加热沉淀蛋白质实验报告

加热沉淀蛋白质实验报告 沉淀反应实验报告 实验蛋白质的沉淀反应与颜色反应 一、实验目的 掌握鉴定蛋白质的原理和 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 。熟悉蛋白质的沉淀反应，进一步熟悉蛋白质的有关反应。 二、实验原理 蛋白质分子中某种或某些集团可与显色剂作用，产生颜色。不同的蛋白质由于所含的氨 基酸不完全相同，颜色反应亦不完全相同。颜色反应不是蛋白质的专一反应，一些非蛋白物 质也可产生同样的颜色反应，因此不能根据颜色反应的结果来决定被测物是否为蛋白质。另 外，颜色反应也可作为一些常用蛋白质定量测定的依据。蛋白质是亲水性胶体，在溶液中的 稳定性与质点大小、电荷、水化作用有关，但其稳定性是有条件的，相对的。如果条件发生 了变化，破坏了蛋白质的稳定性，蛋白质就会从溶液中沉淀出来。 三、实验仪器 1、吸管 2、滴管 3、试管 4、电炉 5、ph试纸 6、水浴锅7、移液管 四、实验试剂 1、卵清蛋白液:鸡蛋清用蒸馏水稀释10-20倍，3-4层纱布过滤，滤液放在冰箱里冷藏 备用。 2、 0.5%苯酚:1g苯酚加蒸馏水稀释至200ml。 3、millon’s试剂:40g汞溶于60ml浓硝酸(水浴加温助溶)溶解后，冷却，加二倍体 积的蒸馏水，混匀，取上清夜备用。此试剂可长期保存。 4、尿素晶体 5、1%cuso:1g cuso晶体溶于蒸馏水，稀释至100ml 446、10%naoh:10g naoh溶于蒸馏水，稀释至100ml 7、浓硝酸 8、0.1%茚三酮溶液:0.1g茚三酮溶于95%的乙醇并稀释至100ml. 9、 冰醋酸 10、浓硫酸 11、饱和硫酸铵溶液:100ml蒸馏水中加硫酸铵至饱和。 12、硫酸铵晶体:用研钵研成碎末。 13、95%乙醇。 14、醋酸铅溶液:1g醋酸铅溶于蒸馏水并稀释至100ml 15、氯化钠晶体 16、10%三氯乙酸溶液:10g三氯乙酸溶于蒸馏水中并稀释至100ml 17、饱和苦味酸溶液:100ml蒸馏水中加苦味酸至饱和。 18、 1%醋酸溶液。 五、实验步骤 蛋白质的颜色反应 (一)米伦(millon’s)反应 1、苯酚实验:取0.5%苯酚溶液1ml于试管中，加millon’s试剂0.5ml，电炉小心加热 观察颜色变化。 2、蛋白质实验:取2ml蛋白液，加millon’s试剂0.5ml，出现白色的蛋白质沉淀，小 心加热，观察现象。 (二)双缩脲反应 1、取少量尿素晶体放在干燥的试管中，微火加热熔化，至重新结晶时冷却。然后加 10%naoh溶液1ml，摇匀，再加2-4滴1% cuso4溶液，混匀，观察现象。 2、取蛋白液1ml，加10%naoh溶液1ml，摇匀，再加2-4滴1% cuso4溶液，混匀，观察 现象。 (三)黄色反应 取一支试管，加入1ml蛋白液及浓硝酸5滴。加热，冷却后注意颜色变化。然后再加入 10%naoh溶液1ml，观察颜色有什么变化。 (四)茚三酮反应 取蛋白液1ml于试管中，加4-8滴茚三酮溶液，加热至沸，即有蓝紫色出现。 蛋白质的沉淀 (一)蛋白质的盐析作用 1、试管中加蒸馏水3ml，加固体硫酸铵至饱和。另一支试管加蛋白液2ml，再加入饱和 硫酸铵溶液2ml，摇匀静置观察现象。 2、将上述混合液过滤。向滤液中逐渐加入少量固体硫酸铵，直至饱和为止，此时析出为 清蛋白。再加入少量蒸馏水，观察沉淀是否溶解。 (二)有机溶剂沉淀蛋白质 试管中加蛋白液1ml，加晶体氯化钠少许，溶解后加95%乙醇3ml,摇匀，观察现象。 (三)重金属盐与某些有机酸沉淀蛋白质 1、取试管2支，各加蛋白液2ml，一支管中滴加1%醋酸铅溶液，另一支管中滴加1%硫 酸铜溶液，至有沉淀产生。 2、取一支试管加蛋白液2ml，再加入10%三氯乙酸1ml，充分混匀，观察结果。 (四)生物碱试剂沉淀蛋白质取一支试管，加入蛋白液2ml及醋酸4-5滴，再加饱和苦味酸数滴，观察现象。 六、实验结果 蛋白质的颜色反应 (一)米伦(millon’s)反应 1、苯酚实验: 溶液即出现玫瑰红色。 2、蛋白质实验: 出现白色的蛋白质沉淀，小心加热后凝固的蛋白质出现红色。 (二)双缩脲反应 1、有紫色出现。 2、溶液有蓝紫色出现 (三)黄色反应 先有黄色沉淀生成，加入10%naoh溶液1ml后颜色变为橘黄色。 (四)茚三酮反应有蓝紫色出现。 蛋白质的沉淀 (一)蛋白质的盐析作用 1、有蛋白析出。 2、有蛋白质析出，加水后可复溶。 (六)有机溶剂沉淀蛋白质取一试管加蛋白液1ml，，加入晶体氯化钠少许，待溶解后再加95%乙醇3ml,摇匀，观察 现象 (七)重金属盐与某些有机酸沉淀蛋白质 取试管2支，各加蛋白液2ml，一支管中滴加1%醋酸铅溶液，另一支管中滴加1%硫酸铜 溶液，至有沉淀产生。 (八)生物碱试剂沉淀蛋白质 取一支试管，加入蛋白液2ml及醋酸4-5滴，再加饱和苦味酸和鞣酸数滴，观察现象。 七、 实验 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 蛋白质分子中某种或某些集团可与显色剂作用，产生颜色。不同的蛋白质由于所含的氨 基酸不完全相同，颜色反应亦不完全相同。篇二:自由沉淀实验报告 六、实验数据 记录 混凝土 养护记录下载土方回填监理旁站记录免费下载集备记录下载集备记录下载集备记录下载 与整理 1、实验数据记录 沉降柱直径 水样来源 柱高 静置沉淀时间/min 表面皿表面皿编号 质量/g表面皿 和悬浮物总质量/g 水样中悬浮物质量/g 水样体积/ml 悬浮物沉降柱浓度/工作水(g/ml) 深/mm颗粒沉沉淀效 速/率/, (mm/s) 残余颗 粒百分比/, 0 5 10 20 30 60 1200 1 2 3 4 5 6 79.0438 80.7412 1.6974 81.7603 83.2075 1.4472 64.1890 65.4972 1.3082 66.1162 67.3286 1.2124 73.7895 74.9385 1.1490 83.4782 84.6290 1.1508 75.0332 76.1573 1.124131.0 30.0 30.0 30.0 30.0 31.0 31.00.0548 0.0482 0.0436 0.0404 0.0383 0.0371 0.0363 846.0 808.0 780.0 724.0 664.0 500.0 361.0 1.860 0.883 0.395 0.230 0.069 0.021 11.40 20.44 26.28 30.11 32.30 33.76 100 87.96 79.56 73.72 69.89 67.70 66.24 2、实验数据整理 (2)绘制沉淀曲线:e-t 、e-u 、ui~pi曲线如下: 2-1、绘制 去除率与沉淀时间的曲 线如下:图2.2:沉淀时间t与沉淀效率e的关系曲线 2-2、绘 制去除率与沉淀速度的曲线如下:图2.2:颗粒沉速u与沉淀效率 e的关系曲线 2-3、绘制去除率与沉淀速度的曲线如下: (1)选择t=60min 时刻:(大家注意哦～这部分手写的，不要 直接打印～) 水样中悬浮 物质量=表面皿和悬浮物总质量-表面皿质量,如表格所示。 原水 悬浮物的浓度:c0? 水样中悬浮物质量1.6974??0.0548g/ml 水样体积31.0 悬浮物的浓度:c5? 水样中悬浮物质量1.1508??0.0371g/ml 水样体积31.0 沉淀速率:u? h?10(500-250)??0.069mm/sti?6060?60 c0-c50.0548-0.0371 ?100%??100%?32.30 c00.0548c50.0371 ?100%??100%?67.70 c00.0548沉淀效率:e5? 残余颗粒百分比p5?篇三:混凝沉淀实验报告 实验名称:混凝沉淀实验 一、实验目的 1、通过实验观察混凝现象、加深对混凝沉淀理论的理解; 2、掌握确定最佳投药量的方法，选择和确定最佳混凝工艺条件; 3、了解影响混凝条件的相关因数。 二、实验原理 1.混凝作用原理包括三部分:1)压缩双电层作用;2)吸附架桥作用;3)网捕作用。 这三种混凝机理在水处理过程中不是各自孤立的现象，而往往是同时存在的，只不过随不同 的药剂种类、投加量和水质条件而发挥作用程度不同，以某一种作用机理为主。对高分子混 凝剂来说，主要以吸附架桥机理为主。而无机的金属盐混凝剂则三种作用同时存在。胶体表面的电荷值常用电动电位ξ表示，又称为zeta电位。 一般天然水中的胶体颗粒 的zeta电位约在-30mv以上，投加混凝剂之后，只要该电位降到-15mv左右即可得到较好的 混凝效果。相反，当电位降到零，往往不是最佳混凝状态。因为水中的胶体颗粒主要是带负 电的粘土颗粒。胶体间存在着静电斥力，胶粒的布朗运动，胶粒表面的水化作用，使胶粒具 有分散稳定性，三者中以静电斥力影响最大，若向水中投加混凝剂能提供大量的正离子，能 加速胶体的凝结和沉降。 2.混凝剂 向水中投加的能使水中胶体颗粒脱稳的高价电解质，称之为“混凝剂”。混 凝剂可分为无机盐混凝剂和高分子混凝剂。水处理中常用的混凝剂有:三氯化铁、硫酸铝、 聚合氯化铝(简称pac)、聚丙烯酰胺等。本实验使用pac，它是介于alcl3 和al(oh)3 之间 的一种水溶性无机高分子聚合物，化学通式为[al2(oh)ncl(6-n)]m 其中m代表聚合程度，n 表示pac产品的中性程度。 3.投药量单位体积水中投加的混凝剂量称为“投药量”，单位为mg/l。混凝剂的投加 量除与混凝剂品种有关外，还与原水的水质有关。当投加的混凝剂量过小时，高价电解质对 胶体颗粒的电荷斥力改变不大，胶体难以脱稳，混凝效果不明显;当投加的混凝剂量过大时， 则高价反离子过多，胶体颗粒会吸附过多的反离子而使胶体改变电性，从而使胶体粒子重新 稳定。因此混凝剂的投加量有一个最佳值，其大小需要通过试验确定。 4.影响混凝作用的因素投药量、水中胶体颗粒的浓度、水温、水的ph值等。 5.浊度仪浊度是表现水中悬浮物对光线透过时所发生的阻碍程度。水中含有泥土、粉 尘、微细有机物、浮游动物和其他微生物等悬浮物和胶体物都可使水中呈现浊度。浊度仪采 用90?散射光原理。由光源发出的平行光束通过溶液时，一部分被吸收和散射，另一部分透 过溶液。与入射光成90?方向的散射光强度符合雷莱公式，在入射光恒定条件下，在一定浊度范围内，散射光强度与溶液的混浊 度成正比。因此，我们可以通过测量水样中微粒的散射光强度来测量水样的浊度。 三、实验仪器和试剂 1.仪器 (1)浊度仪一台(sgz-2数显浊度仪，上海悦丰仪器仪表有限公司) (2)混凝试验搅拌仪(my3000-6普通型混凝试验搅拌仪，潜 江梅宁仪器有限公司) (3)电子天平(赛多利斯科学仪器，北京有限公司) (4) 沉淀桶(600ml烧杯)6个;(5) 100ml取样瓶6个;(6)乳胶管或塑料软管(直 径5~8mm)15~20cm;(7) 100ml烧杯1个;(8) 100ml量筒1个; (9) 500ml量 筒1个;(10) 10ml 量筒 1个; 2.实验试剂 混凝剂:聚合氯化铝pac; 原水(制备工作已由实验员完成);自来水 四、 实验步骤 1) 制备原水:事先用高岭土配制浊度为50 ntu左右的浑水，静沉1天以上，取上清液 备用。(已由 实验员完成) 2) 用电子天平称取混凝剂(pac)3g溶于1l自来水中，浓度为3g/l。 3) 取600ml原水倒入与搅拌仪配套的沉淀桶中。共六个沉淀桶。 4) 根据原水体积，按照投加量80、120、160、200、300、400mg/l计算加药量，并换 算成混凝剂溶 液的体积量。换算后，混凝剂溶液的体积分别为:16、24、32、40、60、80ml。 5) 设置搅拌仪程序: (1)转速400转/分，搅拌1.5 min ;(2)转速150转/分，继续搅拌5 min; (3)转速60 转/分，继续搅拌5 min;(4)转速0转/分钟，沉淀15min 6) 用量筒量取步骤(3)计算的混凝剂量，快速加入沉淀桶中。贴好标签，将六个沉淀 桶放置在搅 拌仪上。 7) 开启搅拌仪，按照设定程序运行。(注意观察各个沉淀桶的絮凝沉淀情况) 8) 程序结束后，打开沉淀桶的小阀门，取每个沉淀桶中上清液50~100ml于清洗好的试 管中。 9) 用浊度仪测定上清液浊度并进行记录(速度要快;使用前要调零;待浊度仪示数较 稳定时读数) 五、 实验结果记录及处理 表.不同加药量溶液的浊度加药量 mg/l pac溶液 体积/ml浊度/ntu 8.23 3.30 2.20 以投药量为横坐标，上清液浊度为纵坐标绘制不同混凝剂混凝沉淀图，从图中求出最低 浊度时混凝的投加量。 2.43 4.70 110.00 16 24 32 40 60 80 80 120 160 200 300 400 图.不同混凝剂混凝沉淀图从以上作图结果可以看出，以四次方的多项式拟合效果较好(r=1)，当溶液的浊度达到 最低点时对应的投药量约为255mg/l，即该原水的最佳投药量为255mg/l。 2 六、结果与讨论 1.实验时，在搅拌过程中发现不同沉淀桶中呈现的颜色深浅不一，形成的絮状颗粒大小 篇二:蛋白质的沉淀和变性实验 蛋白质的沉淀与变性反应 目的 (1)了解蛋白质的沉淀反应、变性作用和凝固作用的原理及它们的相互关系。 (2)学习盐析和透析等生物化学的操作技术。 原理 在水溶液中，蛋白质分子的表面，由于形成水化层和双电层而成为稳定 的胶体颗粒，所以蛋白质溶液和其他亲水胶体溶液相类似。但是，蛋白质胶 体颗粒的稳定性是有条件的，相对的。在一定的物理化学因素影响下，蛋白 质颗粒失去电荷，脱水，甚至变性，则 以固态形式从溶液中析出，这个过程 称为蛋白质的沉淀反应。这种反应可分为以下两种类型: 一、可逆淀汲反应 在发生沉淀反应时，蛋白质虽已沉淀析出，但它的分子内部结构并未发 生显著变化，基本上保持原有的性质，沉淀因素除去后，能再溶于原来的溶 剂中。这种作用称为可逆沉淀反应，又叫作不变性沉淀反应。属于这一类的 反应有盐析作用; 在低温下，乙醇、丙酮对蛋白质的短时间作用以及利用等 电点的沉淀等。 二、不可逆沉淀反应 在发生沉淀反应时，蛋白质分子内部结构、空间构象遭到破坏，失去原 来的天然性质，这时蛋白质已发生变性。这种变性蛋白质的沉淀不能再溶解 于原来溶剂中的作用叫作不可逆沉淀反应。重金属盐、植物碱试剂、过酸、 过碱、加热、震荡、超声波，有机溶剂等都能使蛋白质发生不可逆沉淀反应。 试剂和器材 一、试剂 1(蛋白质溶液 取5m1鸡蛋蛋白蛋清，用蒸馏水稀释至100ml，搅拌均匀后用4-8层纱 布过滤，新鲜配制。 2(蛋白质氯化钠溶液 取20ml蛋清，加蒸馏水200ml和饱和氯化钠溶液100ml，充分 搅匀 后，以纱布滤去不溶物(加入氯化钠的目的是溶解球蛋白)。 硫酸铵粉末，饱和硫酸铵溶液，3%硝酸银，0.5% 醋酸铅，10% 三氯醋 酸，浓盐酸，浓硫酸，浓硝酸，5% 磺基水杨酸(sulfosalicyclic acid)，0.1% 硫酸铜，饱和硫酸铜溶液，0.1% 醋酸，10% 醋酸，饱和氯化 钠溶液，10% 氢氧化钠溶液。 二、器材 试管，试管架，小玻璃漏斗，滤纸，玻璃纸，玻璃棒，500ml 烧杯，10 ml量筒。 操作方法 一、蛋白质的可逆沉淀反应蛋白质的盐析作用 用大量中性盐使蛋白质从溶液中沉淀析出的过程称为蛋白质的盐析作用。蛋白质是亲水胶体，在高浓度的中性盐影响下，蛋白质分子被盐脱去水化层，同时蛋白质分子所带的电荷被中和，结果蛋白质的胶体稳定性遭受破坏而沉淀析出。析出的蛋白质仍保持其天然蛋白质的性质。减低盐的浓度时，还能溶解。 沉淀不同的蛋白质所需中性盐的浓度不同，而盐类不同也有差异。例如:向含有白蛋白和球蛋白的鸡蛋清溶液中加硫酸镁或氯化钠至饱和，则球蛋白沉淀析出。加硫酸钱至饱和，则白蛋白沉淀析出。另外，在等电点时，白蛋白可被饱和硫酸镁或氯化钠或半饱和的硫酸铵溶液沉淀析出。所以在不同条件下，用不同浓度的 盐类可将各种蛋白质从混合溶液中分别沉淀析出，该法称为蛋白质的分级盐析。目前在腌的生产和制备、科学研究工作和临床化验等工作中广泛应用。 取一支试管加入3m1蛋白质氯化钠溶液和3m1饱和硫酸铵溶液，混匀，静置约10 min，球蛋白则沉淀析出，过滤后向滤液中加入硫酸铵粉末，边加边用玻璃棒搅拌，直至粉末不再溶解，达到饱和为止。析出的沉淀为白蛋白。静置，倒去上部清液，白蛋白沉淀，取出部分加水稀释，观察它是否溶解，留存部分作透析用。 二、蛋白质的不可逆沉激反应 1(重金属沉淀蛋白质 重金属盐类易与蛋白质结合成稳定的沉淀而析出。蛋白质在水溶液中是酸碱两性电解质，在碱性溶液中(对蛋白质的等电点而言)，蛋白质分子带负电荷，能与带正电荷的金属离子结合成蛋白质盐。在有机体内，蛋白质常以其可溶性的钠盐或钾盐的形式存在，当加入汞，铅、铜、银等重金属盐时，则蛋白质形成不溶性的盐类而沉淀。经过这种处理后的蛋白质沉淀不再溶解于水中， 说明 关于失联党员情况说明岗位说明总经理岗位说明书会计岗位说明书行政主管岗位说明书 它已发生了变性。重金属盐类沉淀蛋白质的反应通常很完全，特别是在碱金属盐类存在时。因此，生化分析中，常用重金属盐除去体液中的蛋白质;临床上用蛋白质解除重金属盐的食物性中毒。但应注意，使用醋酸铅或硫酸铜沉淀蛋白质时，试剂不可加过量，否则可使沉淀出的蛋白质重新溶解。 取2支试管，各加入约1m1蛋白质溶液，分别加入3 % 硝酸银 3-4滴，0.5% 醋酸铅1-3滴和0.1%硫酸铜3-4滴，观察沉淀的生成。第一、二支试管再分别加入过量的醋酸铅和饱和硫酸铜溶液，观察沉淀的再溶解。 2(有机酸沉淀蛋白质 有机酸能使蛋白质沉淀。三氯醋酸和磺基水杨酸最有效，能将血清等生物体液中的蛋白质完全除去，因此得到广泛使用。 取两支试管，各加入蛋白质溶液约0.5 m1，然后分别滴加10% 三氯醋酸和5%磺基水杨酸溶液各数滴，观察蛋白质的沉淀。 3(无机酸沉淀蛋白质 浓无机酸(除磷酸外)都能使蛋白质发生不可逆的沉淀反应。这种沉淀作用可能是蛋白质颗粒脱水的结果。过量的无机酸(硝酸除外)可使沉淀出的蛋白质重新溶解。临床诊断上，常利用硝酸沉淀蛋白质的反应，检查尿中蛋白质的存在。 取3支试管，分别加入浓盐酸15滴，浓硫酸、浓硝酸10滴。小心地向3支试管中，沿管壁加入蛋白质溶液6滴，不要摇动，观察各管内两液界面处有白色环状蛋白质沉淀出现。然后，摇动每个试管。蛋白质沉淀应在过量的盐酸及硫酸中溶解。在含硝酸的试管中，虽经振荡，蛋白质沉淀也不溶解。 4(加热沉淀蛋白质 几乎所有的蛋白质都因加热变性而凝固，变成不可逆的不溶状态。盐类和氢离子浓度对蛋白质加热凝固有重要影响。少量盐类促进蛋白质的加热凝固。当蛋白质处于等电点时，加热凝固最完 全、最迅速。在酸性或碱性溶液中，蛋白质分子带有正电荷或负电荷，虽加热蛋白质也不会凝固。若同时有足量的中性盐存在，则蛋白质可因加热而凝固。 取5支试管。编号，按下表加入有关试剂(单位:滴): 将各管混匀，观察记录各管现象后，放人沸水浴中加热10 min，注意观察比较各管的沉淀情况。然后将第3，4，5号管分别用10% NaOH或10% 醋酸中和，观 察并解释实验结果。 将3，4，5号管继续分别加入过量的酸或碱，观察它们发生的现象。然后，用过量的酸或碱中和第3，5号管，沸水浴加热10 min，观察沉淀变化，检查这种沉淀是否溶于过量的酸或碱中，并解释实验结果。 问题: 1(为什么蛋清可用作铅中毒或汞中毒的解毒剂? 2(蛋白质分子中的哪些基团可以与 (1)重金属离子作用而使蛋白质沉淀? (2)有机酸、无机酸作用而使蛋白质沉淀? 3(高浓度的硫酸铵对蛋白质溶解度有何影响，为什么? 4(在蛋白质可逆沉淀反应的实验中，为何要用蛋白质氯化钠溶液? 篇三:实验一 蛋白质的沉淀与凝固 ?实验内容 实验一 蛋白质的沉淀与凝固 蛋白质溶液是一稳定的亲水性溶胶液，其稳定的因素有二:一是蛋白质胶粒上的电荷使之相互排斥，不易凝集成团;二是胶粒表面的水化膜，它使胶粒与水融洽相依，又在胶粒之间起了隔离作用。如果上述两种稳定蛋白质溶液的因素被破坏，蛋白质将于溶液中沉淀析出。 促使蛋白质沉淀的因素很多，大致可分为两类: 第一类是可逆的沉淀反应。这时蛋白质的空间构象未受到很大改变，除去沉淀因素后，可以重新溶解，例如盐析和低温乙醇沉淀蛋白。 第二类是不可逆的沉淀反应，重金属盐类或生物碱试剂沉淀蛋白后，由于蛋白质结构发生重大改变，所以不再溶于水中。不可逆的蛋白质沉淀多表示蛋白质已经变性。变性的蛋白质在等电点附近加热时，蛋白质分子间相互盘绕而变成坚实的凝块。 一、 蛋白质的盐析 [原理] 高浓度的盐离子可与蛋白质胶粒争夺水化膜，同时盐又是强电解质，可抑制蛋白质的解离。因而用高浓度的中性盐，使蛋白质带电量减少，水化膜破坏而从溶液中沉淀出来。盐析沉淀蛋白一般不引起蛋白变性，故常用于分离各种天然蛋白质。 由于蛋白质的组成及性质不同，所以盐析时所需中性盐的浓度也不相同。例如半饱和的硫酸铵沉出球蛋白，饱和的硫酸铵则沉出清蛋白。[操作] 1.取一试管，加入3ml 5%蛋白质溶液及3ml饱和硫酸铵溶液，摇匀静止数分钟后观察现象。 2.将试管内容物过滤，加硫酸铵粉末于滤液中，使达饱和状态，摇匀后观察现象。(注意固体硫酸铵若加到过饱和则有结晶析出，勿与蛋白质沉淀混淆。)3.取上项浑浊液1ml，加水2ml，观察是否复容。 二. 乙醇沉淀蛋白质 [原理] 乙醇是脱水剂，可与蛋白质争夺水化膜;此外，加入乙醇可使水的介电常数变小，蛋白质解离度降低，带电量减少。故加入乙醇能破坏蛋白质的胶体性质而使蛋白质沉淀。 用此法在低温下操作可使沉出的蛋白质保持其理化特性及其生物学活性，但室温中乙醇与蛋白质接触较久后，可使之变性，形成不可逆的沉淀。[操作] 1. 取试管4支，标出1、2、3、4号码，按下表操作 试剂 5%蛋白质溶液(ml) 1%乙酸(滴) 95%乙醇(ml) 1 1 - - 2 1 1-2 - 3 1 - - 4 - - 2 2.将3管及4管置冰水中，放置5分钟，然后将第4管的冰乙醇倒入第3管中(此步最好在冰水中进行)，混匀，同时向第1及第 2管中各加入未冰浴的乙醇2ml混匀，观察各管的沉淀情况并立即向第1、2及3管中各加入蒸馏水10ml，混匀，比较各管变化并解释之。 三. 重金属盐沉淀蛋白 [原理] 在溶液的PH值大于蛋白质的等电点时，带负电荷的蛋白质与重金属离子(Ca2+、Hg2+、Ag1+、Pb2+等)结合成盐而沉淀。[操作] 取试管4支，按下表操作。 试剂 (滴) 5%蛋白质溶液 1%乙酸10g/L硫酸铜 30g/L硝酸银 1 5 - 3 - 2 5 - - 3 3 5 10 3 - 4 5 10 - 3 混合均匀，比较各管浑浊程度并解释之。 四. 生物碱试剂沉淀蛋白 [原理] 能沉淀生物碱(或植物碱)或与其产生颜色反应的物质称为生物碱试剂，如鞣酸、苦味酸、磷钨酸等。 在溶液的PH值小于蛋白质的等电点时，带正电荷的蛋白质与生物碱试剂的负离子结合成盐而沉淀。 [操作] 取试管3支，按下表操作。 试 剂 5%蛋白质溶液(ml) 1% 乙酸(滴) 苦味酸溶液(滴) 鞣酸溶液(滴) 三氯乙酸溶液(滴) 1 1 10 数滴 - - 2 1 10 - 数滴 - 3 1 10 - - 数滴 混合均匀，比较各管浑浊程度并解释之。 五. 蛋白质的加热凝固 [原理] 蛋白质在其等电点附近加热，即发生变性凝固，在加热过程中，随着蛋白质变性作用的深化，使已变性的蛋白质分子间凝聚成凝胶状的蛋白块。但应注意，当蛋白质溶液远离等电点而带有很多同种电荷时，加热虽可使其变性，但因同种电荷的排斥作用并不发生凝固现象。 [操作] 取试管4支，按下表操作 试 剂 5%蛋白质溶液(ml) 1%乙酸(滴) 10%乙酸(ml) 100g/LNaOH(ml) 1 2 - - - 2 2 1-2 - - 3 2 - 0.5 - 4 2 - - 0.5 混匀后各管分别加热，观察有否沉淀析出及沉淀析出的多少、快慢并解释之。。另外在第2管加热蛋白沉出后再加入5ml蒸馏水，观察是否复溶，为什麽,[试剂] 1(5%蛋白溶液:取出鸡蛋清用蒸馏水稀释5倍，搅匀后用纱布过滤。2(饱和硫酸铵溶液。3(硫酸铵结晶粉末。4(95%乙醇。 5(1%乙酸和10%乙酸。 6(30g/L硝酸银溶液。7(10g/L硫酸铜溶液。 8(100g/L氢氧化钠溶液。 9(苦味酸饱和溶液及鞣酸饱和溶液。 10(100g/L三氯乙酸溶液。 (李素婷) 实验三 微量凯氏定氮法 [原理] 蛋白质样品与浓硫酸共热时，分解出氮、二氧化碳和水，而氮转变为氨，氨与硫酸结合生成硫酸铵，再与纳氏试剂显色，与 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 液比较，可求其含氮量。如测血清蛋白，可将总氮量减去非蛋白氮量，再乘以6.25即得蛋白质量。 [操作] 1(取血清或血浆0.2ml，以0.9%NaCl溶液稀释至10ml(稀释50倍) 2(取消化管1支，加入稀释血清0.5ml，50%硫酸0.5ml, 玻璃珠1枚，在电炉上消化。 3(当出现白雾并充满消化管时，消化管口加玻盖，再继续消化3分钟左右，冷却，加3%H2O21~2滴，再消化至出现白雾，加盖，继续消化至无色透明，完全冷却后加蒸馏水至17.5ml，再加纳氏试剂至25ml，混匀，与标准管比色。 4(标准管制备:取硫酸铵标准液(应用液)制备标准曲线，以蒸馏水作空白调零，500nm波长比色。 5(标准曲线制备:取硫酸铵标准液(应用液)制备标准曲线，取5支干净试管操作如下 试 剂(ml) 标准硫酸铵应用液 18N H2SO4 蒸馏水 1 - 0.1 3.4 2 0.8 0.1 2.6 3 1.2 0.1 2.2 4 1.6 0.1 1.8 5 2.0 0.1 1.4 混匀，各管加奈氏试剂1.5 ml, 以第1管为空白，用500nm波长比色得各管光密度值，以浓度为横坐标，测得各管光密度为纵坐标，作一标准曲线。 6(测得测定管的光密度值，于标准曲线上查出含氮量。 [计算] 蛋白质g %=含氮量?6.25?100 [试剂] 1(50%硫酸 2. 18N硫酸溶液:取比重1.84的分析纯浓硫酸50毫升慢慢加到50毫升蒸馏水中。 3. 3%H2O2 4. 0.9%NaCl 5. 奈氏试剂: