mCIM、eCIM联合试验对CRE中的碳青霉烯酶检测价值

朱胜明

（罗田县人民医院 湖北 罗田 438600）

近年来，随着药物的滥用，细菌耐药性成为至关重要的问题，产生耐药性的多数为耐碳青霉烯肠杆菌类细菌（CRE）[1]，因此及时检出CRE 是控制感染最重要的途径。临床常以基因测序检测作为金标准，但此 方案 气瓶 现场处置方案 .pdf气瓶 现场处置方案 .doc见习基地管理方案.doc关于群访事件的化解方案建筑工地扬尘治理专项方案下载 检查过程中要求较高，需对DNA 进行扩增，检查时间较长，因此不利于患者及时治疗，临床应用受到限制。改良的碳青霉烯灭活（mCIM）是现阶段临床较为多见的检查方案，主要将接种环生长在营养肉汤中，然后采用无菌试纸浸没于液体中，再将其取出贴于大肠杆菌平板中。根据抑菌圈直径进行判定，能在短时间内作出判定，但此方案易产生抵抗相应，出现中性结果，不能准确判断出是否存在CRE。mCIM、eCIM 联合试验主要将两者的美罗培南试纸放置于同一块涂有大肠埃希菌的平板上，可通过两种结果共同判定[2]，但将两者联合用于检测CRE 的效果并未明确。基于此，本研究将探讨mCIM、eCIM 联合试验对CRE 中的碳青霉烯酶检测价值，结果如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

纳入我院2020 年2 月至2021 年3 月92 例感染患者，将患者体内分离的88 株CRE 行耐药性分析，以基因测序对基因型的确定作为金标准，进行mCIM、eCIM 联合检测及mCIM 检测。男性50 例，女性42 例；获取途径：痰液12 例，尿液13 例，肺泡灌洗液16 例，血液10 例，脑脊液5 例，分泌物15 例，穿刺液11 例，腹腔引流液8 例，浅静脉导管2 例。

1.2 方法

以基因测序对基因型的确定作为金标准，进行mCIM、eCIM 联合检测，主要仪器包括PCR 扩增仪器（厂家：南京贝登医疗股份有限公司；型号：Lepgen-96）及所需的聚合酶试剂、营养肉汤、dNTPs、美罗培南试纸，全自动细菌检测仪（厂家：上海聚慕医疗器械有限公司；型号：IGL-200），凝胶成像系统仪[厂家：迪图（上海）生物科技有限公司；型号：JS-680D]，电泳仪（厂家：浙江赛德；型号：DYCP-37B）。

mCIM、eCIM 联合检测：

（1）mCIM。首先在2 毫升营养肉汤内加入过夜的培养纯菌，震荡10 秒～15 秒以达到混匀的目的，美罗培南试纸置于管内，并保证均浸于悬液内，在35℃环境中孵育4 小时，结束时立即将大肠埃希菌悬液（主要由生理盐水或营养肉汤制备）涂布在水解蛋白的平板上，确保15 分钟内完成菌悬液的制备及平板涂布，干燥时间为3 分钟～10 分钟。在肉汤中采用10 微升接种环将试纸从TSB 内取出，并将其贴在试管内侧壁，轻按脱去水分，然后将取出的纸片置于大肠杆菌平板上，倒置，在35℃环境中孵育18 小时～24 小时，测量抑菌圈直径。

（2）eCIM 。将0.5 毫摩尔/ 升20 微升EDTA液置于2 毫升肉汤内，将1 微升接种环生长于血琼脂平板上，同时震荡10 秒～15 秒以混匀。在每管中均完全浸入10 微克无菌试纸，于35℃环境中孵育4小时，结束时立即将大肠埃希菌悬液（主要由生理盐水或营养肉汤制备）涂布在水解蛋白的平板上，确保15 分钟内完成菌悬液的制备及平板涂布，干燥时间为3 分钟～10 分钟，涂布于MHA 平板上，确保15分钟内完成菌悬液和平板涂布，干燥3 分钟～10 分钟。在营养肉汤中采用接种环取出美罗培南试纸，在试管内壁贴上纸片，并适当按压将多余水分挤去，然后MHA 平板上放置纸片。倒置平板，在35℃环境中孵育18 小时～24 小时，量抑菌圈直径。mCIM、eCIM 联合进行；将mCIM、eCIM 内的美罗培南试纸放置于同一块涂有大肠埃希菌的平板上。

（3）解读与判断。①mCIM：碳青霉烯酶（+）：抑菌圈直径6 毫米～15 毫米/直径16 毫米～18 毫米，但散在菌落存在于抑菌圈；碳青霉烯酶（-）：抑菌圈直径超过19 毫米；中性：直径16 毫米～18 毫米。②eCIM：阳性：直径≥5 毫米；阴性：直径≤4 毫米。③mCIM、eCIM：mCIM 阴性时，不管eCIM 怎样， 报告 软件系统测试报告下载sgs报告如何下载关于路面塌陷情况报告535n,sgs报告怎么下载竣工报告下载 均为阴性；mCIM 显示阳性，eCIM 显示阴性时，报告均为丝氨酸酶；mCIM 显示阳性，eCIM 显示阳性，报告显示金属酶：mCIM 显示中性，不管eCIM如何，均不能判断碳青霉烯酶存在与否，需分子生物学方法进一步检查核实。

基因测序：以加热煮沸法做DAN 提取形成PCR 模版，同时扩增碳青霉烯酶，合成4 对基因引物，反应结束后采取PCR 产物5 微升行凝胶电泳，结束后，摄像（主要是采用成像仪），保存图片，对PCR 扩增的阳性产物进行测序，以确定基因亚型。

1.3 观察指标和评价标准

观察两组检测灵敏度、特异度、阴性与阳性预测值。88 株CRE 行基因检测出84 株为阳性、4 株为阴性，经mCIM、eCIM 联合检测出83 株阳性、5 株阴性（联合检测过程中只要出现1 株阳性即为阳性），经mCIM 单独检测出76 株阳性、12 株阴性。

1.4 统计学方法

数据录入SPSS22.0 软件中分析，计数资料用%表示，采用X2检验；计量资料用（）表示，采用t检验，P＜0.05 表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 检验效能对比

mCIM、eCIM 联合检测灵敏度（97.62%）高于mCIM 检测组（88.09%）（P＜0.05），特异度（75.00%）、阴性与阳性预测值（60.00%、98.80%）与mCIM 检测组（50.00%、16.67%、97.37%）对比差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1 和表2。

表1 两种方案检验效能对比

表2 两种方案检验效能对比（n，%）

3 讨论

随着抗生素药物的使用，细菌出现耐药性在临床上较为常见，细菌耐药性已经成为世界抗感染治疗中重要的问题之一。细菌耐药性问题的日益严重，很容易导致对患者抗感染治疗的失败，不仅会提升人们的患病概率，还会增加患者疾病致死率，且患者会增加一定的治疗费用，带来更大的经济负担。细菌耐药性是临床现阶段极其常见的临床研究，CRE 产生耐药性在临床上较为常见，碳青霉烯酶内主要携带在转座子、质粒等物质上，从而促进环境中肠杆菌细菌的存储，并能产生多重耐药作用。因此需及时检出耐药状况，作出相应的用药调整，加快感染的康复[3]，并进一步减少患者抗感染药物的使用量，减轻患者经济负担。临床过往主要以基因测序作为金标准[4]，但此项技术检测花费时间较长，且检查过程较繁重，在临床上应用受到限制。现在临床主要以mCIM 检测为主，时间相对较短，但单独使用此项技术会抵抗美罗培南活性，因此对提高检测灵敏度的效果不佳[5]，可与eCIM 联合，以提升临床应用价值。mCIM、eCIM 联合试验是将两张美罗培南试纸同时放置于平板中，以减少对美罗培南活性的抵抗作用，从而共同判定检测结果，若将其用于CRE 中的碳青霉烯酶检测或许对提高灵敏度效果更佳。

本研究结果表明，88 株CRE 行基因检测出84株为阳性、4 株为阴性，经mCIM、eCIM 联合检测灵敏度（97.62%）高于mCIM 检测组（88.09%）（P＜0.05），特异度（75.00%）、阴性与阳性预测值（60.00%、98.80%）与mCIM 检测组（50.00%、16.67%、97.37%）对比差异无统计学意义（P＞0.05），说明mCIM、eCIM 联合试验对CRE 中的碳青霉烯酶的检出结果高，具有较高的临床应用价值。分析原因可能是单纯使用mCIM 试验时，菌株能产生碳青霉烯酶，可抵抗美罗培南的活性，而eCIM 试验能有效结合菌株中的金属酶，以此产生螯合物，此类物质能有效保护美罗培南活性，联合使用具有较高的诊断效应。mCIM、eCIM 联合试验主要是将两类试验中美罗培南试纸同时浸没于平板中，达到一定时间后将其捞出，以两者共同结果行比对鉴定。在黄军祉[6]研究中说到，mCIM 试验主要适用于金属内酰胺酶检测，当菌株携带了碳青霉烯酶时，则及有可能出现假阴性结果。李世荣[7]等学者在研究中表明，mCIM、eCIM 联合试验特异度大于92%，灵敏度大于95%，试验结果中出现两例假阴性，而联合试验对NDM 及KPC 基因的单独存在时，能区分金属酶及丝氨酸酶。虽然此项技术比传统检验较为复杂，但能加强基因的检测结果，从而提高检测灵敏度，具有较高的诊断效能，临床应用效果较好。

综上所述，mCIM、eCIM 联合试验诊断CRE中的碳青霉烯酶的效能更高，临床应用效果值得肯定。

-全文完-