【doc】水提醇沉法从葵花籽中提取绿原酸

【doc】水提醇沉法从葵花籽中提取绿原酸 水提醇沉法从葵花籽中提取绿原酸 ※工2006,Vo1.27,No.01159 水提醇沉法从葵花籽中提取绿原酸 郑喜群1,2,蒋继丰1,刘晓兰1,孙秀云1 (1.齐齐哈尔大学生命科学与工程学院,黑龙江齐齐哈尔161006: 2.中国农业大学食品科学与营养工程学院,北京100083) 摘要:绿原酸具有抗菌,抗病毒,抗氧化等生物活性.葵花籽富含绿原酸.以水酶法提 取葵花籽油脂后分离 出的水浸提液为原料,采用醇沉淀法去除浸提液中的多糖,抽滤浓缩滤液后得到绿 原酸.多次实验结果表明,浸 提液浓缩到固形物含量在13%时,加入浸提浓缩液体积l倍量的95%的乙醇沉淀 反复处理两次, 并过滤掉多糖, 滤液再经真空浓缩得到纯度76%左右的绿原酸. 关键词:葵花籽;浸提液:绿原酸;多糖 ExtractionofChlomgenicAcidfromSunflowerSeedsbyWaterSolutionandAlcoholSedimenmtion ZHENGXi—qun,,JIANGJi—feng.,LIUXiao—lan.,SUNXiu—yun. (1.CollegeofLifeScienceandEngineering,QiqiharUniversity,Qiqihar161006,China~ 2.CollegeofFoodScienceandNutritionalEngineering,ChinaAgriculturalUniversity,Beijing100083,China) Abstract:Chlorogenicacidhasbiologicalactivitysuchasanti-microbes,anti— virus,oxidationpreventionandSOon.Sunflower seedsarefullofchlorogenicacid.Thisexperienceextractedchlorogenicacidoutofwasteaqueoussolutionfromwater-enzyme methodsunflowerseeds0ilextraction.Theexperimentsresultsshowedthatwhenconcentrationofsolidsubstanceofthewaste aqueoussolutionwascondensatedto13%(WN)onvacuum,95%alcohol(1:1,V,V)wasadde dtothecondensatedsolutionto sedimentatepolysaccharose,sedimentationwascentfifugalized.repeatedabovetreatment. andfiltratewascollectedand condensatedonvacuum,thenchlorogenicacidcrystalof76%puritywasobtained. Keywords:sunflowerseeds;aqueoussolution;chlorogenicacid:polysaccharose 中图分类号:TS201I3文献标识码:A文章编号:1002.6630(2006)01.0159.03 绿原酸(chlorogenicacid)又名咖啡酸,是植物在有 氧呼吸过程中产生的一种物质,分子式CH-sO,,分子 量345.30.绿原酸主要存在于杜仲,金银花,葵花籽 中,是半水状化合物或微黄色针状晶体,25?时在水 中溶解度为4%,热水中溶解度更大,并且随温度降低 溶解度逐渐降低…1.绿原酸易溶于乙醇,丙酮,微溶 于乙酸乙酯,难溶于氯仿,乙醚等极性有机溶剂【2].毒 性很小,幼大鼠口服LDs0大于1g/G. 绿原酸具有广泛的生物活性,对急性咽喉炎症的化 脓,皮肤病有显着疗效,具有抗菌,抗病毒,止血, 增高白血球[3],缩短血凝和出血时间作用,还具有抗氧 化作用,消除体内自由基…,抑制突变和抗肿瘤作用 .绿原酸及其衍生物在抗HIV的研究中表现出一定的 抑制效果.对绿原酸生物活性的研究已经逐渐深入到食 品,保健品,医药和日用化工等多个领域.绿原酸 因此被称为植物黄金.现在的纯品绿原酸的市场价格为 每20mg为108.00元. 葵花籽含绿原酸1.O%,4.5%,平均为2.8%,从葵 花籽中提取绿原酸具有实用价值,同时还能避免由于绿 原酸的存在引起葵花分离蛋白变黑的现象….本文采用 的原料是水酶法葵花籽提油后离心分离出的水浸提液, 该液体中含有绿原酸,低聚糖,少量蛋白及果胶等, 收稿日期:2004.10.20 基金项目:齐齐哈尔市科学技术局2004年农业攻关项目;黑龙江省普通高等学校 骨干教师创新能力资助计划项目(1055G061) 作者简介:郑喜群(1963.),男,教授,博士生,主要从事农产品加工新技术,蛋白质分离 提纯方面的教学与科研工作 1602006,Vo1.27,No.01※工 采用水提醇沉方法提取绿原酸.目前国内以水酶法提取 葵花籽油脂后分离出的水浸提液为原料提取绿原酸的研 究还未见其它报道. 1材料与方法 I.I原料与试剂 葵花籽:市售: 浸提液:葵花籽水酶法提取油脂后的浸提液,呈 深绿色,固形物含量在5%,6%之间,略显浑浊过滤 后放置备用. 绿原酸 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 品:中国药品生物制品鉴定所产品. 1.2仪器 旋转蒸发器:上海亚荣生化仪器厂;离心机:北 京离心机厂. 1.3方法 1.3.1绿原酸含量的测定【】 采用紫外分光光度法.精确称取绿原酸标准品5.5mg, 置于5Oml容量瓶中,摇匀配制成绿原酸标准液,取 0,5,0.75,I.O0,I.25,2.O0,2.50m1分别置于10ml 比色管中,稀释至刻度用分光光度计在200~800nm 波长范围内进行扫描.找到最大吸收波长329nm.在 329nm处测吸光度OD,以绿原酸标品浓度为横坐标, 以OD为纵坐标绘图,以30%甲醇做参比,得到回归 方程:A=42.763C+0.0259,R=0.998,其中C代表浓度 ?,A代表吸光度.将经真空冷冻干燥得浸提样品200.0mg, 用30%的甲醇溶解至100ml,从中吸取1ml再定容到 100ml,取样在329nm下测吸光度值,代入回归方程计算 样品中绿原酸的含量. 例如:测得吸光度为0.652,计算可得C=0.0156g/L, 可计算出200.0mg粗品绿原酸中绿原酸的质量为156.0, 因此,绿原酸的纯度为:156.0/200.0×100%=78%. 1.3.2总糖的测量 采用葸酮比色法. 1.3-3绿原酸的提取工艺流程 水酶法提油后分离出的水浸提液一过滤一真空浓缩 到适合固形物浓度-.-an入95%的乙醇一抽滤一滤液收集 一 再次加入95%的乙醇一抽滤一收集滤液一合并两次滤 液一真空浓缩一冷却收集析出的晶体. 2结果与讨论 葵花籽中含绿原酸1.0%,1.5%,多糖12%左右. 水酶法提油后分离出的水浸提液中主要含有绿原酸,多 糖,少量蛋白,果胶等.提取绿原酸的最大障碍是多 糖.绿原酸和多糖都易溶解于水,但绿原酸还易溶于 乙醇,而多糖类物质难溶于乙醇,采用高浓度乙醇沉 淀多糖,过滤可将多糖从溶液中除去,可得到纯度较 高的绿原酸,同时也得到一定纯度的多糖.实验证明, 用95%的乙醇溶液多次沉淀多糖比一次沉淀效果好.由 于乙醇在加入浸泡液时被稀释,对多糖的沉淀不利,也 加大乙醇的用量,从经济和效率双方面考虑,在加入 乙醇之前先对浸泡液进行真空浓缩,提高溶液中固形物 含量.由于绿原酸有长时间受热容易分解的性质,浓 缩过程中要求真空度较高.在提取绿原酸的流程中影响 绿原酸提取率的主要因素是真空浓缩后溶液的浓度和每 次加入酒精的量. 2.1浸泡液真空浓缩终点浓度的确定 取浸泡液分装存烧杯中.真空浓缩到不同的终点浓 度,提取绿原酸,称量绿原酸的质量并计算其纯度. 实验结果如表1所示. 表1浸泡液真空浓缩终点浓度的确定 Table1Determinationoffinalconcentrationofscouringliquid aftervacuumcOncentratiOn 表1确定的四个浸泡液真空浓缩后浓度是根据多次 实验得出的.离心前,固形物含量在5%,6%之间, 澄清.当浸泡液真空浓缩到固形物含量8%左右时,浓 缩液变混浊,离心分离后证明混浊物为蛋白质;离心后 的清液继续浓缩,当固形物含量13%时,溶液再次变 混浊,离心后固体量非常少,测得此固体中含有绿原 酸,蛋白和大分子多糖;此时离心后继续浓缩,当固 形物含量21%左右时,液体明显变得粘稠,此时液体 中含有的多糖开始析出,当固形物含量31%以上时,液 体粘稠度很大,没有析出物.从纯度和绿原酸得率双 ' 面考虑,当真空浓缩到固形物含量为13%时加入乙醇 为适宜.固形物含量越低,乙醇加入量越大,后步浓 缩量也大,真空浓缩加热时间延长,会造成绿原酸的 损失.当固形物含量13%以上,随着多糖浓度的增加, ※工艺技术曩品斟学200&Vo1.27,No.01161 部分多糖会包裹绿原酸,在加入乙醇后,在多糖沉降 的同时包裹的绿原酸也随之沉降,造成绿原酸的损失. 此,选择浸泡液真空浓缩到固形物含量13%. 2.2乙醇用量的确定 取浸泡液分装在烧杯中,确定乙醇的加入量.表 2为实验结果. 表2沉淀多糖的乙醇用量确定 Table2Determinationofethanolamountusingfor sedimentatingpolyose 多糖在乙醇中溶解度较小,但随乙醇用量的增多, 仍会有少量多糖溶解,在后期的浓缩冷却中影响绿原酸 的析出,从而影响绿原酸的纯度.如果乙醇量少,少 量多糖会存留,也会影响绿原酸的纯度,又增大了后 期的浓缩量.从以实验结果看出,乙醇与浸泡液的 体积比为1:1较适宜. 3结论 水酶法提油后的浸泡液进行真空浓缩到固形物含量 13%时,加入此时溶液量1倍的95%乙醇两次,沉降 多糖,然后继续真浓缩,冷却可析出纯度为75.9%以 上的绿原酸. 参考文献: [1】陈少洲.葵粕中绿原酸的研究进展与应用前景【J】l食品与发酵工业, 20o2,(3):51-52. 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