动物克隆与转基因克隆技术

动物克隆与转基因克隆技术基本概念克隆：克隆是英文“clone”或“cloning”的音译，而英文“clone”则起源于希腊文“Klone”，原意是指幼苗或嫩枝，以无性繁殖或营养繁殖的方式培育植物，如扦插和嫁接。在大陆译为“无性繁殖”在台湾与港澳一般意译为复制或转殖或群殖。个体克隆是指生物体通过体细胞进行的无性繁殖，以及由无性繁殖形成的基因型完全相同的后代个体组成的种群。通常是利用生物技术由无性生殖产生与原个体有完全相同基因组织后代的过程。细胞克隆：干细胞分子克隆：PCR质粒扩增动物克隆的一般技术 流程 快递问题件怎么处理流程河南自建厂房流程下载关于规范招聘需求审批流程制作流程表下载邮件下载流程设计 转基因克隆动物的基本流程细胞筛选基因整合MSTN基因基因转移同源重组核供体猪体细胞细胞培养卵供体猪未受精卵除去卵核细胞融合克隆胚胎胚胎移植无核卵子代孕母亲基因组经过同源重组修饰的转基因克隆猪同源重组细胞扩增克隆发展的简单历史1938年德国汉斯·施佩曼提出采用细胞核移植技术克隆动物的设想；1952年起，科学家们首先采用青蛙开展细胞核移植克隆实验，先后获得了蝌蚪和成体蛙；1963年，中国童第周教授获得胚胎细胞核移植鱼；1964年，格登（J.Gurdon)获得体细胞核移植非洲爪蟾；1981年，卡尔·伊尔门泽和彼得·霍佩用鼠胚胎细胞培育出发育正常的小鼠。1984年，施特恩·维拉德森获得胚胎细胞克隆羊；1989年，维拉德森获得连续移核二代的克隆牛；1997年2月，英国罗斯林研究所wilmut博士科研组公布体细胞克隆羊“多利”培育成功；1998年7月，美国夏威夷大学Wakayama等报道，由小鼠卵丘细胞克隆了27只成活小鼠，其中7只是由克隆小鼠再次克隆的后代，这是继“多利”以后的第二批哺乳动物体细胞核移植后代。“檀香山技术”；2001年，克隆欧洲盘羊，但盘羊克隆成功后仅活了7个月。1998年日本克隆牛1997年英国克隆羊1998年新西兰的克隆奶牛1998年美国克隆小鼠动物克隆回顾1998转基因克隆山羊米拉1999年杨向中美国1998年日本转基因克隆奶牛2002年美国克隆猫科比2000年美国克隆猪2000年，猕猴特拉2000年英国基因打靶polly2002年法国克隆兔2001年意大利欧洲盘羊155d异种克隆2001年，亚洲野牛诺亚2002法中克隆大鼠15次入宫2002年法国克隆兔2003年美国克隆骡2003年意大利克隆马2003南韩克隆狗2002年英美双敲除基因打靶猪2003美野猫2003美克隆鹿2004年克隆水貂2005年韩国克隆狼2005年10月1日出生的广西大学体细胞克隆水牛将来某一天克隆技术的问题流产率高，胎儿畸形，出生率低5%，出生体重过大！重编程（epigeneticreprograming）不完全是关键！OverallGrowthPlacentalInsufficienciesCerebralEffects早期胚胎发育的假象？？？M随GV增大而增主动去M被动去M被动去甲基化依赖于DNA复制DNAmethlationandspermremodeling精子的去甲基化重编程Passivedemethylationoccursasaconsequenceofreplicationproceedingintheabsenceofmaintenancemethylation(providedbyDnmt1).Contrarytopassivedemethylation,activedemethylationisreplicationindependentandrequiresanenzymaticactivity,甲基化与去甲基化Followingthepre-implantationgenomewidedemethylationthesomaticlineagestogetherwiththefounderpopulationofPGCsundergoawaveofpostimplantationdenovomethylation.ThemethylationiserasedinthedifferentiatingPGCsaftertheirentryintothegonadsbyagermlinespecificmechanism.Thenewmethylationimprintsareestablishedsubsequentlyintheprocessofgametematuration.父源失活TE随机失活，倾向已失活X供体细胞融合入去核MII卵母细胞NEBDPCC假原核形成并快速膨大染色体全基因组水平去甲基化胚胎早期发育基因的激活发生充分的NEBD和PCC的灵长类SCNT胚胎高达20%能发育至囊胚(Mitalipov,Zhouetal.2007)。Sung的研究结果却表明PCC不是牛体细胞重编程的必需条件(Sung,Shenetal.2007)在NT牛胚胎1、2、4细胞检测到的hnRNA明显高于IVF胚胎，NT胚胎的基因转录在1细胞阶段发生，此亦反应出供体细胞的基因表达并没有完全被终止。在正常的受精卵发育中，牛、猪、小鼠、大鼠和人类受精后父源DNA发生快速的主动去甲基化，同时母源DNA随着复制发生被动去甲基化(Xuetal.2005)。牛的父源染色体去甲基化后，很快开始从头甲基化（denovo），在2细胞期前甲基化水平恢复至和母源DNA相同的甲基化水平(Park,Jeongetal.2007)。牛在8-16细胞期，在DNMT3A和DNMT3B酶的作用下，染色体重新从头甲基化，胚胎建立起新的甲基化模式(Deanetal.2001)。随后胚胎染色体的甲基化模式由DNMT1维持，它决定着早期胚胎基因表达的程序性启动。Dnmt161790bpDNA40个外显子mRNAjoin(1..316,13059..13095,14251..14358,14567..14786,17769..17844,19518..19596,21231..21265,21962..22046,26772..26806,28451..28538,31776..31810,32388..32469,34718..34752,35073..35118,35214..35294,35369..35478,38627..38745,39191..39283,40080..40231,40363..40550,40657..40843,43289..43386,43591..43738,45168..45283,45479..45683,46119..46252,48612..48785,51149..51370,52916..53108,53947..54031,54227..54355,54808..55090,55319..55460,56531..56697,57127..57304,57856..58051,58849..59015,59284..59400,60829..60919,61435..61790)鼠基因组中与甲基化直接相关的基因15推测体外培养影响ICM:TETE数量、质量影响胎盘器官发生胚胎和胎儿发育核重编程不完全影响基因表达SCNT胚胎转基因克隆动物的优点转基因的效率高：理论上讲100%后代是转基因动物；大大降低了转基因动物的生产成本，减少了受体使用；缺点：核移植胚胎移植后妊娠率低、流产率高。