中文下载-大鼠抗酒石酸酸性磷酸酶5bTRACP5bELISA-Kit
大鼠抗酒石酸酸性磷酸酶5b酶联免疫分析(TRACP-5b ELISA)
试剂盒使用说明
书
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本试剂盒仅供研究使用
产品编号:E0902r
预期应用
ELISA法定量测定大鼠血清,血浆或其它相关液体中TRACP-5b含量。 实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中TRACP-5b水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入TRACP-5b、生物素化的抗大鼠TRACP-5b抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TRACP-5b显色。TRACP-5b在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的TRACP-5b呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，计算样品浓度。 试剂盒组成
1. 酶联板:一块(96孔)
2. 标准品(冻干品):2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以
上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为20 U/L，做系列倍比稀释后，分别稀释成
20 U/L，10 U/L，5 U/L ，2.5 U/L，1.2 U/L，0.6 U/L，0.3 U/L，其原液直接作为最高标
准浓度，样品稀释液直接作为标准浓度0 U/L，临用前15分钟内配制。
如配制10 U/L标准品:取0.5ml 20 U/L的上述标准品加入含有0.5ml样品稀释液的
Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3. 样品稀释液:1×20ml/瓶。
4.
检测
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稀释液A:1×10ml/瓶。
5. 检测稀释液B:1×10ml/瓶。
6. 检测溶液A:1×120ul/瓶(1:100)临用前以抗体稀释液A1:100稀释。 7. 检测溶液B:1×120ul/瓶(1:100)临用前以抗体稀释液B1:100稀释。 8. 底物溶液:1×10ml/瓶。
9. 浓洗涤液:1×30ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。
10. 终止液:1×10ml/瓶(2N HSO4)。 2
标本的采集及保存
1(血清:标本请于室温放置2小时或4?过夜后于1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20?保存，但应避免反复冻融。
2(血浆:可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8? C 1000 x g离心15分钟，或将标本放于-20?保存，但应避免反复冻融。
注:标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。
3. 组织匀浆: 将动物的组织标本先用PBS洗涤,去除多余血液,匀浆化后放在20mlPBS中于-20? C放置过夜,第二天,经过二次反复冻融破膜,将匀浆物5000x g离心5分钟,取上清即可检测。
操作步骤
各试剂在使用前平衡至室温。
1. 加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。除空白孔外，余孔分别加标准溶液或待测
样品100ul，轻轻混匀，37?，120分钟。
2. 弃去液体，甩干，不用洗涤。
3. 每孔加检测溶液A工作液 100ul，37?,60分钟。洗板3次，350ul/每孔，甩干。 4. 每孔加检测溶液B工作液 100ul，37?，60分钟，洗板5次，甩干。 5. 依序每孔加底物溶液90ul，37?避光显色30分钟。
6. 依序每孔加终止溶液50ul，终止反应。用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度
(OD值)。
注:
SO4。1( 每次实验留一孔作为空白调零孔，该孔不加任何试剂，只是最后加底物溶液及2NH2
测量时先用此孔调OD值至零。
2(为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内。
洗板
方法
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手工洗板方法:吸去(不可触及板壁)或甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层 吸水纸，酶标板朝下用力拍几次;将推荐的洗涤缓冲液至少0.4ml注入孔内，浸泡1-2分钟，根据需要，重复此过程数次。
自动洗板:如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。 特异性
本试剂盒可同时检测重组或天然的大鼠TRACP-5b，且与其它相关蛋白无交叉反应。 计算
以标准物的浓度为横坐标(对数坐标)，OD值为纵坐标(普通坐标)，在半对数坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
注意事项
1( 洗涤过程非常重要，不充分的洗涤易造成假阳性。
2( 一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。 3( 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。
4( 如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请最后乘以稀释倍数。 5(在配制标准品、检测溶液工作液时，请以相应的稀释液配制，不能混淆。 6(底物请避光保存。
检测范围:
0.3 U/L -20 U/L
说明
1(试剂盒保存:-20?(较长时间不用时);2-8?(频繁使用时)。
2(有效期:6个月
3(浓洗涤液会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。
4(中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。
5(刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任
何影响。
浙公网安备 33021202002483