胶回收DNA试剂盒的原理和
方法
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一原理
胶回收DNA试剂盒的原理和方法\
一 原理
1、硅胶膜捕获核酸的原理是什么,
利用核酸在裂解液下与硅胶膜特异结合，在洗脱液条件下被洗脱的原理。 2、我们一般都用硅胶膜来浓缩DNA片断，尤其是PCR产物，那硅胶膜能对RNA吸附吗,效率有多少,
可以，在酸性条件下可以结合，国外公司试剂盒所用大多是此原理。效率中等。 3、硅胶膜对双链DNA有吸附作用，那对单链DNA有吸附作用吗,对DNA/RNA杂合链能吸附吗,吸附效率分别有多少,
对单链DNA有吸附作用。DNA/RNA杂合链能吸附，但在裂解条件下DNA/RNA可能会解离，可以尝试一下。另外可以尝试用Desaltfast200快速脱盐试剂盒，对DNA/RNA影响较小，纯化速度快。
二 一般试剂盒的用法
1 试剂盒的产品包括
溶液I(融胶液)binding Buffer
溶液II(洗涤液) (第一次使用前按照说明加入无水乙醇)
溶液III(洗脱液)
DNA纯化柱
废液收集管
2
使用方法
消防栓的使用方法指针万用表的使用方法84消毒液使用方法消防灭火器使用方法铁材计算器使用方法
(按照说明，不同公司产品操作方法有差异这里以其中一种为例) a 切胶回收后，称重，将胶切碎或在离心管内用1ml枪头捣碎。
加入等体积的溶液I(如胶为100mg，则加100微升溶液I)，vortex或颠倒混匀。 b
c 50-60?水浴加热约10分钟至胶全融，期间，需vortex或颠倒混匀3-4次，以加速凝胶
融解。果胶碎片较小，3-5分钟即可全融，凝胶碎片较大则需较长时间，胶全融后至少
再在50-60?水浴加热2分钟。50-60?间任一温度都适合于本试剂盒。如果DNA片断
大于5kb，宜颠倒混匀。Vortex容易导致大片断DNA断裂。
d 加入到DNA纯化柱内，室温放置1分钟。如果体积较大，DNA纯化柱内容纳不下，
可以把部分样品加入到纯化柱内，经离心处理后，再加入剩余的样品继续处理。 e 最高速(10000g，约12000-14000rmp左右)离心1分钟，倒弃收集管内的液体。
注意:这一步一定要达到16000g，较低离心速度会导致回收效率下降。 f 在DNA纯化柱内加入700微升溶液II，室温放置1分钟。
g 最高速离心1分钟，洗去杂质。倒弃收集管内的液体。
h 再加入500微升溶液II，最高速离心1分钟，进一步洗去杂质。倒弃收集管内的液体。 i 最高速再离心1分钟，除去残留液体并让残留的乙醇充分挥发。
j. 将DNA纯化柱置于1.5毫升离心管上，加入30微升溶液III至管内柱面上，放置1分
钟。用1.5ml离心管作为收集管。溶液III需要直接加至管内柱面中央，使液体被纯化
柱吸收。如果不慎将溶液III沾在管壁上，一定要震动管子，使液体滑落到管底，以便
被纯化柱吸收。也可以用重蒸水或MiliQ级纯水替代溶液III，但是水的pH应不小于
6.5。如需得到较高浓度的DNA，可以只加20微升溶液III，但产量会略有下降。放置
较长时间例如3-5分钟，会对提供产量略有帮助。
k. 最高速离心1分钟，所得液体即为高纯度DNA。
浙公网安备 33021202002483