转基因食品课程论文

转基因食品课程论文 转基因食品课程论文 转基因食品PCR检测技术 王 琅 08010127 自动化学院 摘 要: 目前世界各国对转基因食品的检测主要从外源DNA和其经转录、翻译成的蛋白质入手，但是蛋白质在其加工过程中存在很多未知的干扰因素，这就是的这种检测方法难度加大。所以，目前采用最多的是用聚合酶链式反应和衍生出的以聚合酶链式反应为基础相关技术，本文介绍了几种PCR技术以及其在现实中的应用。 关键词: PCR;检测;发展前景;应用。 1. 前言 自上个世纪70 年代以来，食品资源改造技术这一领域热门的技术之一。 迅猛发展，进入 21世纪，以基因工程为特征的现2. PCR技术 代生物技术———转基因技术，在人们的食品中的 应用越来越常见。当前食品中应用转基因技术的类要了解以及运用PCR来检测转基因食品，首先 PCR检测技别大多数是转基因农作物。据国际 ISAAA———就要掌握PCR技术，因为PCR技术是即全球农业生物技术应用咨询署统计，2000 年全术的核心。 球已有近20 个国家，包括美国、日本、阿根廷、2.1 PCR技术原理 英国、加拿大等国家，种植了转基因农作物，种植PCR技术模拟DNA的天然复制过程,其特异性的种类包括大豆、油菜、玉米、马铃薯、棉花等，依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物,该原理转基因作物的种植总面积约4 500 万公顷，销售收主要包括3个基本反应过程:变性———退火——入约35 亿美元。这一数据到2003 年有新的突破，—延伸。基本反应步骤构成:?模板DNA的变性:转基因作物种植面积超过6 500 万公顷，销售收入模板DNA经加热至93?左右一定时间后，使模板超过50 亿美元，3 年的增长率保持在40%左右，DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，至2010 年左右，转基因作物种植面积和销售收入使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作的年增长率保持在10%左右。 准备;?模板DNA与引物的退火(复性):模板 转基因食品大多来自转基因农作物。由于转基DNA经加热变性成单链后，温度降至55?左右，因食品对于人体影响没有经过长期检验，对于生物引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;?引多样性的影响也没有确定的结果，因此转基因食品物的延伸:DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合在一些国家受到一定的质疑与抵制。2001年5月中酶的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，国《农业转基因生物安全条例》开始实施。2002年按碱基互补配对与半保留复制原理，合成一条新的3月20日，与该条例配套的《农业转基因生物表示与模板DNA链互补的半保留复制链。经重复循环管理办法》等3个法规正式施行，要求对大豆、玉变性———退火———延伸3个过程,就可获得更米、油菜类的转基因食品进行标识。为了能够对植多的“半保留复制链”,而且这种新链又可成为下次物性转基因食品做出综合评价，建立合适的转基因循环的模板。每完成一次循环需2,4 min, 2,3 h作物及食品检测方法非常重要。 就能将目的基因扩增、放大几百万倍,(如图1)。 对转基因食品的检测方法，主要有对外源DNA2.2 PCR的反应动力学 的检测和对外源蛋白质的检测两类，目前从DNAPCR的3个步骤循环进行,使DNA扩增量呈指即基因水平来检测食品被广泛应用。尤其是PCR扩数上升反应最终的DNA扩增量可用Y = (1 + X ) n 增技术，由于它的快速、灵敏、费用低，检测只需计算, Y代表DNA片段扩增后的拷贝数, X 表示平微量的DNA并且可以同时检测多个样品，正成为 均每次的扩增效率, n代表循环次数。平均扩增效率 转基因食品课程论文 的理论值为100% ,但在实际反应中平均效率达不原则:引物长度常以15,30 bp左右,引物扩增跨度到理论值。反应初期,靶序列DNA片段的增加呈指以200,500 bp为宜;引物中G +C含量以40%,数形式,随着PCR产物的逐渐积累,被扩增的DNA60%为宜, G +C太少扩增效果不佳, G + C过多易出片段不再呈指数增加,而进入线性增长期或静止期,现非特异条带,ATGC最好随机分布,避免5个以上即出现“停滞效应”,这种效应称为平台期，它与的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列,避免引物内部出PCR扩增效率、DNA聚合酶活性以及非特异性产现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3′端的物的产生等因素有关(如图2)。 互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条 带;引物中可以加上合适的酶切位点,以便于目的靶 序列的分子克隆;每条引物的浓度为0. 1,1 umol或 10,100 pmol,以最低引物量产生所需要的结果为 好,引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增,且可 增加引物之间形成二聚体的机会。 (3) dNTP。dNTP在温度较高时容易失活,因此 需要- 20 ?下冰冻保存,以保证dNTP的质量。在 PCR反应中, dNTP浓度应为50,200μmol/L,尤其 重要的是4种dNTP的体积浓度要相等,否则就会引 起错配。 (4) 酶及其浓度。催化一典型的PCR反应约需 Taq DNA聚合酶酶量为2. 5 U (总反应体系为100 uL)浓度过高可引起非特异性扩增,浓度过低则合成 产物量减少。 (5) Mg2 +浓度。在PCR反应中,各种dNTP浓 度为200μmol/L、Mg2 +浓度为1. 5,2. 0 mmol/L 时为宜。Mg2 +浓度过高,反应特异性降低,出现非特 异扩增;浓度过低会降低Taq DNA聚合酶的活性,使 反应产物减少。 3、PCR检测技术 3.1定性PCR检测技术 利用基因修饰和重组DNA 等生物技术使生物 体的遗传物质发生改变, 这种生物就称为基因修饰 有机体( Genet ically modif ied or ganisms, GMOs)农 产品和食品中GMOs 的定性检测一般包括筛选和 鉴定2 个不同的过程。筛选指初步确定某一食品或 农产品中是否含有GMOs; 鉴定则是指判断食品或 农产品中有几种GMOs 存在, 并确定其含量是否2.3 PCR扩增的反应要素 (1) 模板。模板即DNA片段,其量的多少及其在法律、法规的许可范围内。欲证明外源基因是否纯度的高低,是PCR成败与否的关键环节之一。 整合在染色体上, 可从蛋白质水平和核酸水平这2 (2) 引物。引物是PCR特异性反应的关键, PCR 个角度来考虑, 但目前大多使用后一种方法。PCR产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。定性检测GMOs最主要的就是靶序列的选择。 理论上只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按3.1.1筛选GMOs 时所用靶序列的选择 其 设计 领导形象设计圆作业设计ao工艺污水处理厂设计附属工程施工组织设计清扫机器人结构设计 互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将 由于筛选是初步确定某一食品或农产品中目的DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下是否含有GMOs, 因此在选择靶序列时首先应考虑 转基因食品课程论文 广泛存在于各种GMOs 中的遗传标记。由于调控技术就可以实现对遗传修饰的检测。为了开品种专序列—— 花椰菜花叶病毒( CaMV ) 35S 启动子( P 一性的GMOs 检测方法, Windel s 等提出了一种锚-35S )和土壤农杆菌nos 终止子( nos 3) 几乎存在定PCR 方法。该方法先用限制酶消化靶DNA , 然于所有的GMOs 中, 所以P-35S 和nos 3 就成为筛后将每个限制性酶切片断与接头寡核苷酸连接, 再选GMOs 时首选的靶序列。筛选时所选用的靶序用对接头序列专一的接头引物进行扩增。其中, 列大多为P -35S 和nos 3, 少数为标记基因np t?GMOs 的专一性锚定引物需要根据P-35S和nos3( 新霉素磷酸转移酶?基因) 和T -DNA( Ti 质粒等GMOs 标记来设计。同时使用这些引物就可能上可以进入植物细胞并整合到植物正常染色体上扩增出插入片断和植物基因组DNA 间的杂合区, 的那部分基因组) 。但从未来的发展看有以下2 个然后通过测序来确定转基因整合的品种专一性位问 题 快递公司问题件快递公司问题件货款处理关于圆的周长面积重点题型关于解方程组的题及答案关于南海问题 需要考虑。一是遗传调控成分日趋多样化和抗,从而设计出特异性引物以检测植物DNA 序列。点 生素抗性选择标记基因使用频率的降低。目前, 人有关AFLP 方法的研究非常多, 但程序复杂、花费们已开始使用更多组织特异、发育特异及非异源的高及费时等缺点在一定程度上限制了对其的应用。 遗传调控成分, 并且已有使用这些调控成分的需要强调的是, 从加工食品和某些农产品(如GMOs 获得批准。二是筛选时要确定适宜的引物以经过熟化处理的烟叶) 中分离的DNA 受破坏程度检测出尽可能多的某一靶序列的变异体。例如, 转较高,即提取的DNA 片断普遍较短, 故而质量较基因植物中所使用的P -35S 至少有8 种变异体。低。如果在扩增时选用较长的DNA 片段作为模板 这个问题对鉴定时引物的设计是同样重要的。总之, 那么在某些情况下产生的扩增产物可能很少甚至应明确GMOs 的筛选只能表明被 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 的样本中是没有扩增产物。因此, 为达到较高的检测限并提高否含有经过基因修饰的植物DNA, 却不能提供与检测的准确度, 所选用的靶序列不宜过长。 转入的外源基因和已产生的特有性状有关的遗传3.2定量PCR检测技术 信息。 随着转基因生物的商品化、贸易的国际化,越来 3.1.2 鉴定GMOs 时所用靶序列的选择 越需要发展能够对其进行精确定量的检测技术。在目前鉴定GMOs常用的靶序列有3 种: PCR反应后期,由于DNA 聚合酶活性减弱,引物与 靶序列的结合几率变小和合成 材料 关于××同志的政审材料调查表环保先进个人材料国家普通话测试材料农民专业合作社注销四查四问剖析材料 的减少等因素,( 1) 外源基因与遗传调控成分之间的杂合区 ， 使PCR产物的终止拷贝数与样品中的起始靶序列( 2) 整合位点与特定GMOs 的遗传转化成分之间 浓度之间不可能建立线性关系。近年来出现的定量的杂合区， PCR技术很好的解决了这些问题,目前在转基因食( 3) 转入基因的特异序列和标记基因np t?。 第1 种和第3 种靶序列是对外源序列专一性品检测中最常用的是: 竞争定量PCR和实时定量的检测, 可用于GMOs 与非GMOs 的辨别和具有PCR技术。 不同外源序列的GMOs 的辨别。第2 种靶序列以3.2.1竞争定量PCR 特异的基因转化为基础, 可以区分插入片断相同而竞争定量PCR采用构建的竞争DNA和样本插入位点不同的GMOs, 既可用于GMOs 品种专DNA竞争相同的底物和引物，并根据电泳结果做曲 线图，从而得到可靠地定量结果分析。竞争物的设一性的鉴定, 又可用于品种基因型的鉴定。将来 定是这一技术的关键，其要达到以下两条要求首先,GMOs 可能含有多种外源基因或遗传调控成分, 它能够与相同引物的靶序列共同扩增;其次,它应该因此以特异基因的转化为基础、以同时检测多个靶 具有特殊的性质以便于区分原有的靶序列。 序列为特点的品种或类型的专一性检测技术可能 对于竞争定量PCR 产物的检测,会越来越重要。 也多使用溴化 但是，与特异的基因转化事件相关的序列信息 乙锭/琼脂糖电泳。近年诱导荧光检测系统(L IF)结因专利问题而难以获得, 为此人们开始研究AFLP合毛细管凝胶电泳(CGE)的应用已经能够进行极其在检测遗传修饰方面的应用潜力。作为一种DNA 指微量的检测,而且增加了竞争定量PCR产物定量的纹方法, A FLP 已成功地用于辨别和鉴定植物品敏感性和准确性,是一个有前景的方法。另外,持续种。有研究表明，如果同时使用GMOs 的特异引变性毛细管电泳技术(CDCE)允许靶序列和竞争物物和周围基因组区域的特异引物, 那么应用AFLP 之间存在很小的尺寸差异。这些技术都有效的促进 转基因食品课程论文 了竞争定量PCR的发展。 增技术(Hyperbranched rolling cycle amp lifica2tion, 3.2.2 实时定量PCR HRCA ) 也被应用于转基因食品的检测。与MPCR ,多重HRCA只需要一对引物即可完成多个靶实时定量PCR是一种比较新的PCR技术，它比较 的原理是在PCR反应体系中加入非特异性的荧光序列的检测,有效地避免了MPCR 中多对引物之间染料或特异性的荧光探针，实时检测荧光的变化，的干扰问题,因此更方便、更高效。 以获得不同样本中目的基因拷贝数。 实时定量 PCR定量靶序列时使用的主要参数4、PCR检测技术的应用 是荧光信号本底和循环阈值(Ct) ,前者是可检出显 著信号的最小值,后者是荧光信号超过阈值时的循4.1植物性PCR 检测 环数。为了使结果具有良好的重现性,阈值应选择扩近几年来, 我国从加拿大、澳大利亚等国进口增的指数期。在理想条件下, Ct值与反应初始时靶几百万吨油菜籽, 因此对转基因油菜籽品种进行检序列的拷贝数成反比关系。这样就可以绘制出 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 测显得十分必要。据目前国内外已批准商品化生产曲线从而获得未知样品Ct值。 转基因作物所显示资料, 调控基因和筛选标记基因 实时定量PCR在一个离心管中同时完成了靶往往是不同转基因作物或同种作物不同转基因品序列扩增和产物检测过程,因此具有交叉污染风险系中共有的, 因此这些转基因成分也是我们日常检小,可靠性高和操作时间短等优点。这些优点促使实测中必须同时检测项目。本实验以转基因油菜籽为时定量PCR技术得到了广泛的应用。但该方法的高材料, 采用高效、简便PCR 技术对转基因作物中常成本问题一定程度制约了它的普及。近年有许多利用启动子、终止子、选择标记基因和目的基因等多用实时定量PCR 技术检测转基因作物的文献报道,个外源基因进行检测, 通过PCR 扩增体系优化, 如玉米、大豆和烟草等,并且该方法的检测底限大多建立转基因油菜籽检测体系, 并成功从两种转基因小于0. 01% ,鉴于国际上目前设定的转基因限量是油菜籽中检出FMV35S启动子NOS终止子PAT、该方法检测底限的100倍以上, 实时定量PCR 检BARSTAR、GOX、CP4 一EPSPS、改造CP4 一测技术的灵敏度已完全能够满足转基因产品检测EPS PS 等外源转基因成分。该种外源基因筛查方的需要。 法体系建立, 为有效进行农作物生物安全评价、保 3.2.3多重PCR技术 护消费者知情权提供一种快速、准确、简便方法。 多重PCR (MPCR ) , 又称复合PCR,它是在同所用材料为转基因油菜籽和非转基因油菜籽， 引物如下 一PCR反应体系里加上二对以上引物,同时扩增出 多个靶序列的PCR 反应,其反应原理,反应试剂和 操作过程与一般PCR相同。对于食品中转基因成分 的检测最大的挑战莫过于转基因生物数量的激增。 根据FDA公布的资料,仅美国目前经过批准投入商 业化生产的转基因作物品种已经达到53个,若加上 处于研究阶段的作物品种,其数量将大大增加。为了 解决这个问题,许多实验室都在研发能够同时检测 多个转基因产品的MPCR检测技术。虽然MPCR 原理简单,但要使多对引物同时满足合适的扩增条 件存在一定困难,所以寻找合适的扩增条件在 MPCR 技术中是至关重要的。 目前MPCR 技术已用于多种转基因作物的检 测,对于MPCR多实验室之间的重现性问题,现在也 得到了有效的解决。随着对定量检测的需求,MPCR 技术不但可以对多个靶序列进行定性检测,而且发 展了多重定量PCR技术。另外,近年超分支滚环扩4.1.1 油莱籽种子总D N A 提取 转基因食品课程论文 总DNA 制备采用CTAB 法DNA 溶液于核酸口食品和饲料中的动物源性成分进行检验检疫。目蛋白定量仪(Pharm aeia ,GeneQuant 11 型号) 上测前国内专家学者对于在食品中牛羊源成分检测技定其含量和纯度; 同时取5 ulDNA 溶液, 在0.8% 术的研究报道相对较多，而对食品和饲料中的猪源琼脂糖凝胶上电泳检测D N A 提取质量. 成分检测技术的研究报道较少。为了避免猪饲喂同 4.1.2 PCR 检测体系优化 源性动物饲料引起疫病通过食物链传播，有必要对 分别对MgCl2 和引物浓度等影响PCR扩增体猪用饲料进行猪源性成分检测。同时由于宗教信仰系主要因素进行优化, 引物终浓度设置0.2 umol 的问题，不同信仰的人对食品中动物源成分禁忌不、0 .4 umol、0.6 umol 和0.8 umol; Mg2+ 浓度设置同(如伊斯兰教禁食猪肉)，所以也有必要对食品1.0 mM、1.5 mM、2.0 mM、2.5 mM、3.0 mM, 确中的猪源成分进行检测，以避免因某些宗教食品中定MgCl2和引物最适添加量。然后在其它条件不变含有禁食的猪源性成分，引起不必要的民族矛盾或反应体系内, 对影响PCR反应条件退火温度进行优宗教纠纷。 化, 应用梯度PC R 仪, 设置从52 ? 到63 ? 12 下面给出一个关于猪源成分检测应用的例子，个梯度退火温度, 分别检测FMV 3 5 S 启动子、N 用PCR 检测技术检测食品和饲料中的猪源性成OS 终止子、PA T、BARSTAR、GOX、CP4 一E ，得到的扩增分，用PCR仪对猪源性成分进行扩增PSPS、改造CP4 一EPSPS、NAPIN 等基因扩增效产物进行凝胶电泳，染色，再用凝胶成像系统进行果, 找出最佳退火温度。PCR 产物用2.0 % 琼脂糖拍照。可是有许多因素(如温度、缓冲液等)影响凝胶电泳检测, 用GelDoc 凝胶成像系统进行结果PCR反应的结果，从而影响PCR检测的准确性。因分析。 此有必要对影响PCR 检测技术的条件进行优化， 4.1.3 转基因抗草甘麟油莱籽PC R 检测结果 从而得到最适合的PCR反应体系。同时，还研究了 由于目前商品化生产转基因抗草甘麟油菜籽真核生物所共有的18S核糖体DNA(18S rDNA)与 中含有玄参花叶病毒FMV35S 启动子、草甘麟氧猪的特异性基因片段之间进行二重PCR检测，以提化还原酶GOX、5 一烯醇丙酮酞莽草酸一3 一磷高检测效率和准确性，节约成本。 所用材料为猪肉，鱼粉，大豆 酸合成酶CP4 -EPSPS 和改造CP4 一EPSPS 基因, 所用引物 及油菜籽内标准基因N 妙砰吕, , 以设计特异性引 物和得到优化体系进行PC R 检测。 图2 显示FMV35S、GOX、CP4 一EPSPS 和 4.2.1 DNA 的提取 改造CP4 一EPSPS 基因, 及油菜籽内标准基因 DNA 的提取猪肉DNA 和鱼粉DNA 的提取NAPI N 基因均得到有效扩增, 空白对照均无任何 条带产生, 表明优化PCR体系可应用于转基因抗草采用动物DNA 的异硫氰酸胍提取法，大豆DNA甘麟油菜籽检测。 的提取采用植物DNA的CTAB提取法。 4.2.2 PCR反应体系及条件 4.2动物性PCR检测 肉源性动物疾病，如疯牛病，禽流感，羊痒病 (1) PCR 反应体系(20 μl):PCR 扩增一个模等有可能通过食物链进入人体，传染给动物和人板要求一对寡核酸的引物，4种脱氧核苷酸类，引起食品安全与人类的健康问题，这些问题已(dNTP)，镁离子和进行DNA合成的热稳定DNA引起人们越来越多的关注。因此，中国已要求对进聚合酶。20 μl 的反应体系10 ×PCR 缓冲液用量为 转基因食品课程论文 2.0 μl、引物ZHU-1、ZHU-2 的浓度为10 μmol/L 用量为0.4 μl、而25 mmol/L MgCl2溶液的最大限 dNTP的最大限度范围为0.6 μl、度范围为6.0 μl、 Taq 酶的最大限度范围为0.4 μ l、DNA 摸板2.0 μ l(200 μg/μl)、用无菌水将反应总体积调节为20 μl。 (2) PCR反应条件:猪源性成分、18S rDNA(真 核生物共有的18S核糖体DNA)PCR反应温度循 环条件相同，均为94 ?预变性5 min，94 ?变性 30 s，54 ?退火40 s，72 ?延伸60 s，40个循环， 72 ?延伸7 min 。 结果表明，PCR 反应体系并不是所有高浓度、 (3) PCR 产物电泳:各取10 μl 的PCR 扩增产高含量的梯度都是最好的，所以需要对反应条件进物，加入1 μl 的溴酚蓝，混均，利用琼脂糖凝胶(20 行优化，才能得出最适合的PCR反应体系。此实验g/L)以98 V 电泳55 min 进行电泳检测，溴化乙在对PCR反应体系进行优化的过程中，首先分析了锭染色10~20 min，于凝胶成像仪上观察并拍照记几个对PCR反应体系有影响的因素，并在控制相对录留档。 恒定的条件下，对单个因素进行浓度梯度设定，从 4.2.3 PCR反应体系(20 μl)优化试验设计 中选择出PCR 扩增效最优的反应浓度。虽然此实 通常各种影响PCR反应体系的因素的量越多，验中二重PCR的灵敏度比单PCR的灵敏度低10 PCR的效果也就越好，但作为用于食品和饲料中的倍，但猪源性的分成的最低检测仍低于0.04 ng/μl ，猪源性成分PCR检测反应体系是否也如此，未见报说明采用PCR 技术和二重PCR 技术在灵敏度上道。因此，此试验在PCR反应总体积为20 μl 的情完全能满足实践中对猪源性成分的检测要求。 况下，设计Taq DNA聚合酶用量梯度为0 U、1 U、5，PCR检测技术的发展前景 2 U、3 U;25m mol/L 的MgCl2用量梯度为0 μl、 0μl、0.1 μl、0.2 2 μl、4 μl、6 μl;dNTP用量梯度为结合对以上PCR技术的了解，PCR技术可以 加快实现它的工程化，效益化，如:应用在现代环μl、0.4 μl;猪肉DNA浓度梯度为400 ng/μl、40 ng/μl、 境工程污水处理工程的微生物载体研究上，PCR技4 ng/μl、0.4 ng/μl、0.04 ng/μ(l 每个反应用量为2 术暂时只是致力于理论方面和研究方面，它并没有μl)，以筛选出最佳的TaqDNA 聚合酶用量、25 mmol/L 的MgCl2用量和dNTP用量和DNA浓度，像其他微生物技术那样给人类社会带来大规模的达到优化猪源性成分PCR检测反应体系的目的，并经济效益，假如可以实现这一设想，那么不但PCR将所得的PCR 反应优化体系用猪肉DNA 和18S 技术本身可以得到更加快速的发展，而且我们还可rDNA 的二重PCR加以验证。 以促进经济的发展。 4.2.4 PCR检测结果与分析 比如说:在传统的生物发酵技术上可以结合 PCR技术，利用DNA在体外的复制和杂交，并实 现表达，可以实现基因工程的超远缘杂交的物种突 破难进行的问题;再比如:可以通过PCR技术实现 核酸杂交技术，核酸杂交法比抗原捕获特异、敏感， 但半衰期短，放射性污染不易处理，显影时间长等 缺点，目前国内外常用的生物素检测标本中致癌物 质等等。关键是怎样扩大在工程上的应用，以扩大 经济效益。这是PCR技术的关键。 PCR技术运用 传统生物技术结合近代基因工程原理，包含反转录 PCR技术、定量PCR技术、实时荧光定量PCR技 术、重组PCR技术、反向PCR技术、多重PCR技 术、不对称PCR技术等多种传统PCR技术和原位 转基因食品课程论文 PCR技术、巢式PCR技术等一系列新兴PCR技术。 最新的进展如:结核杆菌诊断PCR;病毒学PCR 技术;HIV感染PCR;检测人COX病;DMS/BMD 基因;地中海贫血PCR;血友病A基因等。 另外，其在分子生物学、临床医学、考古学等 众多领域取得了巨大成就，不但只是局限于研究领 域，而且还从实用角度证明了PCR技术是一项令人 类值得自傲的技术。自从1985年由Millus创立之 后，又得到了近二十年的发展，所以PCR技术的发 展前景是不可估量的。它绝对是现代生物学技术中 项值得发展的技术，在当今社会乃至未来社会都一 会有它的立足之地，充分运用它，人类会在文明发 展的进程中，发出更耀眼的光芒。 参考文献: [1] 邓小红,任海芳. 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