------------------------------------------作者xxxx------------------------------------------日期xxxx二苯胺试剂鉴定DNA【精品文档】【精品文档】【精品文档】【精品文档】【精品文档】【精品文档】二苯胺试剂:鉴定DNA。二苯胺试剂的配制A液:1.5g二苯胺溶于100mL冰醋酸中,再加15mL浓硫酸,用棕色瓶保存。如冰醋酸呈结晶状态,则需加温后待其熔化,再使用。B液:乙醛的体积分数为0.2%的溶液。配制:将0.1mLB液加入到10mLA液中,现配现用。DNA的粗提取与鉴定实验原理 1.DNA在NaCl溶液中的溶解度，是随着NaCl的浓度的变化而改变的。当NaCl的物质的量浓度为0.14mol／L时,DNA的溶解度最低。利用这一原理，可以使溶解在NaCl溶液中的DNA析出。 2.DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精溶液。利用这一原理，可以进一步提取出含杂质较少的DNA。 3.DNA遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。 注意事项 1.步骤3析出含DNA的黏稠物中，蒸馏水要沿烧杯内壁缓缓加入，不能一次快速倒入。 2.实验中有多个步骤都要用玻璃棒进行搅拌，但是在不同的步骤中玻璃棒的用法不同。 实验用具 鸡血细胞液（5～10mL）；体积分数为95％的冷酒精，蒸馏水，质量浓度为0.1g／mL的柠檬酸钠溶液，物质的量浓度分别为2mol／L和0．015mol／L的NaCl溶液，二苯胺试剂；烧杯（100mL，1个，50mL，500mL，各2个），漏斗，试管（20mL，2个），玻璃棒，滴管，量筒（100mL，1个），纱布，镊子，滤纸，铁架台，铁环，三角架，酒精灯，石棉网，载玻片，试管夹。实验原理： 1.析出溶解在NaC1溶液中的DNA。 2.用冷酒精提取出含杂质较少的DNA。 3.DNA在沸水浴时被二苯胺染成蓝色。 方法步骤： 1．提取细胞核物质：顺时针方向搅拌，稍快，稍重。5min 2．溶解DNA： 3．析出含DNA的黏稠物：蒸馏水300mL，逆时针方向搅拌，缓慢 4．过滤：取黏稠物 5．再溶解：顺时针方向搅拌，较慢。3min 6．过滤：取滤液。 7．提取出含杂质较少的DNA，逆时针方向搅拌，稍慢。5min 8．DNA的鉴定：沸水浴5min【实验十二】DNA的粗提取与鉴定实验原理DNA在氯化钠溶液中的溶解度，是随着氧化钠的浓度的变化而改变的。当氯化钠的物质的量浓度为2mol／L时，DNA的溶解度最大，浓度为0．14mol／L时，DNA的溶解度最低。利用这一原理，可以使溶解在氯化钠溶液中的DNA析出。DNA不溶于95%的酒精溶液，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精溶液。利用这一原理，可以进一步提取出含杂质较少的DNA。DNA中含有脱氧核糖，能与二苯胺（沸水浴）反应生成蓝色物质，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。目的要求1.学会DNA的粗提取和鉴定的方法。2.观察提取出来的DNA物质的颜色和形状。材料用具材料：活鸡或鲜血鸡血。仪器：离心机、恒温水裕锅、载玻片，玻璃棒，滤纸，滴管，量简（100mL，l个），烧杯（100mL，l个，50mL、500mL各2个），试管（20mL，2个），漏斗，试管夹，纱布。试剂：酒精的体积分数为95％的溶液（实验前置于冰箱内冷却24h），蒸馏水，柠檬酸钠的质量浓度为0．1g／mL的溶液，氯化钠的物质的量浓度分别为2mol／L和0．015mol/L的溶液，二苯胺试剂。方法步骤实验前需要制备鸡血细胞液（由教师完成），制备的方法是：取柠檬酸钠的质量浓度为0．1g／mL的溶液（抗凝剂）100mL，置于500mL烧杯中。将宰杀活鸡流出的鸡血（约180mL）注入烧杯中，同时用玻璃棒搅拌，使血液与柠檬酸钠溶液充分混合，以免凝血。然后，将血液倒入离心管内，用1000r／min的离心机离。2min，此时血细胞沉淀于离心管底部。实验时，用吸管除去离。心管上部的澄清液，就可以得到鸡血细胞液。1．提取鸡血细胞的细胞核物质将制备好的鸡血细胞液5mL～10mL，注入到50mL烧杯中。向烧杯中加入蒸馏水20mL，同时用玻璃棒充分搅拌5min，使血细胞加速破裂。然后，用放有纱布的漏斗将血细胞液过滤至500mL。取其滤液。2．溶解细胞核内的DNA将氯化钠的物质的量浓度为2mol的溶液40mL加入到滤液中，并摇动烧杯，使其混合均匀，这时DNA在溶液中呈溶解状态。3．析出含DNA的粘稠物沿烧杯内壁缓缓加入蒸馏水，同时用玻璃棒不停地轻轻搅拌，这时烧杯中有丝状物出现，注意观察丝状物呈什么颜色。继续加入蒸馏水，溶液中出现的粘稠物会越来越多。当粘稠物不再增加时停止加入蒸馏水（这时溶液中氯化钠的物质的量浓度相当于0.14mol／L）。4．滤取含DNA的粘稠物用放有多层纱布的漏斗，过滤步骤3中的溶液至500mL的烧杯中，含DNA的粘稠物被留在纱布上。5．将DNA的粘稠物再溶解取1个50mL烧杯，向烧杯内注入氯化钠的物质的量浓度为2mol／L的溶液20mL。用钝头镊子将纱布上的粘稠物夹至氯化钠溶液中，用玻璃择不停地搅拌，使粘稠物尽可能多地溶解于溶液中。6．过滤含有DNA的氯化钠溶液取1个100mL烧杯，用放有两层纱布的漏斗过滤步骤5中的溶液。取其滤液，DNA溶于滤液中。7．提取含杂质较少的DNA在上述滤过的溶液中，加入冷却的、酒精的体积分数为95％的溶液50mL（使用冷却的酒精，对DNA的凝集效果较佳），并用玻璃棒搅拌，溶液中会出现含杂质较少的丝状物。用玻璃棒将丝状物卷起，并用滤纸吸取上面的水分。这种丝状物的主要成分就是DNA。注意观察丝状物是什么颜色的。8．DNA的鉴定取两支20mL的试管，各加入氯化钠的物质的量浓度为0．015mol／L的溶液5mL，将丝状物放入其中一支试管中，用玻璃棒搅拌，使丝状物溶解。然后，向两支试管中各加入4mlL的二苯胺试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热5min，待试管冷却后，观察并且比较两支试管中溶液颜色的变化。将观察的结果填写在《实验
报告
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册》上。结论步骤8的2支试管中溶液颜色的变化说明了什么？将得出的结论填写在《实验报告册》上。讨论1．提取鸡血中的DNA时，为什么要除去血液中的上清液？2．步骤回和步骤3中都需要加入蒸馏水，两次加入的作用相同吗？为什么？3．DNA的直径约为20×10-10m，实验中出现的丝状物的粗细是否表示1个DNA分子直径的大小？
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