PBS缓冲液的配制方法

PBS缓冲液的配制 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 PBS缓冲液配方 不管是免疫组化，还是细胞培养中，常用到PBS缓冲液，下面是我们实验室的配方，供大家参考。 我们实验室的配方: A液:0.1mol/L磷酸二氢钾: 磷酸二氢钾(KH2PO4，MW136.09)1.361g，加双蒸水至100ml。 B液:0.1mol/L磷酸氢二钠: 酸酸氢二钠(Na2HPO4.2H2O，MW177.99)1.78g，加双蒸水至100ml。 或者酸酸氢二钠(Na2HPO4.12H2O，MW358.14)3.58g，加双蒸水至100ml。 pH ,, A液 (ml) ,, B液(ml) 5.60 ,, 9.50 ,, 0.25 5.91 ,, 9.00 ,, 1.00 6.24 ,, 8.00 ,, 2.00 6.47 ,, 7.00 ,, 3.00 6.64 ,, 6.00 ,, 4.00 6.81 ,, 5.00 ,, 5.00 6.98 ,, 4.00 ,, 6.00 7.17 ,, 3.00 ,, 7.00 7.38 ,, 2.00 ,, 8.00 7.73 ,, 1.00 ,, 9.00 8.04 ,, 0.50 ,, 9.50 一般免疫组化用PBS都只包含Na2HPO4•12H2O(磷酸氢二钠) NaH2PO4•2H2O(磷酸二氢钠)Nacl 用于细胞培养的PBS需含有氯化钾 称取8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,溶于800ml蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至7.4，最后加蒸馏水定容至1L即可0.01M PBS缓冲液 称取NaCl 8g，KCl 0.2g，Na2HPO4•12H2O 3.63g, KH2PO4 0.24g，溶于900ml双蒸水中，用盐酸调pH值至7.4，加水定容至1L，常温保存备用。 PBS是最普遍不过的实验室缓冲液，但其配方各异。以下是我的总结: 母液的配制: 0.2M Na2HPO4:称取 71.6g Na2HPO4-12H2O，溶于 1000ml 水 0.2M NaH2PO4:称取 31.2g NaH2PO4-2H2O，溶于1000ml 水 各种浓度PB(pH=7.4)的配制: 先配 0.2M PB (pH=7.4，100ml):取19ml 0.2mol/L的 NaH2PO4， 81ml 0.2mol/L 的 Na2HPO4, 即可。 然后 只需将0.2M PB (pH=7.4)按相应比例适当稀释 即可，如: 0.1M PB(PH=7.4) :取 500ml 0.2M PB，加水稀释至 1000ml 即可。 0.01M PB (PH=7.4):取50ml 0.2M PB，加水稀释至 1000ml 即可。 0.02M PB (PH=7.4):取100ml 0.2 M PB，加水稀释至 1000ml 即可。 若需要 NaCL 的话，加入 NaCL 至0.9%(g/100ml)即可。 另:其它各种另 PH值的 0.2M PB(100ml)配方 : pH 0.2M NaH2PO4(ml) 0.2M Na2HPO4(ml) 5.7 93.5 6.5 5.8 92 8 5.9 90 10 6.0 87.7 12.3 6.1 85 15 6.2 81.5 18.5 6.3 77.5 22.5 6.4 73.5 26.5 6.5 68.5 31.5 6.6 62.5 37.5 6.7 56.5 43.5 6.8 51 49 6.9 45 55 7.0 38 62 7.1 33 67 7.2 28 72 7.3 23 77 7.4 19ml 81ml 7.5 16 84 7.6 13 87 7.7 10.5 0.5 7.8 8.5 91.5 7.9 7 93 8.0 5.3 94.7 磷酸盐缓冲液(Phosphate Buffer, PB)，磷酸氢二钠和磷酸二氢钠缓冲 液配方 磷酸盐缓冲液(Phosphate Buffer, PB) 试剂: NaH2PO4?2H2O Na2HPO4?12H2O 配制方法:配制时，常先配制0.2mol/L的 NaH2PO4和0.2mol/L的 Na2HPO4，两者按一定比例混合即成0.2mol/L的磷酸盐缓冲液(PB)， 根据需要可配制不同浓度的PB和PBS。 (1)0.2mol/L的 Na2HPO4;称取Na2HPO4.12H2O 31.2g(或 NaH2PO4?H2O 27.6g)加重蒸水至1000ml溶解。 (2)0.2mol/L的 Na2HPO4:称取NaHPO4.?12H2O 71.632g(或 Na2HPO4?7H2O 53.6g或 Na2HPO4?2H2O 35.6g)加重蒸水至1000ml 溶解。 (3)0.2mol/L pH7.4的PB的配制:取19ml 0.2mol/L的 NaH2PO4 和81ml 0.2mol/L的 Na2HPO4?12H2O,充分混合即为0.2mol/L的PB (pH约为7.4,7.5)。若pH偏高或偏低，可通过改变二者的比例来 加以调整，室温保存即可。 0.2mol/L磷酸盐缓冲液(pH5.7,8.0) pH 0.2mol/L NaH2PO4(ml) 0.2mol/L Na2HPO4(ml) 5.7 93.5 6.5 5.8 92.0 8.0 5.9 90.0 10.0 6.0 87.7 12.3 6.1 85.0 15.0 6.2 81.5 18.5 6.3 77.5 22.5 6.4 73.5 26.5 6.5 68.5 31.5 6.6 62.5 37.5 6.7 56.5 43.5 6.8 51.0 49.0 6.9 45.0 55.0 7.0 39.0 61.0 7.1 33.0 67.0 7.2 28.0 72.0 7.3 23.0 67.0 7.4 19.0 81.0 7.5 16.0 84.0 7.6 13.0 87.0 7.7 10.5 89.5 7.8 8.5 91.5 7.9 7.0 93.0 8.0 5.3 94.7 关于磷酸缓冲溶液的知识，我在网上搜索了好多帖子，但是还是不能 确定正确的答案。现在把他们链接过来，希望有高手们参与讨论，我 会把最终的正确解答整理出来，提供给大家。 PBS可以为三种溶液的英文缩写，分别是 1.磷酸盐缓冲溶液(phosphate buffered solution)、 2.磷酸盐缓冲盐水(phosphate buffered saline)及 3.磷酸盐缓冲钠(phosphate buffered sodium)， 其配制方法不同，pH值不同，发挥的生物学作用亦不完全相同。 如无特殊说明，生物学上常用的PBS是中性磷酸盐缓冲溶液(phosp hate buffered solution)。 无钙镁离子磷酸缓冲盐水(PBS) (0.15Mol/L PH 7.2) NaCl 8.0g KCl 0.2g Na2HPO4 1.15g (如为Na2HPO4?12H2O，则为2.89g) KH2PO4 0.2g 将上述试剂依次溶于1 000ml去离子水中，完全溶解后，115?高压灭菌10min~15min，存在4?冰箱中备用。此液可用于配制和稀释细胞分散剂以及洗涤细胞培养物。 我们用的都是第二种 问题1:磷酸盐缓冲盐水(phosphate buffered sodium)，为什么用第三种或第一种呢: 这么多年以来我都以为PBS就是磷酸盐缓冲溶液，其他两种说法的英语名称常见到，不过我一直都以为他们是差不多的东西。不同的汉语翻译倒是第一次听说。 我们公司用的PBS有很多种，抗体组用的中和PBS配方就比较简单，没有K+离子， 只起到缓冲PH的作用;Na2HPO4+ KH2PO4 按照不同比例混匀，可以得到不同PH的缓冲液，用于不同目的，这个在分子生物学中用得很多; 用于活细胞或者细菌处理的，为了保持渗透压，会加入其他的溶液，最常见的就是NaCl 和 KCl调节 离子浓度。以上是个人的理解，欢迎批评。: 问题2:既然抗体组的PBS是起到缓冲PH的作用，那加入80G的NACL作用是什么,需要平衡渗透压吗,还有加入K离子的是不是因为细胞上NA-K泵的原因啊，血清里面又没有细胞，何来NA-K泵一说啊, 我觉得之所以这么配，其实就是对血清中缓冲环境的一种模拟罢了，血清里面又没有细胞，何来NA-K泵一说啊, 我没说血清撒。。。。。。 我们用的又没加K，我是说加了K的的 问题3:不加NACL会怎么样啊,多省钱啊 在中和磷酸盐缓冲液中，NaCl的主要作用应当是保持一定的离子浓度，以维持抗体的活性。在离子浓度过高或过低的情况下，蛋白质都会变性，抗体当然不例外。 ps:哺乳类需用生理盐水浓度是0.9%。称取0.9克氯化钠，溶解在少量蒸馏水中，稀释到100毫升。 鸟类需用的生理盐水浓度是0.75%。称取0.75克氯化钠，溶解后用蒸馏水稀释到100毫升。 两栖类需用的生理盐水浓度是0.65%。称取0.65克氯化钠，溶解后用蒸馏水稀释到100毫升。[/size][/font] 1)4%多聚甲醛固定液:4g多聚甲醛加入双蒸水50mL中，加热至60?，搅拌并加入lmol/L氢氧化钠数滴，直至溶液变清，冷却后用o.lmol/L PBS(pH7.4)加至100mL。 (2)0.lmol/LPBs缓冲液:SL双蒸水中溶入40G氯化钠、1G氯化钾、7.2G磷酸氢二钠、1.2G磷酸二氢钾 (3)4%多聚甲醛溶液:取多聚甲醛40G，加入pBS至1000ml，放入60C水浴锅中，并置于通风橱内，滴入少许NaOH，磁力搅拌器搅拌至溶液澄清，盐酸调整pH值至7.2一7.6，4?保存备用 (4)取脑后，将脑组织入4%多聚甲醛后固定2小时，再入含20%蔗糖的0.1mol/L PB溶液，置于4?直至组织块沉底。选择海马部分，恒冷冰冻切片机冠状位连续切片，片厚30μm，切片共分为六套。