【doc】冬虫夏草的人工栽培 （二）
冬虫夏草的人工栽培 (二)
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=冬虫覃曹的分膏一般
应在无菌室或接种箱内进行.无菌 室在使用前耍预先喷洒福尔马林溶 液(1:40)进行消毒,然后经过紫 光外光杀菌处理.分离所用的工具 都要进行严格消毒.分离的
方法
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有 蛆织分离法和稀释分离法两种. 1,姐织分离法:是指直接切
取虫草的子座部分或菌桉部分的一 小块组织,经过
表
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面消毒和灭菌承 诜后,在无菌操作条件下,由虫 草体上移到培养基上.切取的组织 大小要适宜,一般1毫米左右,组 织切得过大,会增加杂菌污染的机 会;切得过小,一方面在表面消毒 过程中根容易将该组织杀死,另一 方面也延长了虫草菌种的生长时 间.用这种方法培养4,B个月可得 到冬虫夏草母种.
2,稀释分离法:是将能产生
大量孢子的真菌靖存留于寄主和其 他基质上的孢子铣下,配制成孢子
悬浮液,经稀释后与溶化并冷却到 l5'C左右的培养基混台,然后倒八 灭过菌的培养皿中进行培养.冬虫 夏草多用此法进行培养:用硫酸 纸或不男透承的其他纸翩成小口袋 套于天然生长但尚未成熟的冬虫草 子座上,特冬虫夏草成熟后,子囊 孢子即弹射出来.附着于纸袋内壁 上,取附有这些子囊强子的纸袋 lOO个,浸于1:l0的土壤浸液中, 24,时后用小刀仔细把子囊孢子 纸袋上谢出,收集于离心管中,离 I~,1o分钟后,弃去上清液,用土壤 谩出液反复洗涤5敬,再用10师 20和的蔗糖溶液分别洗涤3敬,叉 用50晷藏糖溶液离1~,3o分钟,牧集 含有子囊孢子的上浮液,放^含有 庆大霉素(1O0单位/毫升)的1: 1土壤浸出液中,在15—20C的 温度下培养3—5天,便可放在培养 基上培养.
培养基的配方:燕麦片30党. 琼脂l7—2O克水looo毫升.制洼 是:燕麦片加水后在水浴上加热1 小对,用纱布垃德后加东补足looo 毫升,加琼脂溶化后舟装灭菌 (12】'C,20分钟).若琼脂用
量增加到30克,培养基不容易干 燥,可用于鞍长时间的培养,周对
对促进虫草子囊孢子的产
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虫草分离后放在上述培养基培 养,几天后就可得出虫草菌种了. 三,膏兰体豹培养是指扩
大由虫草组织分离而获得的菌丝体 数量,以便进一步培养后使其发生 分化.最后选至形成子座的目的. l虫革苗种的穆植:'虫草菌种 的移植是虫草菌丝体培养的开端. 因为只有通过移植,才能扩大虫草 内人工培养规模,同时移植可以避 免菌种老化或生长不良以及杂菌 的污染.移植就是用经火焰灭菌的 接种环把冬虫草的菌种由原来的培 养基移植到新的培养基上,操作时 要在火焰上进行.具体方法是:左 手把培养好的原种试管和待接试管 并拿住,右手把棉塞一边转动一 边拔出,夹在右手小指和无名指中 间及无名指与中指之间,这时注意 不要接触到进入试管的接种环部 位.在整个操作中,试管口不要朝 上而必须始终对着火焰的方向,用 火焰烧管口,接种环用火焰灭菌 .
j,立刻将尖端伸进待接的试管
中,注意不要碰到试管内的琼脂. 要将接种环的前端浸到固体培养基 斜面下部的冷凝水中,使之迅速冷 却.随后用接种环(或接种刽)从 虫草菌种试管内的斜面上.挑取谷 粒或黄豆般大小的菌种一块,够出 该试管后迅速转八另,支待接试管 内,将菌种放在培养基表面的中央 种童业'25
位置.然后取出接种环,试营口经 火焰烧秸,甩棉塞穿过火焰迅速塞 紧试管.
2菌丝体的培摹:将分离栅
培养后所得的虫草菌种用上述方法 移植到含有多性蛋白胨10克葡萄l 糖Ioo克酵母膏i克,硫酸镁o.s; 克,磷酸二氢钾I克琼脂粉20克 燕馏水1ooo毫升及少量生长素的培 养基上进行恒温(15—20.c)培 养.10天后可见芽管伸长,分枝并 开始形成菌丝,1个月后就有细小 无色的菌落出现,2#-月菌落直径 发展到2,6毫米,3个月便有很短 的藏白色气生菌丝,4个月后菌落 直径可达1—2厘米,菌落凸起且表 面皱折不平,灰白至擦黄色,基内- 苗丝棕黑色,并有棕黑色色素扩散 到培养基中.
菌丝体的培养方式一般是静置
培养,其特点是在整个培养过程 中,不需施加外来机械作用使其振 荡的情况下诱导虫草子座的形成. (持壤)
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