毛细管电泳原理及分析策略

1 毛细管电泳分离原理及分析策略毛细管电泳分离原理及分析策略 美国贝克曼库尔特公司美国贝克曼库尔特公司 CECE分离原理分离原理--与模式有关与模式有关 •• 毛细管区带电泳（毛细管区带电泳（CZECZE）） •• 毛细管胶束电动色谱（毛细管胶束电动色谱（MECC/MCKCMECC/MCKC）） •• 毛细管凝胶电泳（毛细管凝胶电泳（CGECGE）） •• 毛细管等电聚焦（毛细管等电聚焦（cIEFcIEF）） •• 亲和毛细管电泳（亲和毛细管电泳（ACEACE）） •• 毛细管电色谱（毛细管电色谱（CECCEC）） 第一章第一章 毛细管区带电泳毛细管区带电泳 样品在电解 液中泳动,根 据物质的荷/ 质比差异来 进行分离， 比值愈大,跑 得愈快 进样方式进样方式 „压力进样 „电动进样 „浓缩进样 2 毛细管种类毛细管种类 •• 非涂层毛细管（裸管）非涂层毛细管（裸管） •• 内壁涂层毛细管（涂层管）内壁涂层毛细管（涂层管） 非涂层毛细管非涂层毛细管--电渗流的概念电渗流的概念 电渗流的作用电渗流的作用 电渗流是电渗流是CECE中最大的驱动力来源之一中最大的驱动力来源之一 3 电渗流的正面及负面作用电渗流的正面及负面作用 •• 正面作用正面作用 •• 增加分离速度增加分离速度 •• 使得正、负电荷物质同使得正、负电荷物质同 时分离时分离 •• 负面作用负面作用 •• 减少分离时间和分离有减少分离时间和分离有 效距离效距离 •• 电渗流的波动极大的影电渗流的波动极大的影 响了迁移时间的重复性响了迁移时间的重复性 影响电渗流的因素影响电渗流的因素 •• pHpH值值 pHpH越高，电渗流越大越高，电渗流越大 •• 离子强度离子强度 离子强度越高，电渗流越小离子强度越高，电渗流越小 •• 缓冲溶液添加剂缓冲溶液添加剂 离子型表面活性剂、有机溶剂、环糊精离子型表面活性剂、有机溶剂、环糊精 控制电渗流的三个重要手段控制电渗流的三个重要手段 1.1. 采用涂层毛细管，消除电渗流的影响采用涂层毛细管，消除电渗流的影响 2.2. 改变改变pHpH，从而调整电渗流的大小。，从而调整电渗流的大小。pH<3pH<3时电时电 渗流很低；当渗流很低；当pH>10pH>10以后，电渗流基本不增以后，电渗流基本不增 加加 3.3. 添加剂：有机溶剂可以降低电渗流的大小，添加剂：有机溶剂可以降低电渗流的大小， 从而增加分离的有效距离；表面活性剂可以从而增加分离的有效距离；表面活性剂可以 彻底改变电渗流的方向和大小，主要是在阴彻底改变电渗流的方向和大小，主要是在阴 离子分析时使用离子分析时使用 缓冲溶液的影响和选择缓冲溶液的影响和选择 •• 在在CECE中应该根据以下性质来选择缓冲溶液：中应该根据以下性质来选择缓冲溶液： 1.1. 在所选的在所选的pHpH范围内有较强缓冲能力；范围内有较强缓冲能力； 2.2. 在检测波长处有低的紫外吸收；在检测波长处有低的紫外吸收； 3.3. 小的淌度（即大体积、低电荷离子）以降低所产生的小的淌度（即大体积、低电荷离子）以降低所产生的 电流。电流。 那些被称为生物那些被称为生物““优良缓冲液优良缓冲液””的，如的，如TrisTris, borate, CAPS, borate, CAPS 等特别有用，因为这些缓冲溶液中的离子一般较大，等特别有用，因为这些缓冲溶液中的离子一般较大， 能够在较高浓度下使用而不会产生大的电流，但一个能够在较高浓度下使用而不会产生大的电流，但一个 潜在的缺点是这些大的缓冲离子有强的紫外吸收。潜在的缺点是这些大的缓冲离子有强的紫外吸收。 4 常用的常用的CECE缓冲体系缓冲体系 •• 磷酸钠体系磷酸钠体系 宽缓冲范围宽缓冲范围 •• 硼酸钠体系硼酸钠体系 高高pHpH范围范围 •• TrisTris--HClHCl体系体系 低低pHpH范围范围 •• 醋酸醋酸--醋酸铵体系醋酸铵体系 CE/MSCE/MS常用体系常用体系 CZECZE分离条件的选择分离条件的选择 •• 毛细管类型毛细管类型----涂层还是非涂层？涂层还是非涂层？ •• 毛细管长度毛细管长度----长毛细管还是短毛细管？长毛细管还是短毛细管？ •• 缓冲液体系缓冲液体系----种类和种类和pHpH值值 •• 添加剂类型添加剂类型----甲醇甲醇||环糊精环糊精||乙腈乙腈 •• 检测器选择检测器选择----紫外紫外||二极管阵列二极管阵列||激光诱导荧光激光诱导荧光 缓冲溶液的选择缓冲溶液的选择 可先用磷酸缓冲体系为搜寻基础，初步确定可先用磷酸缓冲体系为搜寻基础，初步确定 （最佳）（最佳）pHpH范围后，再进一步细选出更好范围后，再进一步细选出更好pHpH 和缓冲试剂。磷酸盐是毛细管电泳中最常用的和缓冲试剂。磷酸盐是毛细管电泳中最常用的 缓冲体系之一，它的紫外吸收低，缓冲体系之一，它的紫外吸收低，pHpH缓冲范围缓冲范围 比较宽（比较宽（pH=1.5pH=1.5～～1313），但电导也比较大。），但电导也比较大。 缓冲溶液及缓冲溶液及pHpH值的选择值的选择 研究经验表明：对于蛋白质、肽和氨基酸等两研究经验表明：对于蛋白质、肽和氨基酸等两 性样品，采用酸性（性样品，采用酸性（pH 2pH 2）或碱性（）或碱性（pHpH＞＞99）） 分离条件，比较容易得到好的分离结果；糖类分离条件，比较容易得到好的分离结果；糖类 样品通常在样品通常在pH=9pH=9～～1111之间能获得最佳分离；之间能获得最佳分离； 羧酸或其他样品多在羧酸或其他样品多在pH=5pH=5～～99之间选择分离条之间选择分离条 件件。。 5 缓冲溶液及缓冲溶液及pHpH值的选择值的选择 pH pH 的选择也和所用的毛细管种类有关，许多的选择也和所用的毛细管种类有关，许多 涂层毛细管只能在一定的涂层毛细管只能在一定的pHpH范围内工作，例如范围内工作，例如 聚丙烯酰胺涂层毛细管，在聚丙烯酰胺涂层毛细管，在33＜＜pHpH＜＜88的范围以的范围以 外工作，其涂层容易水解失效。外工作，其涂层容易水解失效。 缓冲溶液及缓冲溶液及pHpH值的选择值的选择 在相同的在相同的 pHpH下，不同缓冲体系的分离效果不下，不同缓冲体系的分离效果不 尽相同，有的可能相差甚远。一般的经验是，尽相同，有的可能相差甚远。一般的经验是， 能与样品发生相互作用的试剂，有可能就是最能与样品发生相互作用的试剂，有可能就是最 好的试剂。一个典型的例子是，在分离糖类和好的试剂。一个典型的例子是，在分离糖类和 DNADNA等分子时优先使用硼酸盐缓冲体系，因为等分子时优先使用硼酸盐缓冲体系，因为 硼酸根能与糖羟基形成配位键，从而增加糖的硼酸根能与糖羟基形成配位键，从而增加糖的 负电荷和分离度。硼酸缓冲试剂也适用于其他负电荷和分离度。硼酸缓冲试剂也适用于其他 含邻位羟基或多羟基化合物的分离。含邻位羟基或多羟基化合物的分离。 缓冲溶液及缓冲溶液及pHpH值的选择值的选择 缓冲试剂及缓冲试剂及pHpH调节剂的浓度也需要优化。缓调节剂的浓度也需要优化。缓 冲试剂的浓度一般控制在冲试剂的浓度一般控制在1010～～200 200 mmolmmol/L/L之之 间。电导率高的缓冲试剂如磷酸盐和硼砂等，间。电导率高的缓冲试剂如磷酸盐和硼砂等， 其浓度多控制在其浓度多控制在20 20 mmolmmol/L/L附近，而电导小的附近，而电导小的 试剂如硼酸及试剂如硼酸及HEPESHEPES等，其浓度可在等，其浓度可在100 100 mmolmmol/L/L以上。有时为了抑制蛋白质吸附等特殊以上。有时为了抑制蛋白质吸附等特殊 目的，可采用很高（＞目的，可采用很高（＞0.5mol/L0.5mol/L）的试剂浓）的试剂浓 度，此时要注意减少分离电压，分析速度自然度，此时要注意减少分离电压，分析速度自然 也将随之降低。也将随之降低。 添加剂的选择添加剂的选择 •• 目的：目的： 1.1. 改善分离改善分离 2.2. 抑制分析物在毛细管上的吸附抑制分析物在毛细管上的吸附 6 添加剂的选择添加剂的选择 1.1. 甲醇甲醇||乙腈（乙腈（55--50%50%）） •• 降低电渗流，增加分离有效距离，从而改善分离效果降低电渗流，增加分离有效距离，从而改善分离效果 •• 增加非极性物质的水溶性增加非极性物质的水溶性 2.2. 环糊精环糊精|SDS|SDS等表面活性剂等表面活性剂 •• 增加分离选择性，提高分析效果增加分离选择性，提高分析效果 •• 降低电渗流，增加分离有效距离，从而改善分离效果降低电渗流，增加分离有效距离，从而改善分离效果 3.3. 非极性高分子聚合物非极性高分子聚合物 •• 掩蔽毛细管内壁电荷，抑制分子吸附掩蔽毛细管内壁电荷，抑制分子吸附 •• 降低电渗流降低电渗流 •• 形成一定的分子筛，提高分子大小选择性形成一定的分子筛，提高分子大小选择性 第二章第二章 毛细管胶束电动色谱毛细管胶束电动色谱 电解质电解质中加入中加入表表面活性面活性剂剂((surfactantsurfactant，，例如例如 SDS)SDS)，，使使之之形成形成胶束（胶束（MicelleMicelle）），，样样品根品根据其据其 疏水性疏水性((HydrophobicityHydrophobicity))强弱的强弱的差差异，异，在在胶束与胶束与 电解质的电解质的分配系分配系数数有所不同來有所不同來进进行分行分离离 ，样品，样品 疏水性愈強疏水性愈強，则进，则进入入胶束胶束的的机会机会愈大愈大。。通常通常物物 质进质进入入胶束后，胶束后，泳泳动动的速度的速度会变会变慢慢，，因此疏水因此疏水 性愈強的物性愈強的物质则质则愈慢出來。愈慢出來。 毛细管胶束电动色谱原理毛细管胶束电动色谱原理 七种青霉素的分离七种青霉素的分离 (A) CZE : 20mM Pi-Borate, pH 8.5 (B) MEKC : 0.1 M SDS in (A) soln. 7 胶束电动色谱的特点胶束电动色谱的特点 •• 优点优点 •• 增加对弱极性物质分离增加对弱极性物质分离 的分离度的分离度 •• 在中药分析、天然产物在中药分析、天然产物 分析、农药分析中经常分析、农药分析中经常 使用使用 •• 缺点缺点 •• 稳定性不佳，达到好的稳定性不佳，达到好的 重复性比较困难重复性比较困难 第三章第三章 毛细管凝胶电泳毛细管凝胶电泳 毛細管內先填充毛細管內先填充凝胶凝胶((例如例如polyacrylamidepolyacrylamide或或 cellulose)cellulose)，，此此时凝胶会时凝胶会在毛細管內形成分子在毛細管內形成分子 筛，样筛，样品依分子量品依分子量的的大小在毛細管內移大小在毛細管內移动动速度速度 不同而不同而进进行分行分离。离。 •• 主要用于核酸片断及蛋白分子量分析主要用于核酸片断及蛋白分子量分析 毛细管凝胶电泳毛细管凝胶电泳 CECE双链及单链核酸分析双链及单链核酸分析 45-寡核苷酸质控 1.0 2.0 3.0 12 3 4 5 6 7 8 9 1011 12 13 14 15 16 17 18 1 9 2 0 23 24 25262728 2930 30 31 32 33 34 IS 21 10.0 15.0 R el at iv e Fl uo re sc en ce In te ns ity dsDNA片段 (72 bp-12 Kbp) 8 CECE--SDSSDS蛋白分子量分析蛋白分子量分析 第四章第四章 毛细管等电聚焦毛细管等电聚焦 第五章第五章 亲和毛细管电泳亲和毛细管电泳 --分离条件基于分离条件基于CZECZE 当在当在CZECZE样品或缓冲液中引入抗原或抗体时，样品或缓冲液中引入抗原或抗体时， 便可以用于研究和分析抗体或抗原，也可以便可以用于研究和分析抗体或抗原，也可以 利用这种方法对电泳峰进行特异性定性。显利用这种方法对电泳峰进行特异性定性。显 然除抗原与抗体的选择需要应用生化知识然除抗原与抗体的选择需要应用生化知识 外，其他方面的选择与外，其他方面的选择与CZECZE等相同。等相同。 •• 用于研究用于研究 1.1. 分子间相互作用测定，分子构型变化分子间相互作用测定，分子构型变化 2.2. 特定物质检测特定物质检测 3.3. 活性物质筛选活性物质筛选 ACEACE测定分子间结合常数与解离速率测定分子间结合常数与解离速率 JAK2与SH2-B之间的相互作用研究 9 ACEACE特定物质的检测特定物质的检测 ACEACE用于相互作用筛选用于相互作用筛选 •• 适体适体AptamerAptamer类似于抗类似于抗 体，但可以体外合成，体，但可以体外合成， 结合常数比抗体更高，结合常数比抗体更高， 有广泛的药物筛选和临有广泛的药物筛选和临 床诊断应用潜力床诊断应用潜力 •• 目前已有以下的一些蛋目前已有以下的一些蛋 白的白的aptameraptamer是采用是采用CECE 方法筛选得到的方法筛选得到的 1.1. IgEIgE 2.2. HIV type 1 reverse transcriptaseHIV type 1 reverse transcriptase 3.3. ThrombinThrombin 4.4. AntiAnti--thrombin IIIthrombin III 5.5. TaqTaq DNA polymeraseDNA polymerase ACEACE用于相互作用筛选用于相互作用筛选 •• 传统筛选方法如亲和色传统筛选方法如亲和色 谱或者谱或者CECCEC筛选一个筛选一个 AptamerAptamer需要需要44--66周周 •• 而而CECE只需要几天就可以只需要几天就可以 了，大大提高了筛选速了，大大提高了筛选速 度度 ----MicroScale Bioseparations 2006 第六章第六章 检测器选择检测器选择 •• 小分子检测小分子检测 •• 大分子检测大分子检测 10 CECE检测器种类及性能检测器种类及性能 •• 检检测测系系统统 HHPPCCEE的的种种类类及及性性能能 检测方式 质量检测限(mol) 浓度检测限(M)* 优缺点 紫外-可见光吸收 10-13～10-16 10-5～10-8 接近通用型，DAD 可给出光谱信息 荧光 10-15～10-17 10-7～10-9 灵敏度高，样品常需 衍生化 激光诱导荧光 10-18～10-20 10-14～10-16 极端灵敏，样品常需 衍生化 安培 10-18～10-19 10-10～10-11 选择性好，用专门装 置测电活性组分 电导 10-15～10-16 10-7～10-8 通用型，需用专门装 置和毛细管处理 质谱 10-16～10-17 10-8～10-9 灵敏，可给出结构信 息，接口复杂 *假定进样体积为 10nl 小分子检测小分子检测 1.1. 有紫外吸收有紫外吸收 •• 首先选择二极管阵列检测器或紫外检测器首先选择二极管阵列检测器或紫外检测器 2.2. 无紫外吸收无紫外吸收 •• 可以衍生化的，可以采用自外衍生的方法再用紫外检可以衍生化的，可以采用自外衍生的方法再用紫外检 测器检测，如氨基酸、还原性糖等测器检测，如氨基酸、还原性糖等 •• 不可以衍生化的，可采用间接紫外法用紫外检测器检不可以衍生化的，可采用间接紫外法用紫外检测器检 测，也可以尝试电化学检测器测，也可以尝试电化学检测器 3.3. 有荧光或需要高灵敏度检测的可采用有荧光或需要高灵敏度检测的可采用LIFLIF检测器检测器 4.4. 需要测定结构或者难以用光学检测器检测的，可以考需要测定结构或者难以用光学检测器检测的，可以考 虑质谱检测虑质谱检测 大分子检测大分子检测 1.1. 蛋白、核酸蛋白、核酸 •• 可以首先选择紫外检测器可以首先选择紫外检测器 •• 如果需要高灵敏度检测可以采用柱前或者柱上衍生的如果需要高灵敏度检测可以采用柱前或者柱上衍生的 方法标记荧光，然后用方法标记荧光，然后用LIFLIF检测检测 •• 如果需要特异性检测，可使用特异性荧光探针，标记如果需要特异性检测，可使用特异性荧光探针，标记 后再后再LIFLIF检测检测 •• 需要测定分子量或氨基酸序列，可采用质谱检测需要测定分子量或氨基酸序列，可采用质谱检测 2.2. 多糖多糖 •• 含量较高的多糖可以采用末端吸收法以紫外检测器检含量较高的多糖可以采用末端吸收法以紫外检测器检 测测 •• 含量较低的还原性多糖可用衍生试剂标记后以含量较低的还原性多糖可用衍生试剂标记后以LIFLIF、、 UVUV的方式检测的方式检测 第七章第七章 分离条件选择流程分离条件选择流程 分离条件的选择是毛细管电泳中最重要但也是最难之分离条件的选择是毛细管电泳中最重要但也是最难之 处。不同的专业研究工作者可能会有各自不同的选择策略处。不同的专业研究工作者可能会有各自不同的选择策略 和流程，我们提出如下九步选择流程，仅供参考：和流程，我们提出如下九步选择流程，仅供参考： 第一步，尽可能多地了解分离样品的类型、来源、组成第一步，尽可能多地了解分离样品的类型、来源、组成 及其性质；及其性质； 第二步，根据样品的可能性质和来源，选择分离模式，第二步，根据样品的可能性质和来源，选择分离模式， 若无样品信息可先选若无样品信息可先选CZECZE；； 11 条件选择流程条件选择流程 第三步，根据样品性质确定检测方法，一般先选直接第三步，根据样品性质确定检测方法，一般先选直接 紫外吸收；紫外吸收； 第四步，确定样品处理方式，包括衍生 方案 气瓶 现场处置方案 .pdf气瓶 现场处置方案 .doc见习基地管理方案.doc关于群访事件的化解方案建筑工地扬尘治理专项方案下载 以及离心第四步，确定样品处理方式，包括衍生方案以及离心 过滤除蛋白等；过滤除蛋白等； 第五步，根据样品解离常数计算最佳第五步，根据样品解离常数计算最佳pHpH，，或利用或利用 7575µµmIDmID毛细管和磷酸缓冲体系确定毛细管和磷酸缓冲体系确定pHpH范围范围;; 条件选择流程条件选择流程 第六步，根据所需第六步，根据所需pHpH构建缓冲体系，包括进一步优化构建缓冲体系，包括进一步优化 pHpH、、缓冲试剂浓度等；缓冲试剂浓度等； 第七步，优化其他操作参数，如毛细管尺寸、分离电压和第七步，优化其他操作参数，如毛细管尺寸、分离电压和 温度等；温度等； 第八步，确定是否需要使用添加剂和使用非水溶剂；第八步，确定是否需要使用添加剂和使用非水溶剂； 第九步，确定是否需要换用其他分离模式。第九步，确定是否需要换用其他分离模式。 条件选择流程条件选择流程 在毛细管电泳条件选择中，还应充分注意下列操作事在毛细管电泳条件选择中，还应充分注意下列操作事 项：项： ①①最好对样品和缓冲液进行过滤或离心处理。最好对样品和缓冲液进行过滤或离心处理。 ②②毛细管的洗涤或平衡，与缓冲体系、毛细管的洗涤或平衡，与缓冲体系、pHpH以及柱子有以及柱子有 关。磷酸根与石英和玻璃之间存在慢相互作用，需要延长平关。磷酸根与石英和玻璃之间存在慢相互作用，需要延长平 衡或冲洗时间，处理的时间应由分离重现性决定。衡或冲洗时间，处理的时间应由分离重现性决定。 条件选择流程条件选择流程 ③③欲降低缓冲液的电导，应尽量使用所谓的欲降低缓冲液的电导，应尽量使用所谓的““生物缓冲生物缓冲 试剂试剂””；欲降低检测背景，则应尽量使用无机缓冲试剂。；欲降低检测背景，则应尽量使用无机缓冲试剂。 ④④欲保持分离重现，要尽量采用相同的条件，包括毛欲保持分离重现，要尽量采用相同的条件，包括毛 细管、缓冲液、温度、电压、洗涤等。细管、缓冲液、温度、电压、洗涤等。 12 第八章第八章 各类物质的分离要点各类物质的分离要点 1.1. 阴离子及有机酸阴离子及有机酸 •• 此类物质没有紫外吸收，要采用间接检测法此类物质没有紫外吸收，要采用间接检测法 •• 间接紫外法一般以铬酸钠等物质作为背景吸间接紫外法一般以铬酸钠等物质作为背景吸 收物收物 •• CTABCTAB通常用作电渗流反向剂，以加速出峰，通常用作电渗流反向剂，以加速出峰， 提高峰的尖锐度提高峰的尖锐度 •• 要使用反向极性分离要使用反向极性分离 各类物质的分离要点各类物质的分离要点 2.2. 阳离子及金属离子的分离阳离子及金属离子的分离 •• 此类物质没有紫外吸收，要采用间接检测法此类物质没有紫外吸收，要采用间接检测法 •• 间接紫外法一般以氨基吡啶等物质作为背景间接紫外法一般以氨基吡啶等物质作为背景 吸收物吸收物 •• 与阴离子不同的是阳离子的分析不需要在缓与阴离子不同的是阳离子的分析不需要在缓 冲溶液中添加电渗流反向试剂冲溶液中添加电渗流反向试剂 •• 也不需要使用反向极性分离也不需要使用反向极性分离 各类物质的分离要点各类物质的分离要点 3.3. 易电离有极性的化合物易电离有极性的化合物 •• 一般采用长一般采用长60cm60cm的毛细管的毛细管 •• 分离的最佳分离的最佳pHpH在分析物在分析物pKa+/pKa+/--11左右左右 •• 通常不需要添加剂通常不需要添加剂 各类物质的分离要点各类物质的分离要点 4.4. 弱极性物质和水溶性差的物质（一些中药成弱极性物质和水溶性差的物质（一些中药成 分、农药等）分、农药等） •• 要注意分析物的溶解性，防止在毛细管中的要注意分析物的溶解性，防止在毛细管中的 沉淀沉淀 •• 通过有机溶剂的添加，提高分析物在通过有机溶剂的添加，提高分析物在bufferbuffer中中 的溶解度的溶解度 •• 添加添加SDSSDS，增加溶解度，增加溶解度 •• 降低样品中分析物的浓度，延长降低样品中分析物的浓度，延长ramp timeramp time也也 可以防止分析物的析出可以防止分析物的析出 13 各类物质的分离要点各类物质的分离要点 5.5. 还原性的单糖、寡糖和多糖（葡萄糖、半乳还原性的单糖、寡糖和多糖（葡萄糖、半乳 糖等及其聚合物）糖等及其聚合物） •• 通常无紫外和荧光，注意检测问题通常无紫外和荧光，注意检测问题 •• 可用可用APTSAPTS等衍生试剂衍生，使其带上电荷和等衍生试剂衍生，使其带上电荷和 紫外紫外//荧光基团荧光基团 •• 多糖也可以采用末端吸收来检测（多糖也可以采用末端吸收来检测（180180-- 200nm200nm），不需要衍生化处理，但是要尽量），不需要衍生化处理，但是要尽量 采用高采用高pHpH使得羟基部分电离带电使得羟基部分电离带电 各类物质的分离要点各类物质的分离要点 6.6. 非还原性的单糖、寡糖和多糖非还原性的单糖、寡糖和多糖 •• 很难采用衍生的方法检测，通常对单糖和寡很难采用衍生的方法检测，通常对单糖和寡 糖采用间接检测法糖采用间接检测法 •• 对多糖采用末端吸收的方法来检测对多糖采用末端吸收的方法来检测 •• 通常采用高通常采用高pHpH使得羟基部分电离带电使得羟基部分电离带电 •• 高高pHpH缓冲液还有防止多糖在毛细管内壁吸附缓冲液还有防止多糖在毛细管内壁吸附 的作用的作用 各类物质的分离要点各类物质的分离要点 7.7. 单链核苷酸、双链核苷酸片断及单链核苷酸、双链核苷酸片断及PCRPCR产物产物 •• 容易在毛细管内壁吸附，通常需要使用涂层容易在毛细管内壁吸附，通常需要使用涂层 管或者对毛细管进行动态涂层管或者对毛细管进行动态涂层 •• 分子筛原理，凝胶的种类和浓度决定了分辨分子筛原理，凝胶的种类和浓度决定了分辨 率的最佳范围和大小率的最佳范围和大小 各类物质的分离要点各类物质的分离要点 8.8. 多肽及蛋白质多肽及蛋白质 •• 一般来说小的肽段不需要考虑在毛细管内壁的吸附问一般来说小的肽段不需要考虑在毛细管内壁的吸附问 题题 •• 对于大的肽段和蛋白质一定要考虑在毛细管内壁的吸对于大的肽段和蛋白质一定要考虑在毛细管内壁的吸 附，可采用极端附，可采用极端pHpH和涂层毛细管的方法来避免吸附和涂层毛细管的方法来避免吸附 •• 在使用极端在使用极端pHpH条件的时候，通常都是用正向电压分条件的时候，通常都是用正向电压分 离离 •• 在使用涂层毛细管时通常没有电渗流，而蛋白是两性在使用涂层毛细管时通常没有电渗流，而蛋白是两性 物质，需要仔细考虑使用涂层管时的分离极性物质，需要仔细考虑使用涂层管时的分离极性