基于电化学交流阻抗技术构建DNA生物传感器的研究道

基于电化学交流阻抗技术构建DNA生物传感器的研究道 论文摘要 随着对基因结构与功能研究的不断深入，人类进入基因诊断阶段。因此，对人体、病毒和细菌中特定核酸序列的检测具有重大意义和实用价值，迫切需要一种简便快速、经济实用的微型化基因分析装置。在多种发展中的基因检测分析技术中，基于特异性碱基互补原理构建的,,,生物传感技术，『,为许多研究者重视。其中电化学,,,生物传感器技术涉及生物化学、医学、电化学及电子学等学科领域，以,,,杂交反应引起的电化学信号分析特定,,,序列，具有灵敏度高、快速经济的特点;检测装黄简单轻巧，易于实现微型化;并且检测过程中不受样品混浊度限制，受到国内外许多学者的重视。 电化学交流阻抗技术是一种对电极界面性质变化十分敏感而便捷的检测技术，能够提供有关电极界面电子传递电阻，双电层电容等多种界面参数的大量信息。因此电化学交流阻抗技术已被广泛应用于研究电化学反应过程及电极界面性质变化。用这一技术构建的,,,生物传感器，可检测杂交前后电极界面多种参数的变化值为杂交信号，具有快速灵敏、无需标记等优点，有科学家提出它适合于研究碱基错配对,,,电子传递性质的影响。 本篇论文将电化学交流阻抗技术应用于,,,杂交反应检测，构建起简便快速、准确灵敏的电化学,,,杂交传感器，介绍了应用交流阻抗技术直接监测,,,杂交反应的原理和方法，几种杂交信号扩增方法，另外还介绍了碳纳米管修饰电极的几种构建方法在电化学交流阻抗,,,生物传感器中的应用，为电化学,,,杂交传感技术中阻抗检测法提供一些基础性研究工作。此外，我们还研究了基于监测电极自身氧化还原信号的非标记型,,,杂交传感器和一种有效改善碳纳米管性能的修饰方法以及由此构建的基于杂交嵌入剂的电化学,,,杂交传感器。第一章:绪论 首先系统介绍了电化学,,,生物传感器技术，包括构建目的，构建原理，构建方法，纳米新材料的使用。接着介绍了,,,生物传感技术中的电化学交流阻抗技术，包括阻抗技术的基本原理，到目前为止阻抗,,,生物传感技术的应用和研究进展。最后简要阐述了本论文的研究目的和意义。第二章运用电化学交流阻抗技术直接监测,,,杂交反应 构建起基于电化学交流阻抗技术直接监测,,,杂交的方法，对多种实验条件进行了优化。将,’端巯基修饰的,,个碱基长度的寡聚核苷酸探针和巯基乙酸同时自组装到金电极 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 面，形成杂交识别层。用法拉第交流阻抗技术进行监测，取杂交前后电极表面电子传递电阻的改变值作为杂交信号。实验中优化了杂交识别层的固定时间、杂交识别层中寡聚核苷酸探针和巯基乙酸的比例、杂交温度和时间，以及阻抗值测量液的离子强度。在各优化的条件下，此,,,杂交传感器的检测下限为,(,×,,。,,,,,,;相对于完全互补序列的杂交信号，单碱基错配和三碱基错配的序列分别产生,,(,,和,(,,的杂交信号。第三章基于,,,量子点标记的电化学交流阻抗,,,杂交传感器 利用,,,量子点对目标,,,进行标记，构建起有较高灵敏度和选择性的电化学交流阻抗,,,杂交传感器。实验中合成水溶性羧基化的,,,量子点颗粒，共价结合氨基化目标,,,:氨基化探针,,,通过酰胺反应共价键和到巯基乙酸修饰的金电极表面。通过电化学交流阻抗技术观察电极表面电子传递电阻的变化作为杂交信号。由于,,,量子点表面的负电性，空闻位阻，半导体性质，杂交后在金电极表面能有效阻挡电极表面电子传递过程，增加电极表面电子传递电阻。基于,,,标记的阻抗,,,杂交传感器对互补链的检测下限为,(,×,,‘,, ,,,,‘。，为标记前降低了两个数量级;并且能很好的区分互补序列，三碱基错配序列和非互补序列。这是首次尝试 将纳米量子点材料应用到电化学交流阻抗,,,杂交传感器中，得到了良好的信号扩增效果。第四章基于硫堇电荷中和作用的电化学交流阻抗,,,杂交传感器 介绍了一种运用硫堇电荷中和作用构建的交流阻抗,,,杂交传感器。将,’端修饰有巯基的单链发卡,,,探针与巯基乙酸通过,,—,键同时自组装到金电极表面，形成,,,分子识别层。杂交反应后，硫堇分子嵌入到双链,,,分子中，利用硫堇对双链,,,的电荷中和作用使修饰电极的表面电予传递电阻(心,)减小。实验中选择发卡,,,探针修饰电极和硫堇嵌入后的双链,,,修饰电极的,。差值作为杂交信号。基于发卡,,,探针的特殊结构和硫堇的嵌入扩增杂交信号，此,,,杂交传感器具有较好的检测灵敏度和选择性。在杂交温度优化条件下，此,,,传感器的对完全互补链的检测下限为,(,, ,,。, ,,,,,，一个碱基错配序列的杂交信号是完全互补序列信号的,,(,,。这是首次尝试将杂交嵌入剂应用到电化学交流阻抗,,,杂交传感器中，通过减小电 稀,姆绞浇 性咏恍藕爬?觥,谖逭禄 冢停 模危凉菇ǖ牡缁 Ы涣髯杩梗模危猎咏淮 衅?构建了一种基于,—,,,(金属化双链,,,)的电化学交流阻抗技术监测,,,杂交的生物传感。在羧基化多壁碳纳米管修饰玻碳电极上电化学聚合聚吡咯(,,,)膜时，单链,,,探针作为对阴离子掺杂到聚合物膜中。随后将杂交后的双链,,,修饰玻碳电极进行金属化，显著降低了电极的电子传递阻力，电化学交流阻抗值特别是其实部(,。)明显降低。实验中选择在,,,, ,,处,。的减小值作为杂交信号。由于,—,,,有效降低,,,电子传递阻力，提高了传感器的灵敏度，对完全互补,,,的最低检测下限为担 啊粒保啊,保保恚铮欤 獭:屯耆 ゲ梗模危帘冉希 桓黾罨 砼浜腿 黾罨 砼湫蛄幸 鸬脑咏恍藕欧直鹞 常担 罚ズ鸵唬担 福ァ,送猓 笛榻峁 砻鳎 汀 模危林校 睢币唬模危恋牡缱哟 菽芰Ω哂冢茫铩保 模危梁停危椋冢 模危痢,馐鞘状纬?栽诘缁 Ы涣髯杩梗模危猎咏淮 衅髦薪 兴 矗模危磷陨砉剐捅浠坏姆椒ń 行藕爬?觥,诹 禄 诘缁 Ь酆暇圻量 寄擅坠苄奘蔚缂 菇ǖ牡缁 Ы涣髯杩梗模危猎咏淮 衅?以电化学聚合方法构建聚吡略,碳纳米管复合物修饰玻碳电极，即吡咯单体中加入羧基化多壁碳纳米管，吡咯电化学聚合过程中，碳纳米管被修饰到电极表面。氨基化探针,,,在,,,,条件下共价结合到聚吡咯,碳纳米管修饰电极表面。杂交反应引起电极表面修饰层电子传递阻力减小，降低了电化学体系的阻抗值，以阻抗减小值作为杂交信号。由于聚毗咯,碳纳米管的有效修饰，电极性能得到提高，具有良好的电子传递能力和大的比表面积:杂交传感器具有较好的灵敏度和选择性，对互补链的检测限为,(,×,,。,,,,,,。本实验介绍的聚吡咯，碳纳米管修饰电极的方法在电化学,,,生物传感器中是被首次应用。第七章基于聚硫堇修饰电极构建的非标记型,,,杂交传感器 介绍了一种基于导电聚合物膜修饰电极构建的电化学,,,杂交传感器，在温和的检测条件下实现对,,,杂交的非标记型检测。用电化学聚合方法构建的聚硫堇修饰电极在中性缓冲溶液中显示良好的氧化还原活性和导电性。通过聚硫堇膜上的氨基共价固定磷酸基修饰的,,,探针，构成,,,分子识别层。当聚硫堇膜上的探针,,,与互补序列杂交后形成双螺旋结构，增强了聚合物骨架的刚性，这种结构变化减弱了聚硫堇的电化学活性，降低聚硫堇的氧化还原峰电流。使用差分脉冲伏安法检测,,,,聚硫堇修饰电极在杂交前后的电化学响应变化值作为杂交信号。在实验优化条件下，对互补,,,的检测限为, ,×,,‘,,,,,,。一个和三个碱基错配序列的杂交信号分别是完全互补序列的,,(,,和,(,,。第八章基于硫堇一碳纳米管修饰电极构建的电化学,,,杂交传感器 介绍了一种基于硫堇一碳纳米管修饰电极构建的,,,杂交传感器。硫堇分子在碳纳米管上进行兀一兀键堆积，显著提高了碳纳米管的水溶性，同时在碳管表面修饰上大量氨基，用于共价固定磷酸化,,,探针，形成,,,分子识别层。实验中选用道诺霉素为杂交指示剂，差分脉冲伏安法检测杂交信号。由于硫堇一碳纳米管的有效修饰，显著增加了电极表面,,,的固定量，增强了电极电子传递能力，使传感器的灵敏度提高，对互补,,,的检测限为,，,×,,,, ,,,,,。关键词:电化学,,,杂交传感器，交流阻抗技术，非标记型杂交检测，电化学聚合，碳纳米管 ,,,,,,,, ,,,, ,,,,,, ,,,,,,,,,,,,, ,,, ,,,,;,,,, ,,, ,,,;,,,, ,, ,,,,, ,,,,，,,,,,,,,,,,,,;, ,,, ,,, ,,,,,, ,,, ,,,,,,,,, ,,,, ,,, ,,,,, ,,,,,,, ;,,,(,, , ,,,,,,， ,,,, ,,;,,,,,, ,,;,,,; ,;,,, ,,,,,,;,,,, ,,,;,,,; ,,, ,,？,,,;,, ,, ,,,,,，,,,,,，,, ,,,, ,,,,, ,,,,,,,;,,;,，,,, ;,,,, ,,, ,,, ,,,,?,,?,,,，,,,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,;, ,,, , ,,,;,,;,,,,,,,,, ,,,, ,,,,,,,, ,,,, ,(,,,,, ,,, ,,,,,,,,,, ,,,, ,,,,,,,,,,;,,,,,,,,,，,,, ,,,,,,,,,，,,,;, ,, ,,,,, ,, ,,,,,,,,, ,,,,，,, ,,,,,,, ,,,,,, ,,,,,,,,,,，,,;,,,,,, ,,, ,,,;,,,;,,,,;,, ,,,(,,, ,,,;,,,;,,,,;,, ,,, ,,,,,,,,, ,,,,,,,,,, ,, ,,,;,,,,,,,,，,,,;,,,;,,,,,,,,，,,,,;,,, ,,, ,,,;,,,,,;,，,,;(，,,,,,,,;,,,,,, ,,,,,,,,,,,,, ,,,;,,,, ,,,, , ,,,,,,,, ,,,;,,,;,,,,;,, ,,,,,,(,,, ,,, ,,,,,,,,,,,，,,,,,,,,,, ,, ,,,,;,,,,，,,, ;,,,，,,,,,, ,,,,, ,,,,,,,,,,,,，,, ,,,, ,, 椋睿洌澹穑澹睿洌澹睿悖澹铮?,,, ,,,,,, ,,,,,,,,,，,,,;,,,;,,,,;,, ,,, ,,,,,,,,,, ,, ,,,,,,,, ,,,,,,,,,, ,,,,,, ,,？,,,;, ,,,,,,,,( ,,,;,,,;,,,,;,, ，,,,,,,;, ,,,;,,,,;,,, ,, ,，, ,, , ,,,,,,,, ,,;,,,？,, ,,, ,,,;,,,,;,,,,,,,,,, ,, ,,,;,,,;,,,,;,, ,,,,,,,(,,, ,,,,,,, ,, ,，, ,, ,,,,，,,,, , ,,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,;,,,,, ,,;,,,,,,,,, , ,,,,,;,,,,,, ,,,,, ,,,,, ,, ,,,？,,,;,,,，,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,;,，,,,,,, ,,,,, ;,,,;,,,,，,,,; ,,,,,; ,,,,,,,, ,,,,,,,,;, ,,, ,,,,,,,,;,,,,,—,,,,,,,, ,,,,,,,;,,, ,,,;,,,;,,,,;,, ;,,,,;,,,,,,,;, ,,, ,,, ,, ,,,,,,,,,,,,,(,,,,,,,,,，,, ,, ,,,,,, ,,,, ,, ,,,,,,,, ,,,;,,,;,,,,;,, ,,,;,,,,,(，, ,,, ,,, ,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,，,,,,,—,,,,，,,,,,,,,,,, ,,,, ,,,,, ,,,,,,,;, ,,, ,,,,,,,,, ,,,;, ,,,,,,;,,,, ,,, ;,,,,,, ,, ,,, ,,,,,,,, ,,,;,,,,,’, ,,,,,,,;,,, ,,,;,,,;,,,,;,,;,,,,;,,,,,,,;, ,, ,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,(,,,,,,,,，,, ,,, ,,,, ,,,,,,,,, ,,,, ,，, ,,,,,, ,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,, ,,, ,,,;,,,,,; ,,,,, ,,, ,,,,, ,,,,,,,,,,;,,,, ,,,,,,, ,,, ,, ,,,, ,,,,,( ,,, ,,,,,,,,,,,, ,,, ,,;,,,, ,, ,,,,,;,,,,, ,,,,,,,;, ,,,;,,,,;,,,—,,,,,,,,;,,,;,,,,;,, ,,, ,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,，,,？,,,;,—,,,;,,,; ,,,,,,,,;,,,,(，, ,,;,,,,, ;,,,,;,,,,,,,, ,,, ,,,,;, ,,, ,,,,,,,,,,,,, ,,,,;,,,, ,,,,,,,,,,,,;, ,,;,,,？,,，,,,,,,,;,,, ,,,,,,, ,,,,;,,,, ,,,,,,, ,, ,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,,,，,, ,,,, ,, ,,,,,,,,,, ,,,,,,, ,,,,,,, ,, ,,,,,, ;,,,,, ,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,;,,,,,, ,,, ,,, ,,,,,;,,,,,, ,, ,,, ,,,,,,,;, ,,,;,,,,;,,,?,,,,, ,,,;,,,;,,,,;,,,,, ,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,(,, ,,,,;,,, ,,,, ,, ,,,,, ,, , ,,,,; ,,,,, ,, ,,,,,,,;,,,,,;,,,, ,,,,,, ,,, ,,, ,,,,,,,,,, ,,,,,;,,,,,，,,,,,,,,,,,,，,, ,,,, ,,,,,, ,,,,,,,,—,,,, ,,, ,,,;，,,,,,,,,,, ,,,,,, ,,,,, ,, ,,,,,,,,,,,,, ,,, ,,,;,,,,,’, ,,,,,;,,,,,, ;,,,,, ,, ,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,，,,, ,, ,,,,;,,,, ,,,,,, ,, ,,,,,,, ,,, ;,,,,,,,,,,,,,’, ,,,,,,,,,;, ,, ,,,;,,,;,,,,;,, ,,, ,,,,,,,,,，,,,;, ,,,, ,,,,,;,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,, ,,,,;,,,,(,,,,,,, ， ,,, ,,,,,,,;,,,, ,, ,,, ,,,,,,,,,,,, ,,, ,,,;,,,;,,,,;,, ,,, ,,,,,,,,,, ,,;,,,,,,, ,,, ,,,,,,,;,, ,, ,,, ,,,,, ,,,,，,,;,,,,,, ,,, ,,,,, ,,,;,,,;,,,,;,, ,,, ,,,,,,,,,,，,,, ,,,,;,,,, ,,, ,,, ,,,,,;,,,,,，,,, ,,,,,;,,,,, ,,, ,,,,,;,,，,, ,,,, ,, ,,, ,,,,, ,,,,,,,,,,,,, ,,,, ,,, ,,,,,,,,,, ,,(,,,,, ,,,,，,,, ,,,,,,,;,—,,,,, ,,,;,,,;,,,,;,, ,,, ,,,,,,,,,, ,,;,,,,,,, ,,,,,,,,,,;,, ,,,,,,,，,,;,,,,,, ,,, ,,,,; ,,,,,,,,, ,, ,,, ,,,,,,,;,，(,,,,,,,,,,,,,,,,,,, ,, ,,, ,,,,,,,;, ,,, ,,,,,,,,,,(,,, ,,,, ,,,, ,,,,,, ,,, ,,,,,,;,,,,,,,,,,,，,,,,;,,,,,，,,,,,,, ,,, ,,,,,,,, ,, ,,, ,,,,,,,,,,,,，,,,,,,, , ,,,,;, ,,,, ,,,,,,,,,,,,, ,, ,,,,,,,;;,,,, ,, ,,, , ,,;,,,？,, , ,,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,, ,,,,, ,, ,,,,,,,;, ,,;,,,？,, ,,,,,,,,,,;,,(, ,,一,,, ,’,,,,;,,,,—,,,,, ,,,,, ,,,,,,—,,,,,,,, ,,, ,,, ,, ,,(,,—,,,,,),,, ,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,;,,,,, ,,,,,;, ,,,, ,,,;,,,,,;,,,; ,;,,(,,,),, ,,,, , ,,,,,, ,,, ,,;,,,,,,,, ,,,, ,(,, ,,,,, ,,,,,,; ,,,,,,,;, ,,;,,,？,,,, ,,,,,,,,,,, ,,, ,,—,,,,,,,, ,,,;,,,,,，, ,,,,,,,;,,, ,,;,,,,, ,, ,,, ,,,;,,,,,,,,,,,,;,,, ,,,;,,,,,; ,,,,,,,, ,,,,,,,,;,(,;,),,, ,,,,,,,, ,,,,, ,,, ,,—,,,,,,,,,,,,, ,,,;,,,,, ,,,,,,,,,, ,,,, ,,, ;,,,,,,,,,,,, ,,？,,,;,(，, ,,,, ,,,,,，,,,,,,,,,,,,,,,,,,, ;,,,,,,,,,，,,;,,,,,, ,,, ,,—,,,,, ,,,,, ,,,,,,,,,,,,,, ,,,,，,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,, ,,, ,,,,，,,;(,,,, ,,,, ,,,,,,,,,(,,,,,,,,’,,,,,,,,,,,,, ,, ,,—,,,,, ,,, ,,, ,, ,,, ,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,, ,,,,,,,,;,,,,, , ,,,,,,,, ,,,,,,, ,, ,,,,, ,,,,, ,, ,,,;,,,,, ,,,,,;, ,, ,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,;,,,;,(,,, ,,,;,,,,,,, ,,, ,,,,,,,;, ,,,,;,,,, ,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,(,,,,, ,, ,,,,, ,,,,,,,,, ;,,,,,,,,,，,,,, ,,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,, , ,,,,;,,,, ,,,,, ,, ,(,,(,,—,,,,,,, ,, ;,,,,,,,,,,,, ,,？,,,;,(,,,,;,,,,,,, ,,,, ,,, ;,,,,,,,,,,,, ,,？,,,;,，,,, ,,,,,,,,,,,,, ,,,,,, ,, ,,,—,,,,,,,,,,;,,, ,,？,,,;,，,,,,,—,,,, ,,,,,,;,,, ,,？,,,;, ,,, ,,(,,,,, ,(,,，,,,,,;,,,,,,(,,,,,,, , ,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,,,,, ,, ,,,,,,,;, ,,,,,,,,,,, ,,,,, ,,,,, ？,,,,,, ,,,, ,,,,,,,, ,,, ,,,,, ,,,,, ,,,,, ,,,,,, ,,,,,,,,(,,,,,),,,,, ,,, ;,,,,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,, , ,,,,,,,,,,,,,, ,,,;,,,,,;,,,; ,;,, ,,,,,,,,, ,,,,,,,, ,,,,,;,,,,, ,, ,,, ,,,,,,;, ,, ,,,,，, , ,,,,,,,,,, ;,,,,,,,,,,, ,,,,, ,,,, ,,, ,,,;,,,,,,,,,,, ,,,,, ,,, ;,,,,,,,,; ,;,, ,,,,,(,,,,,,,;, ,,, ,,,, ,, ,,,,;, ,,,;,,,,, ,, ,,,,,,,;,,, ,,,;,,,,,; ,,,,,,,, ,,,,,,,,;,(,, ,, ,,, ,,,;,,,,,(, ,, ,,,, ,,,,,,,,,,,,, ,, ,,;,,,,,, ,,,, ,,,,,,,, ,, ,,, ;,,,,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,,,,, ,,,, ,,, ,,,,, ,,,,,,,;,,,,,,, ,,,,,,,, ,,,;,,,,,,,, ,, ;,,,,,,, ,,,,,,,, ;,,,,,,，,,,,,,,,, ,, , ,,,, ,,,;, ,,,,,,,,;, ,,, ,,,,,, ,,,,,,,;,,,,;,,, ,,,,,,,,，,,, ？,,,,,, ,,, ,,,,,,,, ,,,, ,,,,,, ,,, ,,,,,,,, ,,,,,,,;,,,, ,,,,,,,,,,, ,, ,,, ,,,,,, ,, ,,,,,,,,, ,,,, ;,,,,,,, ,,,, ,,,—,,,,,,,,,, ,,,,;,,,, ,,,,,;,,(,,,, ;,,,,,,,,,,,, ,,, ,,？,,,;, ,,,, ,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,, ,,,, ;,,,,,,, ,,,, ,,,,,,,,,, ,,,,,,;,,, ,, ,,,—;,,,,,,,,,,,,;,,, ,,？,,,;,, ,,,,, ,,, ,,,, ,,,,,,,,,,,, ;,,,,,,,,,(,,,, ,, ,,, ,,,,, ,,,,,,,,,,,,,, ,, ,,,,,, ,,,,,,,,,,,,，,(,(？,,,,,, ,,, ,,,, ,,,;,,,;,,,,;,, ,,,,,,,;,,,,,,, ,, ,,, ,,,,, ,, ,,,,;,,,,,, ,,,,, ,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,(,,,,,,, , ，,,,,,,;,—,,,,, ,,, ,,,,,,,,, ,,,,,,,,, ,,,,;,,,, ,,,;,, ,,,,, ,,,,, ,,, ,,,,,,,, ,, ;,,,,, ,,,,,,, ,,,, ，, ,,,, ,,,,,，,, ,,,,,,,,, ,, ,,,,,,,;,—,,,,, ,,, ,,,,,,,,, ,,,,, ,,,,,,,,,,,,,;,,,,,,, ,, ,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,(,,,;,, ,,,,,,—,,,,,,,, ,,,(,,,,,) ,, ,,,;,,,,, ,, ,,,,,,,,,,,, ,,, ,,,;,,,,,;,,,; ,;,, ,,,, ,,,,,,,,,,,,,, ,,,, ,,,,, ,,,,(,,,,, ,,,;,, ,,,,,, ,,,, ,,,,,,,,,, ,,,, ,,, ;,,,,,,,,,,,, ,,,,,, ,,, ,,,,;,,,,(,,,, ,,,,,,,, ,,, ,,,,,;,,,,,, ,,,, ,,,,,？,,,;,, ,,,,,,,,,,—,,,,,,,, ,,,(,,,,,)(,,, ,, ,,, ,,,,,,,,,,,,,, ,, ,,, ,,,,,,,, ;,,,,,, ,,,,,,, ,, ,,, ,,,,,;,,,,,, ,,,,,,,,，,, ,,,;,,,,,; ,,,,,,,, ,,,,,,,,;,(心,),,, ,,, ,,,,,,,,,,, ,, ,,,;,,,,, ,,, ,,,,,,,;,,,,, ,,,,,,,,,,(,,,,,,，,,,, ,,;,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,,, ,, ,,, ,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,(,,, ,,, ,,,, ,, ,,,,;, ,,, ,, ,,,,, ,,, ,,,,;,,,;,,,,,,,,,, ,,,,,,, ,,,,,,,(,,,,,,, ,,,,,,,,,,,, ;,,,,,,,,,，,,;,,,,,,,,, ,,,,,;, ;,,,,,,, ,, ,,,,, ,,,,, ,, ,,, ,, ,,,;,,,,,，,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,, ,,,, ,,,, ,,, ,,,,,,,,,(,,,,,,,,，,,, ,,,,,,,,,,,,, ,,,;,,,,, ,, ,,,,,,,,,;,,,,, ,,,,,, ,,,,, ,,,,, ,,, ,,, ,,,,;,,,,, ,,,;,, ,,,,, ,,,,, ,,, ,,,,,;,,,,,,,,,,,, ,,？,,,;,, ,,,, ;,,,,,,,(,,, ,,,,,,,,,,, ,, ,,, ,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,, ,,,, ,,, ,,,,,;,,,,,,, ,, ,,,,,,,, ,,,, ,,,,, ,,, ,, ,,,,;,,,,,,,,,,;, ,, ,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,,,,, ,,,,,, ,,,, ,,,,, ,,,,,,,;, ,,,,;,,,,,,;,,,？,,(,,,,,,,,,,,,，,,,;,, ,,,,, ,,,,, ,,, , ,,,, ,,,,,,, ,, ,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,, ,,？,,,;,,，,,,,,,,,, ,, , ,,,,,, ,,,,;,,,, ,,,;,,,;,,, ,,,, ,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,;,,,,, ,,, ,,,,,(,,,, ,, ,,, ,,,,, ,,,,,,,, ,,,,,, ,, ,,,,,, ,,,,,;,,,,,, ,,,,,,,,,;, ,,, ,,,,,,,,,,,,, ,,,,,, ,,, ,,,,;,,,,,, ,,;,,,,,,, ,,, ,,,;,,,,, ,,, ,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,, ,,,,,,,;,,,,,(,,,,,,, , ,,,;,,,;,,,,;,, ,,,,,,,;, ,,,,;,,,, ,, ,,, ,,,,,,,,,,,,, ,,,,, ,, ,,, ,,,,,,,,, ,, ,—,,, ,, ,,,,,,,,,,,,;,,,,, ,,,,,,,, ,,,,,,,, ,,,;,,,,, ,,,,,,,;,,,,,,, ,,,,,, ,,,,,, ,, ,,, ;,,,,,, ,,,,,, ,,,,,, ,,,,,,;,,,,,,,,,,,,,,,,, ,, ;,,,,;,,,, ,,,,,,,,,,,(,,,),,,, ,,,, ,,, ;,,,,,,,,; ,,,,,, ,,,,, ,,,,,—,,,,,, ;,,,,, ,,,,,,,, ,,,,,,,, ,,,;,,,,,(,, , ;,,,,？,,,;, ,,,,,,,,,,,,,,, ,,, ,,, ,,,,,,,,, ,, ,,,,,,,,,, ,,,,,, ,,,,,,,, ,,,(,—,,,)， ,,,,,,,;,,, ;, ,,,, ,,,,,,,,，,,;,,,,,,, ,, ,,,,,,,;, ,,,, ,,, ,,,, ;,,,,,,,, ,毛， ,,,,,,,,, ;,,,,,,,, ,,,，,,, ,,, ,,,;,,,,, ,,,,,,,;,,, ,,,;,,,,,; ,,,,,,,,;,凡,(,,,,, ,, ,,,,,,,,,,,,, ,,, ,,;,,,,, ,, ,,, ,, ,, ,, ,,, ,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,，,,,,, ,, ,, ;,,;,,,,, ,,,, ,,,, ,,, ;,,,,,,,,,,,, ,,, ,,？,,,;, ,,,,,,,, ,, ,, ,,,,,,,,,,,,, ,,,, ;,,,,,,, ,,,, ,,,,,,，,,,,,, ,,,,,,;,,, ,,, ,,,—;,,,,,,,,,,,, ,,,,,,;,,, ,,？,,,;,，,,,,,, ,,,,,,;,,,,,？,,,;,,(,,,,,,,,,,,,, ,,,,,, ,, ,,,,,,,,？,,,;, ,,, ,,(,,,,,一,(,,(,,,,,;,,,,,,(,,,,,,,,,,,,，,,, ,,,,;,,,, ,,,,,,,,,, ,,;,,,,,,,,,,,, ,,？,,,;, ,,, ,(,×,,一“,,,,,(,,,,,,, ,,,,,, ,,,, ,,,，一,,, ,,,,,, ,,,,,, ,,,;,,,,,; ,,,,,,,, ,,,,,,,,;, ,,,, ;,,,,,,, ,,,, ,,,，,,,, ,,,,,,,,,,(,,,, ,, ,,, ,,,,, ,,,,,,,, ,,,,,, ,, ,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,, ,,,,,, ,,,,,,,,,;, ,,, ,,,,,,,,,,,,, ,,,,,, ,,,,, ,, ,,, ,,,,;,,,, ,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,(,,,,,,, , ，,,,,,,;, ,,, ,,,,,,,,, ,,,,, ,,,;,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,—,,,,,, ;,,,,, ,,,,,,,, ,,,,,,,, ,,,;,,,,, ，, ,,,, ,,,,,，,, ,,,,,,,,, ,, ,,,;,,,;,,,,;,, ,,,,,,,;,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,,, ,,,,, , ;,,,,,,,, ,,,,,,,, ,, ,,,,,,, ,,,,(,,,),,, ,,,,,?,,,,,, ;,,,,,,,,,,,,,,(,,,,,),, ,,,,,, ,,,,,, ;,,,,, ,,,;,,,,,(,,,)(,,, ,,,,,,, ,,,, ,,, ,,,;,,,,,,,,,,,,,, ,,,, ,,, ,, ;,;,,; ,,,,,,,,,,,, ,;,, ,, ,,, ,,,,,,;, ,,;,,,,,,,,; ,,,,,, ,,,,, ,,,,,(,,,,,—,,,,)(,,;, ,,,;,,,,, ,,,,,,;,,,,,,,,,,, ,, ,,, ,,, ,,, ,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,(,,,,, ,,,,, ,,,,, ,,,,,,—,,,,,,,, ,,,(,,,一,,,,,),,,,, ,,, ,,,,,, ,,,, ,,, ,,’,,,,,,,,,,,,,,,, ,, ,,,,, ,,,,(,,, ,,,,,,,,,,,,, ,,,;,,,, ,, ,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,—,,,,,,,, ,,,,,,,, ,, , ,,;,,,,,, ,,,,,,,;,，, ,, ,,, ,,,,, ,,,;,,,,;, ,,, ,,,,,,,,,, ,,,; ,,,,,,,, ,,,,,,,,;, ,, ,,,,,,—,,,,,,,, ,,, ,,,, ,,,,,,—,,,,,,,, ,,,(,, ,,, ,,,,,, ,, ,,, ,,,,,,,,, ,,,,,,;,,,,,，,,, ,,,;,,,,, ,,,,,,, , ,,,, ,,,;,,,, , ,,,,, ,,,;,,,; ,,,,,,,, ,,,,,,,, ,,, ,; ,,,,,;, ,,,,(,,,,,？,,,,,,，,,, ,,,,,,,,,,, ,,, ,,,,;,,,,,, ,, ,,,, ,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,,,,, ,,,, ,,,,,,,,(,, ,,, ,, ,(,, , ,’,, ,,,,, ;,,,,,,,,,,,, ,,, ,,？,,,;, ;,, ,, ,,,,;,,, ,,, ,,,,,, ,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,,, ,, ,,,,,;,,,,,,(,,;, ,,,,,,,, ,,,,;,,,,, ,,,,,,,, ,,,,,,,, ,,,;,,,,, ,, ,,,,, ,,,,,,,, ,,, ,,,,,;,,,,, ,,,;,,,;,,,,;,, ,,, ,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,( ,,,,,,, , ,,,,;, ,,,;,,,;,,,,;,, ,,,,;,,,, ,, ,,, ,,,,,,,,,,,,, ,, ,,,,(,,,,,,,,),,,, ，, ,,,, ,,,,，,,, ,,,,,;,,,,, ,, , ;,,,,;,,,, ,,,,,,,，,(,(,,,,(,,,,,,,,)，,,,,,,,, ,,,;,,,,, ,, ,,,,,,,,,, ,,, ,, ,,,, ,, ,, ,,,,,,,;, ,,, ,,,,,,,,,,,,, ,,, ,,,,,—,,,, ,,,,,, ,,, ,,,,,,,;,,(,,, ,,,;,,,,,,,,,,,,,,,,, ,, ,,,,,,,, ,,,,,,,;,,,,, ,,,,,;, ,,, ;,,,,,, ,,, ,, ,,, ,,,,,，,,,;, ,,, ,,,,,,,,, ,,, ,,,,,, ;,,,,,,,,;,,,,, ,, ,,,,,,,, ,,,,,,,, ,, , ;,,,,,,, ,,,,,,,, ,,,,,,,,, ,,,,,,,, ,, ;,;,,;,,,,,,,,,,, ,;,,,(,,;, ,,,,,,,, ,,,,(,,,,,,,,),,,,,,,, ,,,;,,,,, ,,,,,, ,,,,,,,,,,,,, ,,, ,,,;,,,,;,,,,,, ,, ,？,,,,, ,,,,, ,,,,,, , ,,,,,,, ,, ,,,,,(,,,,,,,,,,,,，,,, ,,,,,,, ,,,,, ,,,,,, ,, ,,, ,,,,(,,,,,,,,);,,,,, ,,,,,,, ,,, ,,,,,,,, ,,,;,,,,,,, ;,,,,,,,,, ,,,,,,,,,, ,,,,,,,,, ,,,,, ,,,,,,,,,, ,,, ,,,,, ,, ,,, ,,,,,,;, ,,,,,,(,,, ,,,,,,,,, ,, ,,,,,, ,,,,,,,, ,,, ,, ,,, ,,,,,,, ,,,, ,,;,,,,,, ,,,,,,,(,,,,,,,,),,,;,,,,;,,,,,,，,,,,,,,,, ,, , ,,;,,,,, ,, ,,,,(,,,,,,,,),,,,,,,,,,,;,,,, ;,,,,,,(,,,,, ,, ,,,,,,,,,,,,, , ,,,,, ,,, ,,;,,,,,, ,,,,;,,,, ;,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,，,,, ,,,,;,,,, ,,,,, ,, ,,,, ,,, ,,,,,,,,,,,,, ,,,,,, ,,,,(,, , ,’,, ,,,,,(,,,,,,,, ,,,, ;,,,,,,,,,,, ,,, ,,？,,,;,，,,, ,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,, ,,,,,,;,,, ,,,,,,，,,,,,, ,,,,,,;,,, ,,,,,, ,,, ,,(,,,,, ,(,,，,,,,,;,,,,,,(,,,,,,, , ,,,;,,,;,,,,;,, ,,, ,,,,,,,,, ,,,,, ,, , ,,,,,,,,,;,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,, ,,,;,,,,, ，,,,,,,,,,,,,, ,, ,,, ,,,, ;,,,,, ,,,,,,,,, ,,,,, ,, ,,,,,,,,, ,,,, ,, ,,,,,,,,,,,,,, ,, ;,,,,, ,,,,,,,,—,,,,, ,,, ,,,,,,,,,,(,,,,,,，,,,,,,,, ,,,,;,,,,,,,, ,,,,;,,, ,,,, ,,, ,,,,,,,,, ,, ,,,,,—,,,,,, ;,,,,, ,,,,,,,,, ,,, ,,,,,, ,,,;,,,,,,,;,(,,;, ,,,,,,;,,,,, ,,,睿椋妫椋悖幔睿簦欤?,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,, ,, ;,,,,, ,,,,,,,,, ,,,？,,,,, ,,,,,,,,(,,,,,,,,,,,,，,, ,,,;,,,,,,,,,, ,,, ;,,,,, ,,,,,,,,,、?,,,, ,,,,,,,,,。,, , ,,,,,,，,,,,,,,, ,;,,, ,, , ,,,,,, ,, ;,,,,,,,,, ;,,,,;, ,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,, ,,, ,,,, ,,,,,,,,,;,,,,, ,,,,,,,, ,,,,,,,, ,,,;,,,,, ,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,(,,,,, ,,, ,,, ,,,,,,,,,,,,,，,,, ,,,,,,;,,,, ,,,,,,,,,,,,,,;,, ,,, ,,,,,, ,,,,,,,, ,, , ,,,,;,,,, ,, ,,, ,,,,,,,, ,,,;,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,, ,, ,,,,,,,,,,,, ,,,,, ,,,,,,,,,,,，,,, ,,, ,,,,,,,,, ;,,,,,, ,,,, ,, ,,,,,,,,;,,,,,, ,,,,,,,;,, ,,, ,,,,,,,, ,, ,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,(,,,,,,;,,,,, ,, ,,,,,,;,,,,, ,,,, ,,,,,,,,,;,,,,, ,,,,,,,,, ,,,,,,,;,,,,, ,,,,,;,, ,,, ,,,,,,,,,,,,,, ,,,,, ,,,,,, ,,, ,,,,,,,, ,,, ,,,;,,,, ,,,,,,,,, ,,,,,,, ,,, ,,,,,;,,,,,,,,,,,,,;,, ,,, ,,, ,,,;,,,,,(,,,,,,,,,，, ,,,,,,,,,,, ,,,,,,,, ,,,,;,,,, ,,,,, ,,,,,,,,,,, ;,,,,,,, ,,,, ,,,,, ;,,,,,,,,,,, ,,,;,,,,,,,,, ,,,,,:,,,;,,,;,,,,;,, ,,, ,,,,,,,,,，,,,;,,,;,,,,;,, ,,,,,,,;,,,,;,,,,;,,,，,,,,,—,,,, ,,,,,,,,,,,,, ,,,,;,,,,，,,,;,,,,,,,,,,,,,,,,,，;,,,,,,,,,,,,, 学位论文独创性声明 本人所呈交的学位论文是我在导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除文中已经注明引用的 内容 财务内部控制制度的内容财务内部控制制度的内容人员招聘与配置的内容项目成本控制的内容消防安全演练内容 外，本论文不包含其他个人已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中作了明确说明并表示谢意。 作者签名: 徐和隰墅垒, 学位论文使用授权声明 本人完全了解华东师范大学有关保留、使用学位论文的规定，学校有权保留学位论文并向国家主管部门或其指定机构送交论文的电子版和纸质版。有权将学位论文用于非赢利目的的少量复制并允许论文进入学校图书馆被查阅。有权将学位论文的内容编入有关数据库进行检索。有权将学位论文的标题和摘要汇编出版。保密的学位论文在解密后适用本规定。 、, 学位论文作者签名:圹齐颜 导师签名:孑产,,,;压之, 日期:)母彩(,,,， 日期:,—矿,,, 第一章绪论,(遗传物质核酸 ,(,引言 ,,,,年，美国,(,(,,,,,等为了寻找导致细菌转化的原因以肺炎球菌作为研究对象，证明脱氧核糖核酸,,,是遗传物质。以此确立了核酸是遗传物质的重要地位，人们把对遗传物质的注意力从蛋白质转移到核酸上。,,,,年德国,,,,,,,(,,,,,,将烟草花叶病毒作为研究对象，证明在不具备,,,的病毒中，核糖核酸,,,是遗传物质。,,,,年,(,,,,,,用大肠杆菌,,噬菌体作为研究对象，在,,,分子结构水平上证明基因是,,,分子上的一个特定区段，是独立的遗传单位。分子生物学将基因定义为:编码一条多肽链或功能,,,所必须的全部核苷酸序列。所以,,,是遗传物质的储存者，通过转录和翻译过程生成有生理功能的蛋白质，体现生物性状。 确定遗传物质为核酸后，,,,,年,,,,,,和,,,;,以立体化学上的最适结构构建了与,,, ,射线衍射资料相符的分子模型，即,,,双螺旋结构模型，是分子遗传学诞生的标志，开拓了分子生物学的发展。 ,(,核酸分子结构 核酸是遗传信息的存储和传递者，结构单体是核苷酸，一个核苷酸包括一个含氮碱基、一个核糖和一个磷酸根。脱氧核糖核酸,,,含,(鸟嘌呤)，,(腺嘌呤)，,(胞嘧 啶)，,(胸腺嘧啶)四种碱基和脱氧核糖;核糖核酸,,,，含,，,，,，,(尿嘧啶)四种碱基和核糖。 核苷酸通过磷酸二酯键连接成多聚核苷酸链，两条核苷酸链以右手方向盘旋方式围绕同一中心轴相互缠绕，即相互平行而走向相反组成双螺旋构型。碱基之间严格遵循碱基互补配对原则:,与,配...