APX测定方法APX1.酶液制备取1.0g植物叶片剪碎，按1∶3（W/V）加入预冷的50mmol/LK2HPO4-KH2PO4缓冲液进行研磨提取，用2层纱布过滤，滤液离心（4000×g）10min，上清液作酶粗提液供测定。2.酶活性测定 3ml反应混合液中含50mmol/LK2HPO4-KH2PO4缓冲液（pH7.0），0.1mmol/LEDTA-Na2，0.3mmol/LAsA，0.06mmol/LH2O2和0.1ml酶液。加入H2O2后立即在20℃下测定10～30秒内的A290变化，计算单位时间内AsA减少量及酶活性。抗坏血酸过氧化物酶（ascorbateperoxidase，APX，EC1.11.1.11）参考Jiang和Zhang（2001，2002）的方法，取约0.2克材料置液氮中研磨成粉。6mL提取液（50mmolL-1Na2HPO4-NaH2PO4缓冲溶液pH7.0，1mmolL-1EDTA，1mmolL-1抗坏血酸（AsA）（保持酶的稳定），1％（W/V）不溶性聚乙烯吡咯烷酮）中研磨成匀浆。匀浆经4℃，12000×g条件下离心6分钟，取上清液在4℃，26900×g条件下再离心15分钟。取上清液进行酶活性测定。或液氮冷却后存于－80℃。参照Nakano和Asada（1981），Knorzer等（1996）的方法，利用APX在H2O2存在的条件下使抗坏血酸量减少的原理测定酶活性。测定酶活性时，取约含50μg蛋白的酶提取液加入1mL酶反应液（50mmolL-1Na2HPO4-NaH2PO4缓冲溶液，pH7.0，含1mmolL-1抗坏血酸和2.5mmolL-1H2O2）中，充分混匀。紫外－可见分光光度计上读取290nm处吸光光度值在3分钟内每15秒中的变化。计算每分钟内每毫克蛋白转化的抗坏血酸量(摩尔消光系数为2.8Lmmol-1cm-1)，用以表示酶活性的大小，单位为μmolAsAmin-1mg-1蛋白。
本文档为【APX 测定方法】，请使用软件OFFICE或WPS软件打开。作品中的文字与图均可以修改和编辑，
图片更改请在作品中右键图片并更换，文字修改请直接点击文字进行修改，也可以新增和删除文档中的内容。
该文档来自用户分享，如有侵权行为请发邮件ishare@vip.sina.com联系网站客服，我们会及时删除。
[版权声明] 本站所有资料为用户分享产生，若发现您的权利被侵害，请联系客服邮件isharekefu@iask.cn，我们尽快处理。
本作品所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权，请谨慎使用。
网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽..)目的在于配合国家政策宣传，仅限个人学习分享使用，禁止用于任何广告和商用目的。
浙公网安备 33021202002483