null微生物学实验微生物学实验实验八 微生物检测null
学习平板菌落计数法。
实验目的null
实验原理 三.实验步骤 三.实验步骤
1．编号
取无菌平皿9个，分别用记号笔标明10-4、10-5、10-6（稀释度）各三套。另取6支试管，加入9ml无菌水，依次标明10-2、10-3、10-4、10-5、10-6。
2．稀释
水样：用1ml无菌试管吸取1ml样品精确加入加有9ml无菌水的10-1的试管中，此即为10倍稀释。将10-1试管振荡，使其充分混匀。用另一吸管吸取10-1菌液1ml，精确加入0.5ml至10-2试管中，此即为100倍稀释。其余10-3、10-4、10-5、10-6依次类推。
固体样品：准确称取10g上午膜样，加入90ml无菌水中，充分混匀后即为10倍稀释。将10-1试管振荡，使其充分混匀。用另一吸管吸取10-1稀释液1ml，精确加入0.5ml至10-2试管中，此即为100倍稀释。其余10-3、10-4、10-5、10-6依次类推。 三.实验步骤 三.实验步骤
3．加样倒平板：
用不同的灭菌吸管分别吸取10-4、10-5、10-6稀释液1ml，分别注入3个灭菌培养皿中。分别立即倾注约15ml已熔化并冷却到45Ċ左右的牛肉膏蛋白胨培养基，并立即在桌面上作平面旋摇，使水样与培养基充分混匀（每稀释度做3个）。另取一空的灭菌培养皿，倾注牛肉膏蛋白胨培养基15ml，做空白对照。培养基凝固后，倒置于37℃温箱中培养。 三.实验步骤 三.实验步骤
4．计数
培养24-48h后，取出培养平板，并按下列公式进行计算：
每毫升中菌落形成单位（cfu）=同一稀释度的平均菌落数x稀释倍数
注： 一般选择每个平板上长有30-300个菌落的稀释度计算每毫升的含菌量较适宜。null
三．作业：
计算菌体含量(单位:cfu/mL)。nullnull
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