANGYah?, Danhui" ,LIUZongwen,HEMeixia,ZHANGQinxian J)DepartmentofPharmacology,CollegeofBasicMedicalSciences,ZhengzhouUniversity,Zhengzhou 4500522)HenanKeyLaboratoryforTumorPathology,Zhengzhou4500523)DepartmentofPharma— cology,HenanProvinicialInstituteofMedicalSciences,Zhengzhou4500034)DepartmentofHistology andEmb~ology,CollegeofBasicMedicalSciences,ZhengzhouUniversity,Zhengzhou450052 Keywordstripterygiumwilfordiipolyglycosidum;cerebralischemia— repeffusion;norepirephrine;dopamine;5一 hydroxyindole;rat AbstractAim:Toobservetheeffectsoftripterygiumwilfordiipolyglycosidum(TWP)onthemonoamineneurotrans— mittersinbraintissueofratswithfocalcerebralischemia— repeffusion(I-R)injury.Methods:SixtyWistarratswereran— domlyallocatedinto6groups:sham— operationgroup,I-Rgroup,nimodipine(Nim)10mg'kggroupandTwP45,3O,15 mg-kg, groups.Themiddlecerebralarteryocclusion(MCAO)modelsweremadeusingthesutureembolimethod.The contentsofmonoamines(NE,DA,5-HT)incerebralcortexandstriaumweremeasuredusingfluorospectrophotometry.Re? suits:ContentsofNE,DA,and5-HTinI-Rgroupwerelowerthanthoseinsham?operationgroup.ComparedwithI-R group,contentsofNE,DA,and5-HTinTWP45,3O,15mg'kg—groupsandNim10mg.kg, groupsignificantlyin— creasedafterI-R.Conclusion:TWPprotectsbrainfromI-RinjurybyreducingthereleaseofN E,DA,and5?HTduring cerebralI-R. 雷公藤多甙(tripterygiumwilfordiipolyglycosi- dum,TwP)为中药雷公藤的主要成分,具有免疫抑 制作用,有报道其能有效抑制大鼠脑缺血再灌注损 伤脑组织中一氧化氮合酶(NOS)活性,减少NO的 产生,对缺血性脑损伤有一定防治作用.作者观 察了TwP对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤大脑皮 层及纹状体内单胺类神经递质变化的影响,旨在进 一 步阐明其脑保护作用并探讨可能的机制. 1材料与方法 1.1试剂与仪器TWP,上海医科大学红旗制药 980701;尼莫地平(nimodipine,Nim),山东 厂,批号: 新华制药股份有限公司出品,批号9712089;重酒石 酸去甲肾上腺素(NE),盐酸多巴胺(DA),卫生部药 品生物制品鉴定所提供;5.羟色胺硫酸肌酐,瑞士进 口分装;其余试剂为市售,纯度为AR.MPF-4型荧 光分光光度计,日本日立公司. 1.2实验分组健康Wistar大鼠60只,体重250, 300g,雌雄不拘,由河南省实验动物中心提供,动物 合格证书号:99010.随机分为6组:?假手术组,? 缺血再灌注组,?TWP高剂量组,?TWP中剂量组, ?Tw小剂量组,?Nim对照组,每组10只.?,? 组灌等体积生理盐水,?,?,?组分别给予TwP45 mg/kg,30mg/kg,15mg/kg,?组给予Nim10rag/ kg,灌胃给药,1次/d,连续5d.最后1次灌胃后1 h,根据文献[2]用线栓法制作大鼠大脑中动脉 (MCA)缺血再灌注模型. 1.3大鼠脑组织中单胺类递质含量的测定各组 于缺血2h再灌注1h后快速断头取脑.在冰盘上 迅速分离大脑皮层和纹状体,按文献[3]方法称重, 加10倍体积的冷酸化正丁醇,冰水中匀浆漩涡振 荡,离心5min,取上清液2.0ml,加正庚烷4.0ml, 0.1mol/LHC15ml振荡离心,用荧光分光光度计测 定水相中NE,DA,5一HT含量,其发射/激发波长分 别为475nm/385Bill,370nm/322nm,475nm/350 nm.脑组织中单胺类递质含量单位以ng/g表示. JournalofZhengzhouUniversity(MedicalSciences)Nov.2005Vo1.40No.6 1.4统计学处理所有数据均用SPSS10.0软件 结果以?表示,组间比较用单因素方差分 处理, 析和q检验.检验水准仅=0.05. 2结果 TwP对MCA缺血再灌注后脑内单胺类递质含 ? 1063? 量的影响:各组大鼠脑组织中单胺类递质含量测定 结果见表1.与假手术组相比,缺血再灌注组大鼠 大脑皮层和纹状体NA,5一HT,DA含量均减少(P< 0.01);与缺血再灌注组相比,TWP各组及Nim组, 大脑皮层,纹状体NE,5一HT,DA含量升高(P< 0.05) 表1各组大鼠缺血再灌注后大脑皮层及纹状体单胺类递质的含量ng/g 与假手术组比较,?P<0.05;与缺血再灌注组比较,$P<0.05;与TwP高剂量组比 较,a:P<0.05;与TWP中剂量组比较,b:P<0.05 3讨论 大量实验表明,脑缺血时单胺类神经递质含量 在细胞外液中显着升高,而在脑实质中降低,.在 脑组织缺血等情况下,脑内单胺类神经递质发生代 谢紊乱,NE,DA和5一HT含量明显降低,脑缺血越 重,脑组织NE,DA,5一HT含量就越低.王世风 等报道急性脑缺血后单胺类神经递质在脑组织 中含量的降低主要是由于突触体对神经递质再摄取 障碍及脑细胞受损后递质外漏所致,同时兴奋性氨 基酸释放增加,激活N一甲基一D一天门冬氨酸受体,钙 离子内流增加,促进单胺类递质的进一步释放.单 胺类递质的释放,可引起血管收缩,血小板聚集,加 重缺血和水肿,细胞外液蓄积单胺类递质已证实具 有细胞毒性作用,进一步加剧了脑损伤.如果用 药物耗竭DA,阻止了缺血后纹状体单胺递质的释 放,则可明显减轻神经元的损伤. 近年来,脑缺血与免疫应答的关系引起人们的 关注,认为免疫炎症反应也作为引起缺血性脑损伤 的重要一环,急性脑血管病脑缺血的病理生理过有 免疫应答的参与.缺血区微环境的改变引起免 疫细胞和免疫分子的变化,即早期粒细胞的浸润,小 胶质细胞的活化及晚期单核巨噬细胞,淋巴细胞的 浸润及活化等.脑缺血时免疫系统执行免疫防 御的同时也损伤正常的脑组织,加速了细胞内微环 境的改变,加重脑缺血后的继发性损伤,采用不同的 抗免疫疗法可以不同程度地减轻脑损伤.雷公 藤多甙为雷公藤提取物,含有多种活性成分,具有免 疫抑制作用.有报道雷公藤多甙能减少神经元的迟 发性损伤,降低脑梗死的体积,对脑缺血有改善作 川m.本实验结果表明雷公藤多甙能明显提高大 鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的大脑皮层和纹状体单 胺类递质的含量,且剂量增加,作用增强,提示雷公 藤多甙对缺血再灌注损伤具有改善作用.其脑保护 作用的机制可能与其抑制免疫反应,调节细胞内微 环境,抑制细胞内钙超载,减少缺血再灌注期间单胺 类神经递质的释放,减弱单胺递质的神经毒性有关. 参考文献 1方莉,方伟,李庆军,等.雷公藤多甙对大鼠局灶性脑缺 血再灌注损伤脑组织中NO水平,NOS活性的影响.郑 州大学(医学版),2003,38(1):87 2丁力,邹丹,唐琳,等.阿米替林对鼠局灶性脑缺血一再灌 注损伤的保护作用.河南医科大学,2001,36(6):698 3贾丹辉,李辉,姬汴生,等.大鼠大脑中动脉局灶性缺血再 灌注单胺类递质的变化.郑州大学(医学版),2003, 38(6):952 4TanakaK,WadaN,OgawaN.Chroniccerebralhypopeffu— sioninducestransientreversiblemonoaminergicchangesin theratbrain.NeurochemRes,2000,25(2):313 5王世风.R1有勇.单胺类神经递质和脑缺血.郧阳医学院 ,1999,18(1):60 6梁玉宏,张小林.脑缺血的神经生化改变.脑血管病译 丛.1988.1(1):4 ? l064?郑州大学(医学版)2005年11月第40鲞箜塑 帕金森病大鼠中脑腹侧被盖区多巴胺能神经元的改变 陈晓宇)陈晓蓉李俊张荣宜齐威琴? 1)安徽医科大学组织学与胚胎学教研室合肥2300322)安徽医科大学药学系合肥 230032 ?男,32岁,博士研究生,讲师,研究方向:神经解剖学,E-mail:chenxiaoyuzlx@163.con 关键词帕金森病;中脑腹侧被盖区;酪氨酸羟化酶;大鼠 中图分类号R742.5 摘要目的:探讨帕金森病(PD)大鼠中脑腹侧被盖区(VTA)多巴胺(DA)能神经元的 改变.方法:2O只3月 龄Wistar雄性大鼠,随机分为模型组和对照组,每组lO只.6一羟基多巴胺(6-OHDA) 注射右侧黑质致密区(SNC)制 作PD大鼠模型,腹腔注射阿朴吗啡后进行行为学观察;尼氏染色观察左侧中脑 VTA神经元,酪氨酸羟化酶(TH) 的改变;免疫组织化学ABC法观察其DA能神经元的改变并进行图像分析.结果: 阿朴吗啡诱发PD大鼠模型异常 旋转行为,尼氏染色见PD大鼠左侧中脑VTA有神经细胞肿胀,坏死等变 化;VTATH阳性神经元形态学改变,数量 减少,与对照组相比,差异有统计学意义.结论:中脑VTADA能神经参与PD模型大 鼠的改变. Experimentalchangeofdopaminergicneuronsinmesencephalicventral tegmentalareaofParkinsondiseaserats CHENXiaoyu?, CHENXiaorong?, LIJun,ZHANGRongyi?,QIWeiqin? ,)DepartmentofHistologyandEmbryology,AnhuiMedicalUniversity,Hefei2300322)De partmentof Pharmacology,AnhuiMedicalUniversity,Hefei230032 KeywordsParkinsondisease;ventraltegmentalarea;tyrosinehydroxylase;rat AbstractAim:Tostudythechangeofdopaminergicneuronsinmesencephalicventraltegmen talarea(VTA)ofPar— kins[)『ldisease(PD)rats.Methods:Twentythree.month— oldmaleWistarratswereallocatedintomode1andeontro1 groupsatrandom,10ineachgroup.Modelgroupwasinjected6-OHdopamineinrightsubstantianigracompacta(SNC) toestablishPDratmode1.Thepraxiologychangewasobserved;theneuronalalterationofleftmesencephalicVTAandthe leveloftyrosinehydroxylase(TH)weredetectedusingNisslstaining;thechangesofdopaminergicneuronswasobservedU— singimmunohistochemistryandimageanalysiswasperformed.Results:Apomorphineevokedstrangerottingbehaviorin PDrats.ThereweretheneuronalcellularswellingandnecrosisinleftmesencephalicVTA,andmorphologicalchangesinPD rats.Comparedwithcontrolgroup.thenumberofTHpositiveneuroninVTAdecreasedsharply(P<0.05).Conclusion: MesencephalicVTADAneuronstakepartinthechangeofPDrats. 安徽省教育厅自然科学研究基金资助项目2003kjl87;安徽省高等学校青年教师科 研资助项目2003jq124 7LeiB,AdachiN,NagaroT,eta1.Teffectofdopaminedeple— tionontheH2O2productionintheratstriatumfollowing transientmiddlecerebralarteryocclusion.BrainRes,1997, 764(1—2):299 8武继涛.复方仙灵脾注射液对全脑缺血再灌注大鼠脑组 织含水量,血清TNF—a,IL一1,IL一6含量的影响.巾医药学 刊,2003,21(11):1904 9邓世芳,蒋红玉.中医药防治脑缺血再灌注损伤的分子生 物学研究进展.深圳中西医结合杂志,2003,13(5):328 lO何俐,曾晓惠,罗祖明,等.抗白细胞药物对大鼠大脑中 动脉梗塞模型体积的影响.华西医药,1998,13(1):18 (2004—12—13收稿)