[试题]金线莲种植方法

[试 题 快递公司问题件快递公司问题件货款处理关于圆的周长面积重点题型关于解方程组的题及答案关于南海问题 ]金线莲种植方法 1.1 材料 无菌繁殖体系的建立为浙江金线莲野生种源，其它实验为继代培养的不定芽及无根幼苗茎段。 1.2 无菌繁殖体系的建立 取生长健壮、无病虫害的植株，去叶后放入低浓度的洗衣粉水中漂洗3,5 min，然后用流水冲洗30 min。在超静工作台前，用75% 酒精湿润5,6 s，放入0.1%的HgCl溶液灭菌12,13 min，用无菌水冲洗5,6次。将消毒好的茎按上段(具茎尖)、中段和下段(匍匐茎段)切成长约1.5,2 cm，带有1,2个节间的小段，分别接种于MS+6,BA 4.0 mg/L +NAA 0.4 mg/L 培养基上，pH5.6，蔗糖2.5%，琼脂0.7%。培养条件为:温度(25?2)? ，光照时间12 h/d，光照强度1 500,2 000 lx。 不定芽诱导 1.3 1.3.1 基本培养基对不定芽诱导的影响 采用单因素实验，培养基选用MS(Murashige-Skoog),3,，1/2MS(大量元素减半，其他成分不变)，VW(Vacin & Went)，B5(Gamborg•Miller & Ojima)和KC(Knudson C)等5种，分别添加6,BA 4.0mg/L，NAA 1.0 mg/L。 1.3.2 激素对不定芽诱导的影响 以MS为基本培养基，添加不同种类及浓度的细胞分裂素和生长素。 上述实验选取无菌健壮植株，切取长约1,1.5 cm，带有一个节间的茎中段，每处理接10个茎节，重复3次。培养期间定时观察不定芽生长情况，培养60 d后统计不定芽数。其它条件同实验“1.2”项。 1.4 壮苗培养 1.4.1 激素对幼苗生长和发根的影响 以1/2MS为基本培养基，NAA设1,5 mg/L 5个处理，6,BA设0.5，1.0和1.5 mg/L 3个处理，共15个处理。 1.4.2 添加物对幼苗生长和发根的影响以1/2MS，NAA 2.0 mg/L，6,BA 0.5 mg/L为基本培养，考察马铃薯提取物、香蕉提取物、苹果提取物、椰子汁等4种天然有机物和活性炭对金线莲幼苗生长的影响。 cm，具3,4节间、有1,2片的无根幼苗，每处理接种接无 上述每种培养基均接入经增殖培养高约3 根幼苗10株，重复3次。培养后每隔15 d观察生长情况1次，至3个月考察每株净增加的叶片数、重量及发根数，并进行数理统计 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 。 1.5 移栽 选苗高约6,8 cm，茎基直径约2 mm，丛生根有2,3条的试管苗，炼苗4 d后，洗净附着在植株上的培养基，并晾干洗涤水后移人直径为15 cm，装有不同基质的土盆中，考察不同基质对金线莲试管苗成活率的影响。移栽前，实验基质均用45%多菌灵可湿性粉剂800倍溶液浇透消毒。实验条件为遮荫度80%的荫棚，保持空气相对湿度的80%,90%。如发现有病死植株，及时拔除。每处理5盆，每盆种5株，重复3次，移栽3个月后考察成活株数，并进行数理统计分析。 2 结果 2.1 无菌繁殖体系的建立 实验表明，外植体茎段的分化程度对诱导结果存在一定的影响。从表1可知，上、中段茎均能萌动生长。上段茎因有顶芽的存在，顶端优势表现较为强烈，因而以生长为主，不定芽发生较少，平均芽增殖数为0.6个;中段茎不定芽发生快、量大、长势好，平均芽增殖数为4.05个，并形成多枝丛生状。下段茎由于组织相对老化，虽有不定芽发生，但发生量与生长势均较弱。这和陈自力,4,报道的结果一致。 从实验中观察到，不定芽的产生以侧芽萌生为主。一般在培养15,20 d后，茎节上潜伏的叶腋芽萌动膨大，芽丛在节的四周萌出，起初为白色略带黄色，随着培养时间加长，芽不断伸展，逐渐转为黄绿色，形成主芽。叶腋芽是单生的，极个别节上能对生两个腋芽，未发现茎部或切口处长出不定芽。培养30 d左右，主芽基部的节再生侧芽(称一级侧芽)，45 d左右一级侧芽节上又可发生二级侧芽，随着芽的生长、出现叶片，节处毛并产生根，外被浓密的白色绒毛，从而形成完整小植株。培养3个月后每天观察，侧芽分生组织的增殖，一般只出现主芽和一二级侧芽或苗;培养5个月以上，主芽、侧芽较高，叶片较多、大，只有少数出现三级侧芽或苗。这种腋芽萌生的增殖形成了主轴分枝型的芽苗，随培养时间或继代繁殖代数的增加，或激素的作用，芽或苗因节间短，多数为形成似不定芽或丛生苗。培养过程中，未见愈伤组织，也没有发现有原球茎和类原球茎产生。 表1 金线莲茎段外植体不定芽诱导(略) 2.2 不定芽诱导 2.2.1 基本培养基对不定芽诱导的影响 以金线莲的茎节段作为外植体，腋芽能快速萌发出不定芽体。经60 d的培养，增殖倍数可达3.1,5.4倍。但基本培养基对不定芽的诱导具有明显的影响，MS，B5培养基不定芽增殖率分别为5.4倍与5.2倍，比其它培养基增加23.8%,74.2%。 表2 基本培养基对金线莲不定芽诱导的影响(略) 经LSR差异显著性测定，MS，B5培养基之间无明显差异，与1/2MS，KC和VW之间存在极显著差异，且MS，B5培养基上诱导产生的不定芽色绿、粗壮(见表2)，表明MS，B5培养基适合作为金线莲茎段不定芽诱导的基本培养基,5,。 2.2.2 激素对不定芽诱导的影响 激素种类、水平与配比对组织培养快速繁殖在效率存在明显的影响，6-BA、KT和NAA是3种常用生长调节剂，其添加量对金线莲不定芽增殖的影响很大。结果见表3。从表3可知，同为细胞分裂素的6-BA，KT在相同的添加量下对不定芽的增殖效果差异极显著，6-BA比KT的增殖率提高46.0%和55.0%，表明6-BA比KT更适合金线莲茎节不定芽的诱导。 6-BA的浓度也影响不定芽诱导效果。在添加量小于4.0 mg/L的情况下，随浓度的提高，不定芽增殖率明显上升，添加量为4.0 mg/L的不定芽增殖率比2.0，1.0 mg/L分别提高22.1%和47.6%。当6-BA添加量达到6.0 mg/L时，其增殖率还出现下降趋势，表明本实验条件下6-BA添加的适宜量为4.0 mg/L。 表3 激素对金线莲不定芽诱导的影响(略) 生长素NAA对金线莲不定芽的诱导与生长具有明显的促进作用。从表3可以看出，添加了NAA的培养基不定芽增殖量与生长明显较不添加的好，芽体粗壮、色浓绿，其中添加0.5 mg/L的表现最好，添加mg/L的其次，但二者间差异未达到显著水平;与其它不添加NAA的相比差异达极显著水平。表明在本1.0 试验条件下NAA适宜添加的量为0.5,1.0 mg/L。 2.3 壮苗培养 2.3.1 激素对幼苗生长的影响 在金线莲壮苗培养中，NAA较6-BA对促进幼苗生长的影响更为明显。结果见表4。NAA浓度低于3 mg/L时，对幼苗生长有促进作用，随浓度的增加，叶片净增量、发根数和鲜重净增量明显增加，当浓度达到4.0 mg/L时，叶片净增量、发根数和鲜重净增量增加不明显。6-BA在0.5 mg/L情况下，比不加的具有一定的促进作用，但未达显著水平;在浓度为1.0 mg/L，1.5 mg/L情况下，叶片净增量、发根数和鲜重净增量反而减少，但在幼苗基部观察到丛生状不定芽的产生，表明6-BA在浓度高于1.0 mg/L情况下，有利于金线莲不定芽的生成，对幼苗生长不利。 从表4也可以看出，处理9、10号在发根数、鲜生净增量方面较其它处理明显提高，达极显著差异;在叶片净增量方面，除与处理13、14号无明显差异外，与其它处理之间的差异达极显著水平，表明在金线莲壮苗培养中，NAA适宜添加的量为3.0,4.0 mg/L，6-BA 添加量为0.5 mg/L或不加。 表4 激素对金线莲幼苗生长的影响(略) 2.3.2 活性炭与有机添加物对幼苗生长的影响 结果见表5。从表5可知，不同的添加物对金线莲幼苗生长的影响表现不一，香蕉、椰子汁对促进幼苗生长最为有利，叶片净增量、发根数和鲜重净增量均高于其它处理，二者间无明显差异;马铃薯对幼苗生长不利，与其它处理相比均存在极显著差异水平。活性炭对金线莲幼苗生长具有一定的促进作用，在添加0.3%情况下，叶片净增量、发根数和鲜重净增量与对照相比均显著提高，差异达极显著水平;但与香蕉、椰子汁处理相比，其促进幼苗生长的作用不如前二者，除发根数无差异外，叶净增量与香蕉、椰子汁处理差异达显著水平，鲜重净增量差异达极显著水平。同时观察到活性炭、香蕉和椰子汁新发根洁白、粗壮。试验结果表明添加20%香蕉和椰子汁最适宜金线莲幼苗的生长。 表5 添加物对金线莲幼苗生长的影响(略) 2.4 移栽 金线莲试管苗移栽3个月后的植株成活情况见表6。从表6中可以看出，处理7和处理9保 持100%的成活率，处理3和处理8的植株成活率也在93%以上，处理1的成活率最低，仅为56%。经LSR差异显著性测定，处理3、7、8、9号之间无明显差异，与处理5、6号差异达显著水平、与处理1、2、4号差异达极显著水平。表明在菜园土中加入粗砂、木屑能明显提高金线莲试管苗移栽的成活率，适宜添加的比例为1份菜园土中加入粗砂2份、木屑1份或粗砂1份、木屑2份，要求充分混匀。 表6 种植基质对金线莲试管苗移栽成活率的影响(略) 3 小结 金线莲不同部位的茎间对不定芽的诱导结果存在明显的差异，以不含顶芽和长根的中间段茎节为好，不定芽增殖率达4倍以上。 采用金线莲中间茎节作外植体诱导不定芽萌发时，适宜的培养基为MS或B5，6-BA 4.0 mg/L，NAA 0.5 mg/L,1.0 mg/L，蔗糖浓度为2.5%。 适宜的壮苗培养基为1/2MS，NAA 3.0 mg/L，6-BA 0.5 mg/L，香蕉提取物20%(或椰子汁20%)，蔗糖浓度为3.0%。3.4 试管苗在充分混匀的1份菜园土，2份粗砂(2,3 mm)，1份木屑，或1份菜园土，粗砂1份，木屑2份的基质中生长良好，3个月后成活率达100%。 臺灣金線連(學名:Anoectochilus formosanus Hayata)是珍貴的蘭科草本植物，英文名稱為 Taiwan jewel orchid(臺灣寶石蘭);金線連曾廣泛分布在海拔五百到一千七百公尺的冷涼原始林蔭處;竹林下堆積深厚且排水良好的腐葉土層，也常見較大面積族群散生其間，其生育適溫約在攝氏 20 ~ 24 度，在北部的北插天山、宜蘭縣棲蘭山、南投縣水社大山、嘉義縣奮起湖及南部的南仁山等地，均見其蹤跡。 採自原始林區的新鮮全草在市場零售價格，每台斤高達七、八千元以上，因相傳效用廣泛能治療許多疾病，故有「藥王」、「藥虎」之稱。又因山林珍禽喜食，所以另稱「娃雞草」或「雉雞草」。養鴿人家常在參加比賽時，讓賽鴿食用大量金線連，據說有增強飛行耐力的效果，故祕稱其為「鳥參」或「鳥人蔘」。此外，民間也傳說只要有臺灣金線連生長的地方，就有兇猛的百步蛇守護左右，如用客觀角度分析，因為此種珍貴藥草生育環境分布在陰涼潮濕的林蔭下，蛇類常出沒其間也就不足為奇了。 世界上和金線連有親緣關係的植物種類可能超過 35 種，我國自產供保健藥用的有臺灣金線連和高雄金線連(學名:Anoectochilus Koshunensis Hayata，或稱恆春金線連)。上述二種植株外觀形態極為相似，一般以葉片紋路或莖節匍匐性強弱作為判斷依據;較明確的辨別方法是以花朵中間部位是否具梳子狀的構造加以區別，具有這種特性的是臺灣金線連，呈片狀的則是高雄金線連。 金線連一般在夏末秋初由植株頂端開始抽出花莖，野生植株開花數目約為 2 ~ 7 朵，但經人工溫室培育者則可達 22 ~ 24 朵。其葉片長約五公分，寬約三公分，呈圓卵形;葉面暗綠色有絨毛般的觸感，葉背則為淺紫紅色,葉片表面分布有耀眼且呈網狀相連的黃白色葉脈線條，故稱「金線連」，民間常有人寫成「金線蓮」，其實它與「蓮花」並沒有相近的親緣關係。值得一提的是，金線連在陽光反射下可見葉脈發出點點有如星鑽般燦爛的光芒，甚具觀賞價值，稱它為「超炫寶石蘭」一點也不為過。 近年來由於野外採擷臺灣金線連者眾，更因原始林地長久以來遭人為濫墾破壞、鳥獸尋覓取食，使野生族群逐年銳減。加以臺灣金線連經自然授粉成熟後的種子，須有適當溫度和濕度等環境條件下才能萌芽，一旦隨風散布在乾旱地區，大約僅有三天壽命而已;即使種子能順利萌發生長，仍須經歷自然天候與物競天擇等因素重重洗練，幸運存活者須達一年半到兩年株齡，才具開花繁衍子代的能力。因此，國人應該設法 善加保護及繁殖此一珍貴種原，俾能在減少對自然生態造成衝擊的前提下，達到資源永續利用的目標。 植物組織培養技術的利用 臺灣金線連無菌播種採用的果莢來源，應以冬春之際取自原生地者為佳，野生植株經自然授粉所得的成熟果莢，播種後種子萌芽率達 90,，但因搜尋不易且產量有限，因此，民間業者多以人工授粉者代替，只是其種子萌芽率約僅 50,。人工授粉種子萌芽率遠不及山採者，可能的因素是原生地盛開花朵接受蟲媒授粉次數較多之故。選擇適當的花期進行授粉，對種子萌芽率高低也有影響，試驗發現臺灣金線連不論是自花授粉或異株異花授粉，其最佳授粉期為花朵全開後二至四天，此時不僅有 85, 以上的結果率，且此種果莢的種子播種後也有較高的萌芽率。 至於果莢成熟度也是攸關種子萌芽相當重要的影響因子，研究顯示臺灣金線連授粉後，約在第 42 ~ 53 天之間的果莢最適合採收播種。假如採收的果莢數量眾多，無法在短時間內播種完畢，可將果莢以高濕度衛生紙包裹並裝在封口塑膠袋中，置於攝氏 5 度的冰箱中冷藏保存，不但可適度延長種子壽命及播種期限達兩個半月(仍具有 40, 萌芽率)，並可避免因乾燥環境使果莢開裂導致種子散出，造成無菌播種時消毒的困擾。 豆莢的消毒處理，是先將採收的果莢以 75, 酒精浸漬消毒 30 秒或用酒精棉擦拭清潔，再以約含 5, 次氯酸鈉有效成分的市售漂白水稀釋 10 倍，配製成僅含次氯酸鈉 0.5, 的水溶液浸漬消毒 10 分鐘。然後，放在附有高效率過濾網的無菌操作臺上，用高溫高壓殺菌釜滅菌過的純水清洗三次，用解剖刀切開並取出種子，平均播灑在固體培養基上。 培養基的調製，通常是在水溶液中分別添加不同比例配方的無機及有機鹽類，並加入 3, 蔗糖。調配完成並定量為體積一公升後，以一當量濃度(即一公升溶液中含某物質的克當量數)的氫氧化鈉或鹽酸溶液調整酸鹼值為 5.7，最後再添加 0.9, 洋菜粉。經微波爐融化洋菜粉後進行分裝，每支直徑 2.2 公分、長度 15 公分的試管中約分裝 10 毫升培養基。分裝完成後置於高溫高壓殺菌釜內，以溫度攝氏 121 度、壓力每平方公分 1.05 公斤滅菌 15 分鐘後，取出冷卻，即呈果凍狀的培養基。 臺灣金線連無菌播種後 30 天即可見乳白色膨大的種胚，大小約一至二公釐。播種後 120 天，則可見到幼小根莖基部的根毛與莖節頂端的幼葉長出，根莖長度約 1.5 ~ 2.5 公分，此時可進行第一次移植培養。將小苗移植於含穆拉許給?史酷格基本鹽類，並添加 8, 香蕉汁、0.2, 活性碳粉、3, 蔗糖、0.9, 洋菜粉、酸鹼值 5.7 的固體培養基上，經二到三個月培養後，苗株、根系長得更為健壯，此時苗株約達 4 ~ 5 公分，並有 2 ~ 3 片本葉。此種瓶苗經移置至溫度攝氏 24 度陰涼環境二星期後，即可取出種植於能保水、保肥並兼具適當孔隙度的栽培土中。穆拉許給?史酷格基本鹽類，是一種由某些無機與有機鹽類依一定比例配方配置而成的培養基，此一配方於一九六二年由穆拉許給(T. Murashige)與史酷格(F. Skoog)提出。 臺灣金線連種苗的大量繁殖，除上述無菌播種法外，也可將高度約 5 ~ 6 公分的瓶苗在無菌操作臺上先以鑷子取出，再用解剖刀切去頂芽及葉片，只留下莖節部分。這些莖節可以培養在不含洋菜粉的液體培養基中增殖培養，在培養三個月後每個節位平均可得 6.4 個新芽體;新生芽體再經二個月培養，待健壯根系長出後移植至栽培土。 由於臺灣金線連鮮草批發價格高，因此農民種植興趣濃厚，但臺灣金線連設施栽培發生病蟲害的比率頗高，其中又以鐮刀菌感染產生的莖腐病和由腐霉菌引起的基腐病二種最嚴重，罹病園圃往往損失慘重。 對於病害的防治，目前僅能以定時定量噴藥做局部控制，以減緩發病的速率及規模，但仍要擔負藥物殘留 及危害人體的風險，須審慎為之。建議栽培環境應保持清潔，改善通風並避免栽種於高溫、高濕的環境中。 就長遠眼光看來，積極選育優良抗病或耐病品系，才是減少用藥及控制病害的有效措施。