茶游离氨基酸的测定
茶 游离氨基酸总量测定
文件类别: 作业指导书
文件编号:
撰写单位:
版 本: 第 1 版
发行日期:
机密等级: ? 机密 ? 一般
合计页数: 共 2 页
核准 审核 初审 制订 会审
名称 茶 游离氨基酸总量测定 文件编号: 1 原理
氨基酸在pH8.0的条件下与茚三酮共热，形成紫色络合物，用分光光度法在特定的波长下测定其含量。
2 仪器和用具
分析天平:感量0.0001g。分光光度仪。
3 试剂和溶液
3.1 pH8.0磷酸盐缓冲液:
按《茶 茶多酚测定》中3.2的规定，配制1/15M磷酸氢二钠(3.2.1)和1/15M磷酸二氢钾(3.2.2)溶液。然后取1/15M的磷酸氢二钠溶液95ml和1/15M磷酸二氢钾溶液5ml，混匀。
3.2 2%茚三酮溶液:
称取水合茚三酮(纯度不低于95%) 2g，加50ml水和80mg氯化亚锡(GB 638-78，分析纯)，搅拌均匀。分次加少量水溶解，放在暗处，静置一昼夜，过滤后加水定容至100ml。
3.3 茶氨酸或谷氨酸标准液:
称取100mg茶氨酸或谷氨酸(纯度不低于99%)溶于100ml水中，作为母液。准确吸取5ml母液，加水定容至50ml作为工作液(1ml含茶氨酸或谷氨酸0.1mg)。 4 操作方法
4.1取样方法
按“茶叶原料验收
规范
编程规范下载gsp规范下载钢格栅规范下载警徽规范下载建设厅规范下载
”(文件编号„„„„ )要求进行取样。 4.2试液制备
按《茶 茶多酚测定》中4.2.1试液制备之规定，制备试液。
4.3 测定
准确吸取试液(4.2)0.5ml，注入25ml容量瓶中，加0.5ml水，0.5mlpH 8.0缓冲液(3.1)和0.5ml 2%茚三酮溶液(3.2)，在沸水浴中加热15min。待冷却后加水定容至25ml。放置10min后，用10mm比色杯，在570nm处，以试剂空白溶液作参比，测定吸光度(A)。
生效日期 页 次 1/2 页 序 A
表号:R-0110-002-1A 文件标准用纸
名称 茶 游离氨基酸总量测定 文件编号: 4.4氨基酸定量标准曲线的制作
分别吸取0.0、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0ml氨基酸工作液(3.3)于一组25ml容量瓶中，各加水至4ml、茚三酮溶液(3.2)0.5ml和缓冲液(3.1)2ml，在沸水浴中加热15min，冷却后加水定容至25ml，按4.3的操作测定吸光度(A)。将测得的吸光度与对应的茶氨酸或谷氨酸浓度绘制标准曲线。
参考标准曲线:C=0.1686*A+0.0381
5 结果计算
5.1 计算方法和公式
茶叶中游离氨基酸含量，以干态质量百分率表示，按下式计算:
CB，1000L，1.002游离氨基酸总量(%),，100 M，m
式中: B —— 试样液总质量，g;
L —— 测定用试样量，ml;
M —— 试样量，g;
C —— 根据4.3测定的吸光度从标准曲线上查得的茶氨酸的mg数;
1.002 —— 试样液比重(经验值);
m —— 试样干物质含量百分率，%。
5.2 重复性
同一样品进行两次测定，取两次测定的算术平均值作为结果。测定值之差，不得超过平均值的5%。
备注:本方法参考GB 8314《茶 游离氨基酸总量的测定》。
生效日期 页 次 2/2 页 序 A
表号:R-0110-002-1A 文件标准用纸
浙公网安备 33021202002483