酶的专一性
实验一 酶的专一性
一、 目的:通过实验，验证酶的专一性，即酶对底物的选择性。
二、 原理:淀粉酶催化淀粉水解，生成麦芽糖和少量葡萄糖，它们均属还原性糖，可使班氏试剂中的Cu2+还原成Cu+，生成砖红色的Cu2O沉淀。但淀粉酶不能催化蔗糖水解，蔗糖不是还原性糖，故不与班氏试剂产生颜色反应。
三、 试剂:1. 1%淀粉溶液 2. 1%蔗糖溶液 3.pH6.8缓冲液 4. 班氏试剂
四、 器材:10mm×100mm试管、试管架、蜡笔、恒温水浴、沸水浴
五、 方法与步骤:
1. 稀释唾液制备:将痰咳尽，用水漱口，含蒸馏水约30ml，作咀嚼运动，2分种后吐入烧杯中备用。 2. 煮沸唾液制备:取上述稀释唾液约5ml，放入沸水浴中煮沸5分钟，取出备用。 3. 取三支试管，标号，按下
表
关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf
加入试剂。
管号 pH6.8缓冲液 1%淀粉溶液 1%蔗糖溶液 稀释唾液 煮沸唾液
1 20滴 10滴 ― 5滴 ―
2 20滴 10滴 ― ― 5滴
3 20滴 ― 10滴 5滴 ―
4(各管摇匀后，放置37?水浴中保温10分钟，取出各管分别加班氏试剂20滴，置沸水浴中3分钟煮沸，观察、记录，并解释结果。
六、观察结果:1号管砖红色 2号管天蓝色 3号管天蓝色
七、结果分析:1. 1号管:稀释唾液中的淀粉酶催化淀粉水解，生成麦芽糖和少量葡萄糖，它们均属还原性糖，使班氏试剂中的Cu2+还原成Cu+，生成砖红色的Cu2O沉淀。
2. 2号管:煮沸唾液中的淀粉酶失活，不能催化淀粉水解，故无还原性糖生成，班氏试剂中的Cu2+没有被还原，显Cu2+的颜色―天蓝色。
3. 3号管:酶具有高度的专一性，淀粉酶不能催化蔗糖水解，蔗糖不是还原性糖，班氏试剂中的Cu2+没有被还原，显Cu2+的颜色―天蓝色。
实验二 转氨基作用
一、 目的:了解不同的组织器官中丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性的大小不同。 二、 原理:α-酮戊二酸与丙氨酸在pH7.4时，经ALT催化进行转氨基作用生成谷氨酸与丙酮酸。丙酮酸与2，4-二硝基苯肼作用，在碱性环境中生成棕红色丙酮酸2，4-二硝基苯腙，用颜色深浅表示酶活性大小，据此比较肝和肌的ALT活性。
三、 试剂:
1. 0.1M磷酸盐缓冲液(pH7.4) 2. ALT基质液:含α-酮戊二酸与丙氨酸
3. 2，4-二硝基苯肼溶液 4. 0.4N NaOH溶液
四、 方法与步骤:
1. 将家兔处死后，立即取出肝和肌，分别以冰生理盐水洗去血液。取10g新鲜肝和肌组织，分别剪碎，加pH7.4磷酸盐缓冲液10ml用细砂研碎，研成匀浆后再加pH7.4磷酸盐缓冲液20ml混匀，用棉花过滤，此即为肝和肌的浸提液。
2. 取试管2支按下表操作:
管号 ALT基质液 肝浸液 肌浸液 置37?水浴 2，4-二硝基苯肼 置37?水浴 0.4N NaOH 1 1ml 3滴 20分钟 10滴 20分钟 5ml
2 1ml 3滴 20分钟 10滴 20分钟 5ml
比较各管的颜色深浅，记录并解释结果。
五、 实验结果:1号管和2号管都显棕红色，但1号管的颜色明显比2号管深。 六、 结果分析:正常情况下ALT存在于细胞内，尤以肝组织中ALT活性最高。
浙公网安备 33021202002483