蛋白质含量测定

凯氏定氮法中文名称：凯氏定氮法英文名称：Kjeldahldetermination定义：测定化合物或混合物中总氮量的一种 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 。即在有催化剂的条件下，用浓硫酸消化样品将有机氮都转变成无机铵盐，然后在碱性条件下将铵盐转化为氨，随水蒸气馏出并为过量的酸液吸收，再以 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 碱滴定，就可计算出样品中的氮量。由于蛋白质含氮量比较恒定，可由其氮量计算蛋白质含量，故此法是经典的蛋白质定量方法。百科名片HYPERLINK"http://baike.baidu.com/picview/606854/606854/0/6f4703953826d8377bf480ba.html"\t"_blank"HYPERLINK"http://baike.baidu.com/picview/606854/606854/0/6f4703953826d8377bf480ba.html"\o"查看图片"\t"_blank"  凯氏定氮法凯氏定氮法是测定化合物或混合物中总氮(​http:​/​​/​baike.baidu.com​/​view​/​1877046.htm"\t"_blank​)量的一种方法。即在有催化剂的条件下，用浓硫酸消化样品将有机氮(​http:​/​​/​baike.baidu.com​/​view​/​3872647.htm"\t"_blank​)都转变成无机铵盐，然后在碱性条件下将铵盐转化为氨，随水蒸气馏出并为过量的酸液吸收，再以标准碱滴定，就可计算出样品中的氮量。由于蛋白质含氮量比较恒定，可由其氮量计算蛋白质含量，故此法是经典的蛋白质定量方法。原理蛋白质(​http:​/​​/​baike.baidu.com​/​view​/​15472.htm"\t"_blank​)是含氮的有机化合物(​http:​/​​/​baike.baidu.com​/​view​/​163374.htm"\t"_blank​)。蛋白质与硫酸(​http:​/​​/​baike.baidu.com​/​view​/​1730.htm"\t"_blank​)和催化剂(​http:​/​​/​baike.baidu.com​/​view​/​62440.htm"\t"_blank​)一同加热消化，使蛋白质分解，分解的氨与硫酸(​http:​/​​/​baike.baidu.com​/​view​/​1730.htm"\t"_blank​)结合生成硫酸铵。然后碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液(​http:​/​​/​baike.baidu.com​/​view​/​434115.htm"\t"_blank​)滴定(​http:​/​​/​baike.baidu.com​/​view​/​85779.htm"\t"_blank​)，根据酸的消耗量乘以换算系数(​http:​/​​/​baike.baidu.com​/​view​/​3248285.htm"\t"_blank​)，蛋白质含量。含氮量*6.25=蛋白含量.有机物中的胺根在强热和CuSO4，浓H2SO4作用下，硝化生成（NH4）2SO4反应式为：2NH2+H2SO4+2H=(NH4)2SO4（其中CuSO4做催化剂）2.在凯氏定氮器中与碱作用，通过蒸馏释放出NH3，收集于H3BO3溶液中反应式为:(NH4)2SO4+2NaOH=2NH3+2H2O+Na2SO42NH3+4H3BO3=(NH4)2B4O7+5H2O3.用已知浓度的H2SO4（或HCI）标准溶液滴定，根据HCI消耗的量计算出氮的含量，然后乘以相应的换算因子(​http:​/​​/​baike.baidu.com​/​view​/​5656673.htm"\t"_blank​)，既得蛋白质的含量反应式为：(NH4)2B4O7+H2SO4+5H2O=(NH4)2SO4+4H3BO3(NH4)2B4O7+2HCl+5H2O=2NH4Cl+4H3BO3试剂：所有试剂均用不含氨的蒸馏水(​http:​/​​/​baike.baidu.com​/​view​/​135934.htm"\t"_blank​)配制。2.1硫酸铜(​http:​/​​/​baike.baidu.com​/​view​/​4360.htm"\t"_blank​)。2.2硫酸钾。2.3硫酸。2.42%硼酸溶液。2.5混合指示液：1份0.1%甲基红(​http:​/​​/​baike.baidu.com​/​view​/​1032613.htm"\t"_blank​)乙醇溶液与5份0.1%溴甲酚绿(​http:​/​​/​baike.baidu.com​/​view​/​1290348.htm"\t"_blank​)乙醇溶液临用时混合。也可用2份0.1%甲基红(​http:​/​​/​baike.baidu.com​/​view​/​1032613.htm"\t"_blank​)乙醇溶液与1份0.1%次甲基蓝(​http:​/​​/​baike.baidu.com​/​view​/​1189883.htm"\t"_blank​)乙醇溶液临用时混合。2.630%氢氧化钠溶液。2.70.025mol/L硫酸标准溶液(​http:​/​​/​baike.baidu.com​/​view​/​434115.htm"\t"_blank​)或0.05mol/L盐酸标准溶液。仪器定氮蒸馏装置:如图所示。  (​http:​/​​/​baike.baidu.com​/​picview​/​606854​/​606854​/​0​/​8bc3a701210d721a738da59c.html"\o"查看图片"\t"_blank​)凯氏定氮法仪器1.安全管2.导管3.汽水分离管4.样品入口5.塞子6.冷凝管7.吸收瓶(​http:​/​​/​baike.baidu.com​/​view​/​1705106.htm"\t"_blank​)8.隔热液套9.反应管10.蒸汽发生瓶操作1、样品处理(​http:​/​​/​baike.baidu.com​/​view​/​2830813.htm"\t"_blank​)：精密称取0.2-2.0g固体样品或2-5g半固体样品或吸取10-20ml液体样品（约相当氮30-40mg），移入干燥的100ml或500ml定氮瓶中，加入0.2g硫酸铜(​http:​/​​/​baike.baidu.com​/​view​/​4360.htm"\t"_blank​)，6g硫酸钾及20毫升硫酸，稍摇匀后于瓶口放一小漏斗，将瓶以45度角斜支于有小孔的石棉(​http:​/​​/​baike.baidu.com​/​view​/​1021.htm"\t"_blank​)网上，小火加热，待内容物全部炭化，泡沫完全停止后，加强火力，并保持瓶内液体微沸，至液体呈蓝绿色澄清透明后，再继续加热0.5小时。取下放冷，小心加20ml水，放冷后，移入100ml容量瓶中，并用少量水洗定氮瓶，洗液并入容量瓶中，再加水至刻度，混匀备用。取与处理样品相同量的硫酸铜、硫酸钾(​http:​/​​/​baike.baidu.com​/​view​/​4435.htm"\t"_blank​)、浓硫酸(​http:​/​​/​baike.baidu.com​/​view​/​60731.htm"\t"_blank​)同一方法做试剂空白(​http:​/​​/​baike.baidu.com​/​view​/​248222.htm"\t"_blank​)试验。但是此法比较危险，不易在实验室演示，现在大多数实验室有消煮仪一次可以进行多个（一次可以消煮16个样品）样品处理(​http:​/​​/​baike.baidu.com​/​view​/​2830813.htm"\t"_blank​)，并有通风橱进行通风，温度可以自己设定，更加安全和可操作性，因此逐步成为主要的凯氏定氮法的首选处理方法。一般消解温度都设在240度及240度以上，如果想快速消解可以适当提高温度甚至可以用最大温度进行消解。2、按图装好定氮装置(​http:​/​​/​baike.baidu.com​/​view​/​393108.htm"\t"_blank​)，于水蒸气发生器内装水约2/3处加甲基红(​http:​/​​/​baike.baidu.com​/​view​/​1032613.htm"\t"_blank​)指示剂(​http:​/​​/​baike.baidu.com​/​view​/​132918.htm"\t"_blank​)数滴及数毫升硫酸(​http:​/​​/​baike.baidu.com​/​view​/​1730.htm"\t"_blank​)，以保持水呈酸性，加入数粒玻璃珠以防暴沸，用调压器控制，加热煮沸水蒸气发生瓶内的水。3、向接收瓶内加入10ml2%硼酸溶液及混合指示剂(​http:​/​​/​baike.baidu.com​/​view​/​1259477.htm"\t"_blank​)1滴，并使冷凝管的下端插入液面下，吸取10.0ml样品消化液由小玻璃杯流入反应室，并以10ml水洗涤小烧杯使流入反应室内，塞紧小玻璃杯的棒状玻璃塞。将10ml40%氢氧化钠溶液倒入小玻璃杯，提起玻璃塞使其缓慢流入反应室，不能立即将玻璃盖塞紧，这样易使玻璃塞粘在进样口，应先用蒸馏水冲洗然后再盖，并加水于小玻璃杯以防漏气。夹紧螺旋夹，开始蒸馏，蒸气通入反应室使氨通过冷凝管而进入接收瓶内，蒸馏5min。移动接收瓶，使冷凝管下端离开液皿，再蒸馏1min，然后用少量水冲洗冷凝管下端外部。取下接收瓶，以0.05N硫酸或0.05N盐酸(​http:​/​​/​baike.baidu.com​/​view​/​1729.htm"\t"_blank​)标准溶液定至灰色或蓝紫色为终点。同时吸取10.0ml试剂空白(​http:​/​​/​baike.baidu.com​/​view​/​248222.htm"\t"_blank​)消化液按3操作。计算X=(（V1-V2）*N*0.014)/(m*（10/100）)*F*100%X：样品中蛋白质的百分含量，g；V1：样品消耗硫酸或盐酸标准液的体积，ml；V2：试剂空白(​http:​/​​/​baike.baidu.com​/​view​/​248222.htm"\t"_blank​)消耗硫酸或盐酸标准溶液(​http:​/​​/​baike.baidu.com​/​view​/​434115.htm"\t"_blank​)的体积，ml；N：硫酸或盐酸标准溶液的当量浓度(​http:​/​​/​baike.baidu.com​/​view​/​1422535.htm"\t"_blank​)；0.014：1N硫酸或盐酸标准溶液1ml相当于氮克数；m：样品的质量（体积），g（ml）；F：氮换算为蛋白质的系数。蛋白质中的氮含量一般为15～17.6%，按16%计算乘以6.25即为蛋白质，乳制品为6.38，面粉为5.70，玉米、高粱为6.24，花生为5.46，米为5.95，大豆及其制品为5.71，肉与肉制品为6.25，大麦、小米、燕麦、裸麦为5.83，芝麻、向日葵为5.30。注意事项：（1）样品应是均匀的。固体样品应预先研细混匀，液体样品应振摇或搅拌均匀。（2）样品放入定氮瓶内时，不要沾附颈上。万一沾附可用少量水冲下，以免被检样消化不完全，结果偏低。（3）硝化时如不容易呈透明溶液，可将定氮瓶放冷后，慢慢加入30%过氧化氢（H2O2）2-3ml，促使氧化。（4）在整个消化过程中，不要用强火。保持和缓的沸腾，使火力集中在凯氏瓶底部，以免附在壁上的蛋白质在无硫酸存在的情况下，使氮有损失。（5）如硫酸(​http:​/​​/​baike.baidu.com​/​view​/​1730.htm"\t"_blank​)缺少，过多的硫酸钾会引起氨的损失，这样会形成硫酸氢钾(​http:​/​​/​baike.baidu.com​/​view​/​418608.htm"\t"_blank​)，而不与氨作用。因此，当硫酸(​http:​/​​/​baike.baidu.com​/​view​/​1730.htm"\t"_blank​)过多的被消耗或样品中脂肪含量过高时，要增加硫酸的量。（6）加入硫酸钾的作用为增加溶液的沸点，硫酸铜(​http:​/​​/​baike.baidu.com​/​view​/​4360.htm"\t"_blank​)为催化剂，硫酸铜在蒸馏时作碱性反应(​http:​/​​/​baike.baidu.com​/​view​/​1526220.htm"\t"_blank​)的指示剂。（7）混合指示剂(​http:​/​​/​baike.baidu.com​/​view​/​1259477.htm"\t"_blank​)在碱性(​http:​/​​/​baike.baidu.com​/​view​/​771396.htm"\t"_blank​)溶液中呈绿色，在中性溶液(​http:​/​​/​baike.baidu.com​/​view​/​1437828.htm"\t"_blank​)中呈灰色，在酸性溶液中呈红色。如果没有溴甲酚绿，可单独使用0.1%甲基红乙醇溶液。（8）氨是否完全蒸馏出来，可用PH试纸试馏出液是否为碱性(​http:​/​​/​baike.baidu.com​/​view​/​771396.htm"\t"_blank​)。（9）吸收液也可以用0.01当量的酸代 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 硼酸，过剩的酸液用0.01N碱液(​http:​/​​/​baike.baidu.com​/​view​/​3728396.htm"\t"_blank​)滴定，计算时，A为试剂空白(​http:​/​​/​baike.baidu.com​/​view​/​248222.htm"\t"_blank​)消耗碱液数，B为样品消耗碱液数，N为碱液浓度，其余均相同。（10）以硼酸为氨的吸收液，可省去标定碱液的操作，且硼酸的体积要求并不严格，亦可免去用移液管，操作比较简便。（11）向蒸馏瓶中加入浓碱时，往往出现褐色沉淀物，这是由于分解促进碱与加入的硫酸铜(​http:​/​​/​baike.baidu.com​/​view​/​4360.htm"\t"_blank​)反应，生成氢氧化铜(​http:​/​​/​baike.baidu.com​/​view​/​460036.htm"\t"_blank​)，经加热后又分解生成氧化铜的沉淀。有时铜离子(​http:​/​​/​baike.baidu.com​/​view​/​1973124.htm"\t"_blank​)与氨作用，生成深l蓝色的结合物[Cu(NH3)4]2+（12）这种测算方法本质是测出氮的含量，再作蛋白质含量的估算。只有在被测物的组成是蛋白质时才能用此方法来估算蛋白质含量。