【doc】用RAPD分析法对铁线莲属7种中药的鉴定研究

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【doc】用RAPD分析法对铁线莲属7种中药的鉴定研究用RAPD分析法对铁线莲属7种中药的鉴定研究 c舌7 用RAPD分析法对铁线莲属7种中药的鉴定研究 .成都军区昆明总医院药剂科(昆明650032) ;2z7}t,?兰.逛杨静张步振田学明叶浩摘要用RAPD法对铁钱莲属7种生药的鉴定[即山棉花ClematischrysocomaFr.,三叶五香血藤C.fasciculifoli口Fr.,小九头狮子草C.ranunculoidesFr.,小木通C.armandiiFr.,红叶铁线莲 C.rubiliaC.H.Wright,红钉耙藤c.brevicaudataDC.,和铁线莲C.floridaThunb.].结果表明 RAPD种司差异明显而同种不同产地差异不日且显 phieDNA)是最近发展起来的一种新的分子标记方法 .:,被广泛应用于生物学中.".该方法与RFIP分析类似,也可以检测DNA 多态性但检测的不是限制性内切酶切片段长度多态性,而是随机引物的PCR特异扩增的多态性故其操作简单 ,快速,不使用 Southern杂交,仅通过PCR反应就可以完成.因此,采用RAPD方法用于生物类中药的鉴定研究.以期探研出一种直接采坩DNA 对生物类中药进行鉴定的新方法. l 材料和方法 1_1生药为铁线莲属7种植物.(表).标本存成都军区昆明医院.实验材料取地上部分,晒干备用. 表实验材料编号辐稚地 1.2试剂:引物:10~nler引物购自中国科学院Tag酶:购自美国PE公司 1.3PCR仪:购自美国PE公司,型号为 PerkinElmerCetusDNATherma1Cy cler480. 圈7种铁线莲属生物的lu引物扩增谱 1山棉花2-二叶五香血唪3叫,九头狮子草4-红叶铁线莲5刈,本通(景洪) 6刈,木通(昆明)7-红钉耙唪8一铁线莲 1.4方法:DNA提取:取lg材料研碎,加入 20ml提取缓冲液(8mol/LUrea,0.4mol/L NaC1.0.05mo1/LTris—HC1.pH8.0, 0.02moI/LEDTA.2Sarcosy1,5PhenoI) 于60C保温30min.用等体积的氯仿提取后, +Address;ZhangRong.DepartmentofPharmacy+KunmingGenera[Hospita Kunming ? 686? , 上清液再用等体积的苯酚一氯仿一异戊醇(25 ;24:1)抽提1次,用无水乙醇沉淀后将沉淀的DNA离心分离,再用70酒精洗两遍后干燥,溶于适量TE中冻存. RAPD反应:扩增总体积为251+其中含lOmmol/LTris—C1(pH8.3),2.0mmol/L, MgC12+dATP,dCTP,dTTP+dGTP各 0.1mmo|/L,引物为0.2~tmoi/L,50ng核 DNA,1.5单位Tag酶.整个扩增程序为 94Clmin36?2rain,72?2rain,经45个循环后,再在72?延伸5rain扩增产物在 1.4的琼脂糖中电泳,经EB染色,在紫外灯下观察并照像 2结果与讨论对4o个引物进行扩增实验,结果5个引物扩增出谱条,如lof物扩增(图).结果表明种间有明显差异而种内差异不明显,如图中5,6号皆为小木通+但6产昆明,5号产景洪,其扩增产物一致.本研究初步表明 RAPD作为一种鉴定方法是台理的,同时, 由于本研究采用干燥的材料,因此对干燥的植物类中药的鉴定就更有实际应用价值在本研究中发现,Tag酶用1单位,没有用I.5单位好;循环由30增到45个后,扩增效果较好;对于不同的扩增材料,扩增优化条件也不相同,而优化条件对成功的扩增极为重要参考文献 I江苏新医学院.中药大辞典.上,下册.上海;上悔科学技术出版社,1986 2WilliamsJGK,eta1.NuetAcMsRes.1990—18:36531 3LeeWoongBin.e1a1.KoreanJournatPlantTax,1993— 23(2)t35 4AdamsRP.eta1.TheoretJcMAppLiedGenet,1993,87 C1,2):22 (1995—10—27收稿) IdentificationofSevenSpeciesofClematis(ClematisL.)byRAPDAnalysis ZhangRongrShaoJienben,TianXuemlng IdentLficationofsevenspeelesofC口tiI.(C.co瑚Fr.,C.armand~Fr.,C.矗sciculifoliaFr.- c.raunculoidesFr.,C.rubifoh'aC.H.Wright.C.JloridaThuubandC.brevicaudataDC.)wasst udiedby RAPDanalysis.Resultsshowedthatthedifferences0fRAPDbetweendiHerentspecieswere significant'but nonsignificantbetweensamespeciesobtainedfrf_mdifferentlocalitLes. 镑-)一f/ 一年生延胡索块茎的研究蕾J7'2/安徽中医学院药…?胡珂?梁益敏播耍采集野生延胡索Corydalisyanh甜".的种子,在苗圃中播种,栽培.发现其出苗率与种子的太小及成熟度有关对其1年生块茎的生长形态及内部结构进行观察,其虽为双子叶植物,但出苗时仅1枚子叶,皮层有分泌组织,形成层发达,而木质部,韧皮部均不发达. 美键调延胡索种子块茎栽培解剖 ,———^一—一 , 延胡索CorydatisyanhusuoW.T.Wang exZ.Y.SuetC.Y.Wu为多年生草本,无 Address:HuKe,DepartmentofPharmacy.Anh {中草药199B年弟27卷第11 毛,野生于丘陵坡地林下,也可栽培生长.其地上茎高5~25cm,茎生叶.互生全裂.掖针盯 " m n , , , ,

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