荆半夏愈伤组织培养 2
生物工程学院实验
报告
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姓 名:谢应松 学 号:2012307040202 专 业:生物制药技术 课程名称:《植物细胞学》 指导教师: 李先良 成 绩: 实验
题
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目:荆半夏愈伤组织培养
一、实验目的
1、认识和掌握组织培养
2、了解利用组织培养产生的愈伤组织
二、实验原理
组织培养，又称离体培养，是在无菌的条件下将活器官、组织或细胞放置在适宜的培养基内，并放在适宜的环境中，进行培养而重新形成的细胞、组织或个体。不同激素对不同品系荆半夏的诱导作用是不同的。
三、实验器材
实验器材:超净工作台、光照培养箱、刻度烧杯(1000ml)、小烧杯若干、量筒(1000ml、50ml)、容量瓶(500mL 、250mL)、棕色试剂瓶(500mL、100mL)、药勺、玻棒、洗耳球、洗瓶、电炉、不锈钢镊子、剪刀、解剖刀、酒精灯、无菌吸水纸、一次性手套、记号笔、标签纸，滴管、电子天平(感量为0.0001g)、一般天平(感量为0.1g)、高压灭菌锅、pH计(pH试纸)，三角烧瓶(100mL)、称量纸、
实验试剂:半夏、NAA、2,4-D，BA，
四、实验步骤验方法和步骤:
(1)培养基的配制:
(1)MS+0.2mg/LNAA+0.5mg/L6-BA;
(2)MS+0.2mg/LNAA+1.0mg/L6-BA;
(3)MS+0.2mg/LNAA+2.0mg/L6-BA;
(4)MS+0.5mg/LNAA+0.5mg/L6-BA;
(5)MS+0.5mg/LNAA+1.0mg/L6-BA;
(6)MS+0.5mg/LNAA+2.0mg/L6-BA。
(2)愈伤组织培养
1、准备工作
接种前，用75%酒精棉球或20g/L新洁尔灭擦拭超净工作台台面，将
培养基及接种用具放入超净工作台台面适当位置(培养基中的生长物
质各浓度见表3)，打开超净工作台紫外灯，照射20-30min后关闭，
然后打开风机，约10min后，再开日光灯可进行无菌操作。
2、外植体表面消毒
将半夏在自来水下冲洗干净，用小刀切去外围组织，切成小段置于
50 mL烧杯中，用75%酒精浸泡30 s后，立即除去乙醇。移入含有1-2滴吐温20的0.1% HgCl2(或10,次氯酸钠)溶液中浸泡5 min，用无
菌水洗3次，无菌纸吸干水分后，置于经灭菌处理过的垫有无菌纸的
培养皿中。使用镊子和解剖刀时，应先在酒精灯火焰上炽烧片刻，冷
却后，再将半夏切成约0.5 mm3的小块。以上操作都要求在酒精灯火焰旁进行。注意外植体切割时，动作要快，否则会造成失水而影响生长。为防止操作时失水也可在培养皿中滴几滴无菌水，然后将无菌苗置于其中进行切割。操作人员必需严格按无菌操作
规则
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完成这些步骤，否则会造成外植体污染。
3、 接种
将切好的半夏段接种至盛有培养基的果酱瓶中，每瓶接种2,3粒，快速封口，贴上标签，注明姓名、接种日期、培养基名称和培养
材料
关于××同志的政审材料调查表环保先进个人材料国家普通话测试材料农民专业合作社注销四查四问剖析材料
名称。整理、清洁超净工作台台面。
4、培养
光照12h/d,光照度1500~2000LX，温度25?1?。大约15~25d后，果酱瓶中的外植体就可以胀大，形成愈伤组织。经常观察外植体的生长变化或污染情况，并在培养一段时间后统计外植体的污染率以及愈伤组织的诱导率
五、实验现象、结果
记录
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及整理:
在光照培养条件下，有愈伤组织形成，
六、分析讨论与思考题解答:
在诱导愈伤组织形成实验中，有部分材料污染，但愈伤组织的诱导率较高。总结原因可能有以下几点:
本次实验愈伤组织诱导有小部分被污染，其中污染的可能原因是:无菌室清洁度不够;接种时半夏组织暴露时间过长。另外，也有可能是操作者本身没进行消毒，在实验过程中碰触到半夏段。
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