枯草芽孢杆菌活菌数的测定操作规程文件编号文件名称编制人编制日期年月日颁发部门审核人审核日期年月日印制份数批准人批准日期年月日生效日期年月日分发部门质量管理部、生产部目的：建立枯草芽孢杆菌活菌数含量的测定
标准
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操作规程范围：本方法适用于的枯草芽孢杆菌活芽孢的测定责任人：内容：1.仪器与工具：电子天平、生物显微镜、摇床、10ml刻度吸管、1ml刻度吸管18×180mm试管、500ml三角瓶、2．试剂与试液：牛肉膏、蛋白胨、琼脂、氯化钠、无菌蒸馏水、等。3.检测培养基
配方
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：牛肉膏3g、蛋白胨10g、琼脂16g、氯化钠5g、蒸馏水1000ml，调至PH7.2，121℃灭菌30min。4.检测步骤：4.1菌液制备：采样量不少于500g，从所采的样品中精确称取10.00g试样，加入已灭菌的带玻璃珠（玻璃珠在80个左右）的500ml锥形瓶中，加入90ml已灭菌的无菌水，在摇床上200r/min摇动60min，即成母液的菌悬液。4.2用1ml无菌吸管吸取1ml上述母液的菌悬液，加入9ml无菌水混匀成1：1×102稀释的菌悬液，这样依此稀释，直至得到1：106；1：107；1：108；1：109等浓度（每个稀释度必须更换无菌吸管）。4.3向每个灭菌培养平皿中倒入约12ml培养基，混合均匀，待凝固后备用。4.4用1ml无菌吸管分别吸取不同稀释浓度菌悬液用涂布棒涂匀，在无菌操作台中静置30min后，倒置于0.2ml，加至已凝固好的培养基中，37℃的恒温培养箱内培养18h—24h。每个样品取3个连续适宜稀释度，每个稀释度重复3次，同时加入无菌水的空白对照，每个稀释度取5个到10个菌落的菌体，涂片染色，显微镜观察识别后计数菌落。5.菌落计数：5.1以平板上出现20个——200个菌落数的稀释度平板为记数标准，并确定为稀释倍数。5.2当只有一个稀释度，其平均菌落数在20个——200个之间时，则以该平均菌落数乘以其稀释倍数。5.3若有两个稀释度，其平均菌落数在20个——200个之间时，应按两者菌落数之比值来决定。6、结果统计与计算根据菌落数特征判定，分别数出平板中的枯草芽孢杆菌菌数及杂菌数（杂菌是指除枯草芽孢杆菌外的其他菌种）。统计算出同一稀释度三个平皿上菌落平均数（B）和杂菌数（E）。6.1有效活菌总数按式（1）计算；A=10×B×C×5⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯(1)式中：A——有效活菌总数，cfu/gB——菌落活菌数；C——稀释倍数。6.2杂菌率按式（2）计算：ED=×100⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯(2)E+A式中：D——杂菌率，%E——杂菌数。
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