毛细管电泳迁移时间重现性影响因素的探讨

!""#年$月!"#$!""#色谱!"#$%&%’()*$+,(-!"*(.+/(0*+1"2%&#’!%(&’%&’#(%")收稿日期：!""*)"+)!&第一作者：朱健萍，女，硕士研究生，药师，*+#：（"$$)）!#))*+&，,)-./#：01",2,3-)#&’4&-’通讯联系人：胡昌勤，男，研究员，*+#：（")"）#$"’*&"+，,)-./#：1"45-6/4373’&89’46’毛细管电泳迁移时间重现性影响因素的探讨朱健萍)，!，.胡昌勤)，.刘文英&（)’中国药品生物制品检定所，北京)"""*"；!’广西壮族自治区药品检定所，广西南宁*&""!)；&’中国药科大学，江苏南京!)"""’）摘要：以电泳介质为研究对象，在毛细管区带电泳（:;,）和胶束电动毛细管色谱（<,::或<,=:）两种电泳模式下，探讨了电泳介质中各组分浓度、冲洗程序、电泳介质在实验中发生的变化对溶质迁移时间重现性的影响。根据描述缓冲液中各组分浓度与电渗流迁移时间和溶质迁移时间的关系式，证明利用电导值可准确地表征电泳缓冲液的浓度；通过控制缓冲液的电导值可提高迁移时间的重现性。运行缓冲液3>值的变化影响毛细管壁上的硅羟基的电离，因此需选择合理的冲洗程序使硅羟基的电离达到平衡，以提高迁移时间的重现性。毛细管入口端缓冲液是影响溶质迁移行为的主要因素，其在电泳中发生的变化是影响电泳重现性的重要原因。目前在实验中可通过提高运行缓冲液的更换频率来保证迁移时间的重现性。关键词：毛细管区带电泳；胶束电动毛细管色谱；迁移时间；重现性；电泳介质中图分类号：?#*+..文献标识码：@..文章编号：)""")+$)&（!""#）"%)"&’#)"#..栏目类别：研究论文!"#$%&’()*"&+,-../*"0’12/3+&$#*04050"%&.601+)"0&’708/0’9)3055)+%:5/*"+&3;&+/,0,;>A!/.63/69)，!，>A:1.695/6)，BCAD+6$/69&（!!"#$%&’#()’*$%$+$,-&.$/,0&’$.&(&-1/#.2#3,+$%3#(#’45%&(&6%3#(1.&4+3$*，5,%7%’6!"""#"，0/%’#；$!8+#’69%)’*$%$+$,-&.$/,0&’$.&(&-1/#.2#3,+$%3#(1.&4+3$*，"#’’%’6#%""$!，0/%’#；%!0/%’#1/#.2#3,+$%3#(:’%;,.*%$<，"#’7%’6$!"""&，0/%’#）-4,"+)*"：*1++EE+4FG&E8"66/697"EE+8&68+38&H"4/7/#/F$&EF1+-/98.F/&6F/-+/6F1+-&H+G&E4.3/##.8$0&6++#+4F8&31&8+G/G（:;,）.6H-/4+##.8+#+4F8&I/6+F/44.3/##.8$418&-.F&98.31$（<,::）J+8+/6K+GF/9.F+H’*1+3.8.-+F+8G/64#"H+4&64+6F8.F/&6，3>K.#"+.6HF1+38&3+8F/+G41.69+&EF1+8"66/697"EE+8’*1+8+G"#FGG1&J+HF1.FF1+8+38&H"4/7/#/F$&E-/98.F/&6F/-+G-.$7+/-38&K+HF18&"91F18++.338&.41+G’L/8GF，F1+4&88+#.F/&67+FJ++68"66/697"EE+84&64+6F8.F/&6.6H-/98.F/&6F/-+J.G+GF.7#/G1+H.6HF1+8"66/697"EE+84&64+6F8.F/&6J.GH+F+8-/6+H7$4&6H"4F/K/F/+G/6&8H+8F&/-38&K+F1+8+38&H"4/7/#/F$’M+4&6H，/FJ.GE&"6HF1.FF1+8+G/H".#8"66/697"EE+8/6F1+4.3/##.8$G1&J+HG/96/E/4.6F/6E#"+64+&6F1+8+3+.F.7/#/F$&E-/98.F/&6F/-+G’*1"G，.338&38/.F+8"66/69&8J.G1/6938&4+H"8+7+FJ++6G+3.8.F/&6G/G6+4+GG.8$’L/6.##$，F1+/6#+F8+G+8K/&87"EE+83#.$G.6+NF8+-+#$/-3&8F.6F8&#+/6.EE+4F/69F1+-/98.F/&67+1.K/&8G&EG&#"F+G’*18&"91/-38&K/69F1+F+GF.33.8.F"G，8+38&H"4/7#+-/98.F/&6F/-+J.G.41/+K+H.G.8+G"#F&E/648+.G/69F1+E8+5"+64$&E8+3#.4/69F1+7"EE+8/6F1+/6#+F8+G+8K/&8’</%=&+$,：4.3/##.8$0&6++#+4F8&31&8+G/G（:;,）；-/4+##.8+#+4F8&I/6+F/44.3/##.8$418&-.F&9)8.31$（<,::）；-/98.F/&6F/-+；8+38&H"4/7/#/F$；8"66/697"EE+8..毛细管电泳（:,）具有高效、快速、微量和可自动化的特点［)］，它与高效液相色谱（>OB:）一样，属于液相分离技术。遵循不同的分离机理，:,发展出多种分离模式，最常见的分离模式有毛细管区带电泳（:;,）和胶束毛细管电动色谱（<,::或<,=:）。与高效液相色谱法相比，毛细管电泳法的缺点之一是重现性差，这极大地限制了毛细管电泳在药物分析中的应用。为了提高毛细管电泳的重现性，研究人员从仪器、理论及操作上进行了大量的研究改进工作［!/!)］，改进的主要方向有：控制柱温［&/%］，选择进样方式［*/’］，改良毛细管柱［#，)"/)!］，添加内标物质［#，+/’，)&/)*］，优化冲洗程序［)#/)+］，优化!第"期朱健萍，等：毛细管电泳迁移时间重现性影响因素的探讨缓冲液组成［#，$%&’$］等，使得其定量准确性大有改善，但实验中溶质的迁移值仍经常发生不可控制的变化。!!从分离原理看，!"利用电动现象达到对溶质进行分离的目的。实验中带电粒子和毛细管管壁的表面都有双电层，具有#$%&电位，对缓冲液的离子强度和’(值非常敏感。本文以一组!)内酰胺类抗生素作为模型化合物，对缓冲液与!"迁移重现性之间的关系进行了深入的探讨。!"实验部分!!!"仪器与试剂!!*+,-$.%(/!"高效毛细管电泳仪及相应工作站；01,23$.$%熔融石英毛细管柱（总长度"%4#25，有效长度"$25，内径)#!5）；6$235&."**+酸度计；*78*’9,5$电导检测器。!!丙酮、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、四硼酸钠、磷酸、盐酸、氢氧化钠均为分析纯，十二烷基硫酸钠（:/:）、十六烷基三甲基溴化铵（!8*6）由:,+5&公司；甲醇为色谱纯；水为蒸馏水。头孢曲松钠、头孢氨苄、头孢哌酮、头孢唑林、氨苄西林钠、诺氟沙星对照品由中国药品生物制品检定所提供。!!#"实验方法!4#4!!!"的运行条件!!运行电压’+3;，温度’#<，压力进样"=,(""4->&（#+5’=,）；柱上紫外检测，检测波长$%#和’#".5。每次进样前用缓冲液冲洗毛细管柱’5,.。样品溶液用含#?丙酮的水配制（质量浓度约为$+@A）。以丙酮为电渗流标记物，其迁移时间记为!$B。!4#4#!电泳介质的浓度对电泳迁移值的影响!!分别在’(*.+和’(%.(条件下，考察电泳介质离子强度的变化对电泳迁移值的影响。在!#"模式中，采用的两种缓冲液（磷酸盐缓冲液和硼酸盐缓冲液）的浓度均分别为$+，(+，#+，)+和$++55B-@A。在C"!!模式中，采用的缓冲液包括不同浓度的磷酸盐缓冲液（分别为+，$+，(+，#+，)+和$++55B-@A，均含$++55B-@A:/:）、不同浓度的:/:介质（分别为+，$+，(+，#+，)+，$++55B-@A，均含磷酸盐#+55B-@A）和不同含量的有机改性剂甲醇（分别为+，$?，(?，#?，)?，$+?（体积分数），均含#+55B-@A磷酸盐、$++55B-@A:/:，’(%.(）。!4#4$!电泳介质在实验中的变化对电泳迁移值的影响!!运行缓冲液重复使用的影响：以#+55B-@A的磷酸氢二钠溶液（’(%.’）为运行缓冲液，每次运行前用毛细管入口端（,.-$%）缓冲液冲洗毛细管柱’5,.，每个样品重复进样’+次，每次运行时间为$+5,.。!!毛细管两端缓冲液浓度差异的影响：为了验证运行缓冲液在实验中发生的变化对溶质迁移行为的影响，人为地将毛细管两端（即毛细管入口端（,.)-$%）和毛细管出口端（B1%-$%））的缓冲液设置为不同的浓度（即",.-$%和"B1%-$%），从而形成电导值差异。共设计了"种实验方法（见表$）。表!"实验方法"#$%&!"’()&*+,&-.#%,&./012"D’$9,5$.%&-5$%EBF"（G1..,.+H1II$9）@（55B-@A）,.-$%B1%-$%G,.=$H1II$9$#+$++,.-$%H1II$9’#+$++B1%-$%H1II$9($++#+,.-$%H1II$9"$++#+B1%-$%H1II$9!!（$）负极检测体系（样品为头孢曲松钠）：运行缓冲液为磷酸盐缓冲液（’(%4’），按表$中的实验方法进行实验，测定头孢曲松迁移时间的变化。!!（’）正极检测体系（样品为诺氟沙星）：运行缓冲液为含#+55B-@A!8*6的磷酸二氢钠溶液，按表$中的实验方法进行实验，测定诺氟沙星迁移时间的变化。#"结果与讨论#!!"电泳介质对溶质迁移时间的影响#4!4!!缓冲液浓度的影响!!在!#"模式中，对电渗淌度（#$B）、离子化合物的电泳淌度（#$’）与缓冲液浓度（#）的关系已有许多研究［’’&’*］。其研究结果可概括为：淌度#（包括#$B和#$’）与#&$@’成正比［’’］；#与$@#成正比［’(］；#与-B+#成正比［’"］；#与#成正比［’#］。这些文献得出的数学关系式并不统一，不过，普遍接受的观点是：在恒定的’(下，#随着#的增加而减少［’*］，但#与#之间不是简单的线性变化关系。刘震等［’)］认为#$B与#的关系为：$#$B/$+0$$#$@’0$’#（$）!!根据迁移时间!与#成反比的关系［’$］，得出以下方程：!$B/$+J0$$J#$@’0$’%#（’）!5/$+K0$$K#$@’0$’&#（(）式中，!$B和!5分别为电渗流迁移时间和溶质迁移时间，#为缓冲液浓度。通过计算#1!，#$’’1!，$’#1!直线关系和方程（’）、（(）的相关系数，可见以方程·)%(·色谱第!"卷（!）和（#）表征!"#和$#!!模式下溶质的迁移时间!与缓冲溶液浓度"的关系式具有普遍意义。$$在$#!!模式中，缓冲液中的胶束浓度和有机改性剂浓度的变化也可以用方程（!）、（#）表示。我们称之为“广义的缓冲液浓度”，以“#”表示。以头孢氨苄为例，计算#%!的各种相关系数，结果表明以方程（!）、（#）的相关系数最高（见表!），因此可用于表征胶束浓度或有机改性剂浓度与迁移时间的关系。表!"缓冲液中的胶束浓度和有机改性剂浓度与迁移时间关系的相关系数的比较!"#$%!"&’()"*+,’-’./0%1’**%$"/+’-1’%..+1+%-/,’.2+..%*%-/*%$"/+’-,0+),#%/3%%-1’-1%-/*"/+’-’.(+1%$$%’*’*4"-+1,’$5%-/+-*6--+-4#6..%*"-2(+4*"/+’-/+(%+-&7$%&’()%*+)%,-./++%+&0/11-’$（#&!）$（#’%!&!）$（’2#&!）$（#3/()%*+）!-*45()#46*746()-0/11-’，86(+&%+&9:98*+8-+)’()%*+*)(+#’*)((’!*)#(!,*)((’"’）45,)*46*746()-0/11-’，86(+&%+&9:98*+8-+)’()%*+*)((-"*)..##*)’.(-*)((.!’）45()#46*746()-0/11-’，86(+&%+&,-)6(+*;8*+8-+)’()%*+*)((.(*)(,#,*)#,".*)(((#’）!,45()#46*746()-0/11-’，86(+&%+&9:98*+8-+)’()%*+*)(.!!*)("!.*)"’+(*)((,-!）45,)*46*746()-0/11-’，86(+&%+&9:98*+8-+)’()%*+*)(("#*)(,!**)+!(’*)(("-!）45()#46*746()-0/11-’，86(+&%+&,-)6(+*;8*+8-+)’()%*+*)(("(*)(!-**)",*’*)((,(!）$$’）#3/()%*+!；!）#3/()%*+#<$$缓冲液、胶束或有机改性剂浓度的变化最终影响的是缓冲液的导电性质，故可用电导值（&）表征缓冲液浓度的变化。根据欧姆定律和电导值的定义，当电压恒定时，电流（’）与&为线性关系。’和&与缓冲液浓度“#”均为线性关系，根据#与!的关系，用&或’代替#，可得方程（"）、（+）、（,）、（-）。!-*/(*0(’&’2!0(!&（"）!,/(*=0(’=&’2!0(!)&（+）!-*/**0*’’’2!0*!’（,）!,/**=0*’=’’2!0*!)’（-）$$实验结果表明，按方程（"）、（+）、（,）、（-）拟合的相关系数最高，即用&或’代替#是可行的。通常实验中可以通过监测电泳中电流值的变化来监测电泳缓冲液的改变。在应用中，由于二次方程相对较为复杂，故可以近似地将迁移时间与电导值&（或电流’）之间的关系看成&’%!%!（或’’%!%!）的线性关系，或是简化为&%!（或’%!）的线性关系。$$在配制电泳缓冲溶液时，会因为称量、稀释及调节45等操作使电泳缓冲液的电导值发生变化，进而使溶质的迁移时间发生改变。由于电导值真实地反映了缓冲液的导电能力，因此用&比用#表征电泳缓冲液的浓度更加准确。以头孢曲松钠为例，当运行缓冲液（+*,,*;2>磷酸缓冲液）的45约为(（当451(后，电渗流的变化很小）时，利用&%!,拟合方程可较准确地计算出相应电导值下溶质的!,。用酸碱调节缓冲液的45值时，虽然缓冲液的电导值发生了较大的变化，但!,的计算值!,（8(;）与实测值!,（,-(7/’-?）基本相等（见表#）。!<#<!$冲洗程序的影响$$45值对毛细管壁上的硅羟基的电离程度影响很大。在45"%,范围内，硅羟基的电离对45非常敏感［!’］，电渗流对45表现出很强的依赖性。因表$"头孢曲松钠!(的"%!方程计算值与实测值比较!"#$%$"&’()"*+,’-’.!(’.1%./*+"8’-%,’2+6(#%/3%%-(%",6*%25"$6%"-2/0%1"$16$"/%2’-%#9"%!%:6"/+’-./++%+&0/11-’&2（,928,）!,（,-(7/’-?）2,%+!,（8(;）2,%+45()#46*746()-0/11-’-),*+)(+,)*(-)(!,)*!,)!!-)(+,)#+,)!#45.)(46*746()-0/11-’-)-#,)’",)’"45()*46*746()-0/11-’’!).,.)",.)’’此，更换45值不同的缓冲液时需对毛细管柱进行冲洗，以保证硅羟基在缓冲液中的电离达到平衡。$$合理的冲洗程序十分重要［’,］。以头孢曲松钠为例，以45,)*的+*,,*;2>磷酸盐缓冲液（含’**,,*;2>9:9）为运行缓冲液，运行结束后用*)+,*;2>的@(A5冲洗毛细管柱+,%+，以改变毛细管壁上的硅羟基的电离情况，然后再分别采用+种不同的冲洗程序冲洗毛细管柱，再电泳分析头孢曲松钠样品，通过测定丙酮的!-*及头孢曲松钠的!,来考察冲洗的效果，结果见表"。表&"不同冲洗程序对头孢曲松钠迁移时间的影响!"#$%&"7..%1/’.2+..%*%-/*+-,%)*’1%26*%,’-(+4*"/+’-/+(%’.1%./*+"8’-%,’2+6(@*<.%+7-4’*8-?/’-!-*2,%+!,2,%+’(;B(;%（!,%+），5!A（!,%+），0/11-’（!,%+）")-*’*)((!(8%?（!,%+），5!A（!,%+），0/11-’（!,%+）-)’,",)((#5!A（!,%+），0/11-’（!,%+）+)’’’#)#."5!A（!,%+），0/11-’（#*,%+）").’()-,+5!A（!,%+），0/11-’（(*,%+）")!!.)--$$用酸冲洗毛细管柱对毛细管壁上的硅羟基的电离情况影响最大。用酸冲洗后再用水和缓冲液短时间冲洗，毛细管壁上的硅羟基的电离不易达到平衡，残留在管壁上的50或A5&仍然严重影响硅羟基的电离情况，使迁移时间不能重现。为了尽可能地减·.(#·!第"期朱健萍，等：毛细管电泳迁移时间重现性影响因素的探讨小!#或"!$在管壁上的残留，需用相应的运行缓冲液对毛细管柱进行长时间的冲洗。运行缓冲液的酸性越强，毛细管壁上的硅羟基达到电离平衡的时间越长，需要的冲洗时间也越长。!!在#$%模式下，溶质的表观淌度（!&）、!’(与!’)的关系［%&］如下：!!&’!’)$!’(’!*!+"（&#’)$&#’(）’!*!+"#,（(）即：!!&#,’&#’)$&#’(（)）!!当运行缓冲液的(!固定时，!’(基本不受缓冲液浓度的影响，但!’)受缓冲液浓度的影响较大。由公式（)）可看出，#’)变化很小时，对#,的影响仍然很大。!!在-%##模式下，借用#$%模式中的淌度关系，当缓冲液的(!为*+,时，头孢曲松钠、头孢哌酮和头孢唑林的!’(基本不受缓冲液浓度的影响；随着缓冲液浓度的增加，对头孢氨苄和氨苄西林钠的!’(的影响逐渐增大，表明受./.胶束的影响，头孢氨苄和氨苄西林钠的带电量发生了较大的变化，使其#,发生了变化。!!!"电泳介质重复运行对溶质迁移的影响!!导致电泳介质在试验中发生变化的主要因素可概括为：（&）缓冲液的蒸发；（%）电泳过程中水的电离使得缓冲液的(!值改变，并造成毛细管两端运行缓冲液的液面高度差异［&］；（-）电泳过程中样品的污染使得毛细管两端缓冲液的离子强度发生改变。上述所有的变化都会表现为缓冲液$值的改变。文献［%(］报道，由于缓冲液的重复运行，使毛细管入口端缓冲液的(!值发生明显下降，导致溶质的迁移时间延长。实验中，若反复运行缓冲液，一般会使毛细管入口端缓冲液的$值降低，毛细管出口端缓冲液的$值增加。缓冲液的电导值越大，电泳后毛细管两端缓冲液电导值的差异越大；累计的电泳时间越长，毛细管两端缓冲液的电导值差异也越大。!0!0#!缓冲液重复运行对溶质迁移时间的影响!!以头孢曲松钠、头孢唑林和头孢氨苄为例，每个样品重复进样%,次。结果显示：不同溶质的#,值的变化不同（见图&1&），%值的变化也不同（见图&12）。头孢唑林和头孢氨苄的#,值变化较小，头孢曲松钠的#,值变化较大。电泳后测定毛细管两端缓冲液的$值，发现头孢曲松钠的运行缓冲液电导值差异（!$）最大，头孢氨苄的!$最小。因此，缓冲液重复使用对重现性的影响与溶质结构有关，不同溶质对运行缓冲液在电泳中发生的变化敏感程度不同。图#"!$次重复进样对（"）溶质迁移时间（!#）和（$）检测电流（"）的影响%&’!#"())*+,-.)!$/*0*,&,&1*&23*+,&.2-.2（"）#&’/",&.2,&#*（!#）"24（$）+5//*2,（"）.)-.65,*-!0!0!!缓冲液重复运行对分离的影响!!缓冲液重复运行不仅影响溶质的#,值，还影响溶质间的分离。如头孢氨苄重复进样%,次（见图%），虽然主峰的#,值变化不大，但主峰与杂质之间的分离情况发生了明显的变化。!0!0%!毛细管两端缓冲液的电导值差异对溶质迁移时间的影响!!每次分析样品前都需用运行缓冲液冲洗毛细管柱。通常毛细管两端的缓冲液均可作为冲洗缓冲液。缓冲液重复运行时毛细管两端缓冲液的$值会发生改变。为了考察毛细管两端缓冲液的变化对溶质迁移时间的影响，人为地将毛细管两端缓冲液设置为不同浓度，从而形成电导值差异，在此条件下测定溶质的迁移行为变化。!!在负极检测体系中以头孢曲松钠为例，在正极检测体系中以诺氟沙星为例，测定毛细管两端缓冲液的电导值差异对溶质迁移时间的影响。结果（见表.）表明，不论在正极检测体系还是负极检测体系中，毛细管入口端缓冲液和冲洗缓冲液的$值是决定溶质#,值的主要因素。冲洗缓冲液的$值与毛细管入口端缓冲液的$值相同时，实验中的电流没有太大的变化，溶质的迁移行为也与运行缓冲液浓·))-·色谱第!"卷度为!!"#$%时相当；冲洗缓冲液的"值与毛细管入口端缓冲液的"值不同时，实验中的电流值发生较大的变化，溶质的迁移行为是两种缓冲液共同影响的结果。当用毛细管入口端缓冲液作为冲洗缓冲液时，减少了影响电流变化的因素，才能用方程（#）、（$）确切地表达#与$&的关系。图!"缓冲液重复运行对头孢氨苄分离情况的影响!"#$!"%&&’()*&+’,’)")"-’+.//"/#*&0.&&’+*/1’,2+2)"*/*&(’&23’4"/’(""!")*(++$,：%&&&-#./01-2013%$*(++$,，04’(!535%1$+!,2%2$03,3%!-"；*5%1$%$"%12$03,3%!-"；65%1$%7$"%!$%12$03,3%!-"5表#"毛细管两端缓冲液浓度差对溶质的!5的影响6203’#"%&&’()*&(*/(’/)+2)"*/7"&&’+’/(’*&0.&&’+10’)8’’/2/*7’2/7(2)9*7’*/5"#+2)"*/)"5’*&)9’1*3.)’8$%$6%!-"!"63%1-9$%（,(""!")*(++$,）.（&&-#./）!"#$%-(%#$%,!"2$*(++$,$&.&!"8$%$6%!-"!"3"-9$%（,(""!")*(++$,）.（&&-#./）!"#$%-(%#$%,!"2$*(++$,$&.&!"%&%&!"#$%*(++$,%()"%&%&!"#$%*(++$,*&()&*&&*&&!"#$%*(++$,$(+%*&&*&&!"#$%*(++$,*!(*)*&&%&!"#$%*(++$,$(%&*&&%&!"#$%*(++$,*!($"*&&%&-(%#$%*(++$,%(##*&&%&-(%#$%*(++$,*&(+#%&*&&!"#$%*(++$,%(’#%&*&&!"#$%*(++$,*&("!%&*&&-(%#$%*(++$,$("#%&*&&-(%#$%*(++$,**(’"$"保证溶质迁移时间重现的方法,,从以上分析结果来看，要保证溶质迁移时间的重现性，应主要从三个方面入手：,,（*）严格控制缓冲液的"值。建立:;分析方法，在优化电泳缓冲液条件时，必须考察电泳缓冲液电导值的变化对溶质迁移时间的影响，确定缓冲液浓度变化的允许范围。在描述缓冲液的配制方法时，应对调节缓冲液04值所需溶液的种类和浓度做出详细规定。如能在毛细管电泳仪上增加对毛细管两端运行缓冲液电导值的检测设备，则可以在线监测缓冲液的导电能力变化。,,（!）尽可能在04-#或04."的条件下进行电泳分析。如04必须选择在"/#范围内，需确保缓冲液具有很好的缓冲能力，且需选择合理的冲洗程序。用运行缓冲液较长时间地冲洗毛细管柱才能使毛细管壁上的硅羟基达到电离平衡。,,（+）勤换电泳运行缓冲液，特别是毛细管入口端的缓冲液。电泳时间越长，缓冲液的变化越大。溶质的$&值越大，需更换缓冲液的频率越高；缓冲液累计运行的时间越长，对溶质$&值的影响越大。有时缓冲液的变化对溶质迁移时间的影响并不明显，但对样品分离情况的影响可能较大，特别是对多组分样品的分离分析，缓冲液的微小变化会使样品中某些组分的迁移行为发生改变。推荐用毛细管入口端的缓冲液作为冲洗缓冲液，并通过观察电泳过程中电流的变化来监控毛细管入口端的缓冲液的变化。,,在不改变现有仪器的条件下，提高毛细管入口端缓冲液的更换频率，对分析结果的重现性有较大的帮助。但由于:;中放置进样瓶的位置有限，频繁更换运行缓冲液会过多地占用有限的位置，对自动化运行造成障碍。:;实验中使用的缓冲液仅需"/级，现有仪器的进样瓶设计的容量相对较大，期望通过此种方式减小电泳中缓冲液的变化，进而减少其对重现性的影响。但实验结果显示，这种设计效果并不理想。有的仪器设计有自动更新电泳槽缓冲液的功能，但只能更新一种缓冲液，且贮液瓶的容积过大，一般在探索方法建立时都闲置。可对现有仪器的设计做如下修改：将贮液瓶的容积适当减小，个数增加，配上适当的冲洗管路；进样瓶容积和数量适当减少，使贮液瓶和进样瓶的数目都能满足缓冲·&&"·!第"期朱健萍，等：毛细管电泳迁移时间重现性影响因素的探讨液变化的需要，使每次运行均使用新鲜的运行缓冲液。这样将使分析结果的重现性大大提高。!!综上所述，为确保电泳的重现性，在优化运行缓冲液条件时，首先应对!"值进行选择，并选择有足够缓冲能力的缓冲盐；在保持!"值不变的条件下，对缓冲液的组成和浓度进行优化。在实验时，要保证在选择的!"值条件下，毛细管壁上的硅羟基电离达到平衡，使溶质的迁移时间和峰面积的重复性都能符合要求。此外，实验中要勤换作为电泳槽的进样瓶中的缓冲液。参考文献：［#］!#$%&$%’()*%’+,-$.*/012!$3324563*(74/!)/4*8$8+&*$9$%’：:($*%(*;4*88（林炳承+毛细管电泳导论+北京：科学出版社），#$$%：&［’］!<27=$’"，>*77*1+?1)4/@27/’4，#$$&，%&%（#）：&#［&］!;23@*41;，A2%.*’$%87*&,B+?1)4/@27/’4C，#$$(，)#*（#）：#(&［"］!1)2%’"D，E*-%’6:+63*(74/!)/4*8$8，#$$(，#%（##）：’+%$［(］!F-%G*3C，>*’*%)24.7B，:()$4@&，<27=$’"+?1)4/@2H7/’4C，#$$)，)%*（#）：#)［%］!B25*4&I+?1)4/@27/’4C，’++#，$+)（#J’）：’#［)］!K/(GD，>/L*?，B(1/4.&，B2/>+63*(74/!)/4*8$8，’++#，’’（"）：)((［*］!:)$)2M$NF，"$%8.23*B6+63*(74/!)/4*8$8，#$$(，#%（##）：’#($［$］!:()2*!*4?;，:*!2%$2GB?+63*(74/!)/4*8$8，’+++，’#（)）：#"’#［#+］!"*$’*4>K，B29/48O6+#1H,1，#$$(，#&：#’［##］!>-B，P32%2’2%?"，#$%&1，B2EP+63*(74/!)/4*8$8，’++&，’"（#*）：&#")［#’］!B*2’)*4O?，:*/%’?，#2$M$%$8;6，&244/%C6+63*(74/H!)/4*8$8，’++"，’(（&）："+(［#&］!"2Q-*C，:7*R247?D+?#$Q1)4/@27/’4O*327D*()%/3，#$$$，’’（*）：##$&［#"］!S)%*8/4’*?，.*,$*%.1:A，<27=$’"+63*(74/!)/4*8$8，’++(，’%（#’）：’&%+［#(］!:)$I，&2%52$T，#*8%$2G<,，T832@BD，S48=2’)T，&23/’);，&2G*4?O，&23/’)#;+63*(74/!)/4*8$8，’++(，’%（#(）：’$"$［#%］!P233*4D，6%’*3)24.7"+?1)4/@27/’4C，#$$$，*(&（#J’）：*&［#)］!6)@2%%D，&2()@2%%F，P2M45#，O-0*4"，:*4-*B，O/88,，;2)3G*:，F/7=#+?1)4/@27/’4C，#$$*，*#%（’）：’%#［#*］!F2-!!:，&-M*47"，&2-4#，K*38/%,，<27=$’"+?1)4/H@27/’4C，’+++，*$"（#J’）：)&［#$］!<27=$’"，>*’*%)24.7B，F-%G*3C+63*(74/!)/4*8$8，#$$*，#$（#%J#)）：’%$(［’+］!>2$>，1)*%E，U$#，E-I+63*(74/!)/4*8$8，’++&，’"（#*）：&’#$［’#］!C%>*%’G-$+:*3*(7*.D/!$(8/%B/4.*4%;)24@2(*-7$(23C%2358$8+&*$9$%’：1)$%*8*B*.$($%*:($*%(*2%.D*()%/3/H’5;4*88（安登魁+现代药物分析选论+北京：中国医药科技出版社），’++#：#&)［’’］!T882Q"?，C72@%2TN，B-8()$G,B，?/%$%$,B+1)4/@H27/’42!)$2，#$$#，&’（&J"）：#((［’&］!C374$2F>，:$@!8/%1P+C%23;4/(，#$**，’(（&）：*(［’"］!C374$2F>，:$@!8/%1P+1)4/@27/’42!)$2，#$*)，’"：(’)［’(］!&4-$%,?B，1)2%’?;，F-)3@2%O"，N*’*48F，F4/2G?1，;/!!*"+?1)4/@27/’4C，#$*$，")#："’$［’%］!>*%’E2%=)-/，"*?$%32%+"$’);*40/4@2%(*12!$3324563*(74/!)/4*8$8+&*$9$%’：:($*%(*;4*88（邓延倬，何金兰+高效毛细管电泳+北京：科学出版社），#$$%：%(［’)］!#$-N)*%，N/-"2%02，E*B$%’3$2%’，K$?$2%5$，N)2%’E-G-$+1)$%*8*?/-4%23/01)4/@27/’42!)5（刘震，邹汉法，叶明亮，倪坚毅，张玉奎+色谱），#$$$，#)（’）：#")［’*］!:74*’*BC，#2’-C#+?#$Q1)4/@27/’4，#$$&，#%（#）：(#·#+"·