【doc】蟾酥、蟾皮、蟾衣提取物对心肌细胞膜ATP酶的影响

【doc】蟾酥、蟾皮、蟾衣提取物对心肌细胞膜ATP酶的影响 蟾酥、蟾皮、蟾衣提取物对心肌细胞膜ATP 酶的影响 四J1I动物2008年第27卷第3期SichuanJournalofZoologyVo1.27No.32008 蟾酥,蟾皮,蟾衣提取物对心肌细胞膜ATP酶的影响 陈才法,缪进,李景辉,郑维发,邹寿昌 (1.江苏省药用植物生物技术重点实验室,徐州师范大学,江苏徐州221116;2.徐州师范大学生命科学学院) 摘要:用中华大蟾蜍蟾酥,蟾皮,蟾16(脂溶性及水溶性提取物研究其对小鼠心肌细胞膜Na一K一ATP酶,ca"一 ATP酶和Mg一Ca一ATP酶活性影响,同时以华蟾素注射液为对照.结果 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 明:所有提取物均可抑制心肌细胞膜的 上述3种ATP酶活性,其中对Na一K一ATP酶抑制作用较强的有蟾皮脂溶性和蟾酥脂溶性成分,对Ca"一ATP酶和 对Mg一Ca"一ATP酶的影响结果相类似,作用较强的有蟾皮水溶性成分和华蟾素. 关键词:蟾酥;蟾衣;蟾皮;Na一K一ATP酶;Ca"一ATP酶;Mg"一Ca一ATP酶 中图分类号:Q959.6文献标识码:A文章编号:1000—7083(2008)03—0393—03 EffectofExtractionfromToadCake,Toad-cortexandBufonic onATPEnzymeofMyocardiumMembrane CHENCai—fa,MIAOJin,LIJing-hui,ZHENGWei-fa,ZOUShou—chang (1.KeyLaboratoryforBioteehnologyonMedicinalPlantsofJiangsuProvince,XuzhouNor malUniversity,Xuzhou,221l16; 2.CollegeofLifeScience.XuzhouNormalUniversity) Abstract:TheexperimentstudiedtheinfluenceontheactivityofNa一K一ATPase,Ca一ATPaseandMg一Ca一 ATPaseinmyocardiummembraneofthemousebytheextractsoftoadcake,toad—cortexandtoad—ecdysis,inthemeantime cinobufaginwasappliedascontro1.Theresultsindicatedthatallextractscouldrepressthecar diacmusclecellmembraneof above—mentionedthreespeciesATPenzymaticactivities.Theliposolubleextractsoftoadcakeandto ad—cortexhadstronger inhibitionactionofNa一K一ATPasethanotherextracts.TheinfluenceeffectsoftheCa一ATPaseandMg一Ca一ATPase weresimilar.Theactionofwatersolubleoftoad—cortexandcinobufaginrevealedstrongerthanthatofotherextracts. Keywords:toadcake;toad—cortex;toad—ecdysis;Na一K一ATPase;Ca一ATPase;Mg一Ca一ATPase 蟾酥在我国中药史上使用悠久,主要功能为攻 毒消肿,通窍止痛,强心利尿等.蟾皮的提取物和蟾 酥具有相同功效(金向群,1989).而蟾衣(蟾蜍的 蜕皮)的药理和成分研究尚未报道.现代药理学研 究表明蟾酥,蟾皮具有强心作用,而其作用机理可能 和脂溶性成分所具有的抑制Na一K一ATP酶的活性 有关(薛开先,1974;金向群,1989),但蟾酥,蟾皮对 心肌细胞膜Ca"一ATP酶,Ca.Mg一ATP酶的活性 是否影响未有报道.为了给蟾酥,蟾皮用于强心和 治疗心衰是用脂溶性成分还是用水溶性成分提供更 合适参考,另外考虑到蟾衣药理作用的研究将有助 于蟾衣资源的开发和利用,本实验就蟾酥,蟾皮,蟾 衣脂溶性,水溶性两类提取物对小鼠心肌细胞膜 Na+-K-ATP酶,Ca"-ATP酶,Ca"一Mg"一ATP酶活 性的影响作进一步研究. 1材料与方法 1.1材料 健康小鼠ICR80只(徐州医学院实验动物中心 提供,动物合格证:苏动200402),体重18,30g,性 别不限,随机分为生理盐水组,华蟾素组,蟾酥,蟾 皮,蟾衣的水溶性,脂溶性组,共8组,每组10只. 蟾酥,蟾皮,蟾衣水溶性脂溶性药品均为本室制备. 华蟾素注射液购自安徽金蟾生化股份有限公司(批 号010903),ATP酶测定试剂盒由南京建成生物制 剂厂提供. 1.2仪器 索氏提取器,冷冻高速离心机(上海安亭, TGL16GC),多模式测读分析仪(SpectralMAXM2), 超级恒温水浴(重庆实验设备厂),冷冻干燥机(美 国产,FD一3),RE一52旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪 器厂). 1.3方法 将自制的蟾酥,蟾衣,蟾皮冷冻干燥后,粉碎,称 重,用索氏抽取器,氯仿提取48h以上,抽取液浓 缩,按相当于生药0.25g/ml的量,用吐温一80乳化 配成脂溶性注射液,将抽取后的蟾酥,蟾皮,蟾衣用 乙醇溶液浸泡1周以上,浸出液蒸干,亦按相当于生 收稿日期:2007—05—23基金项目:江苏省自然科学基金项目(No.99KJB360009) 作者简介:陈才法(1963,),男,副教授,主要从事天然产物药理与毒理,E— mail:xsdccf@yahoo.(:ore.cn 393 四川动物2008年第27卷第3期SichuanJournalofZoologyVo1.27No.32008 药0.25g/ml,用生理盐水配成水溶性注射液,用以 上6组注射液,按小鼠0.2ml/10g体重,连续7天 腹腔注射,在最后一天注射20rain后,击晕杀死动 物取出心脏.同期,设华蟾素对照组(相当于0.05 g/10g体重)和生理盐水作对照. 取小鼠心脏心室肌,制备10%组织匀浆,用冷 冻高速离心方法提取心肌细胞膜(Wolffeta1., 1989),用ATP酶试剂盒分别测定以上各组细胞膜 的Na.K一ATP酶,Ca".ATP酶和Ca"一Mg"一ATP 酶量,用考马氏亮兰试剂测定提取液蛋白含量,计算 各组每个ATP酶比活,单位m0lPi/mgPmt//h0ur,所 得数据用SPSS10软件统计检验. 2结果 2.1蟾衣,蟾皮,蟾酥的水溶性成分和脂溶性成分 对心肌细胞膜上Na-K-ATP酶的影响 结果见图1.除了蟾衣水溶性和脂溶性组分对 Na.K.ATP酶作用不明显外,其它检测组分均对 Na.K一ATP酶有明显抑制作用,尤其是蟾酥脂溶 性,蟾皮脂溶性和华蟾素3种组分作用更为显着,与 对照组相比其抑制率(计算方法为:抑制率=100× (对照组一样品组)/对照组,下同)分别达54%, 44%和34% 图1各种成分对NaK+_ATP酶活性的影响 1.对照组,2.华蟾素组,3.蟾酥水溶液组.4.蟾酥脂溶性 组,5.蟾皮水溶液组,6.蟾皮脂溶性组,7.蟾衣水溶液 组,8.蟾衣脂溶性组 每组动物例数均为l0,"表示与正常组对照比较P<0.叭, 表示与正常组对照比较P<0.05 2.2蟾皮,蟾酥,蟾衣各自的水溶性成分和脂溶性 成分对心肌细胞膜上Ca"-ATP酶的影响 结果见表1.从表中可以看出除了蟾衣脂溶性 成分无抑制作用外,所有检测组分均对心肌细胞膜 Ca一ATP酶活性有明显抑制作用,其中抑制作用最 强的是华蟾素,蟾皮水溶液组,蟾酥水溶液组和蟾酥 脂溶性组,其抑制率均超过了50%. 2I3蟾衣,蟾皮,蟾酥各自的水溶性成分和脂溶性 394 成分对心肌细胞膜上Ca"-Mg".ATP酶的影响 结果见图2.从图中可以看出蟾蜍各组分对心 肌细胞膜Ca?一Mg".ATP酶的活性影响与对Ca. ATP酶的活性影响结果十分相似,抑制作用最强的 也是华蟾素和蟾皮水溶液组,其抑制率均大于 60%. 表1蟾衣蟾皮蟾酥水溶性和脂溶性成分对心肌 细胞膜Ca-ATP酶的影响 单位为IxmolPi/mgProt/hour;一表示与正常对照组比较P<0.【)1 l2}34}5}6}7}8 蟾衣,蟾皮,蟾酥水溶性和脂溶性成分对心肌细胞膜 Ca-Mg-ATP酶的影响 1.对照组,2.华蟾素组,3.蟾酥水溶液组,4.蟾酥脂溶性 组,5.蟾皮水溶液组,6.蟾皮脂溶性组,7.蟾衣水溶液 组,8.蟾衣脂溶性组 每组动物例数均为10,.表示与正常组对照比较P<0.0l 3讨论 心肌细胞膜Na一K一ATP酶主要用于心肌细胞 兴奋后Na,K的恢复,帮助K离子由细胞膜外进 入细胞膜内,Na离子从细胞内出细胞膜外,Na一 K一ATP酶活性下降会使细胞膜外的K离子浓度 轻度升高,从而使心肌更容易兴奋,表现强心作用 (周衍椒,张镜如,1978),这也是目前认为蟾酥具有 强心能力的主要机理(金向群,1989).据研究表明, 蟾酥配基加强心肌收缩力强心甙样作用,即抑制心 肌细胞膜的Na一K.ATP酶所致(钮亚珍,薛平贵, 2002).Ca"一ATP酶和Ca"一Mg"一ATP酶的主要作 用是促进Ca?在心肌收缩后由细胞膜内移出细胞 膜外,这2种酶活性下降后,可以升高细胞内ca 8765432】O 一Ll\0矗;一\一I10一厂1,一'|< 8642O8642O (_,_】0/II10v.一藿《 四川动物2008年第27卷第3期SichuanJourn~ofZoologyVo1.27No.32008 浓度,在引起心肌细胞收缩力加强的同时,也可引起 细胞内Cah超载,诱发细胞凋亡,这是目前认为蟾 蜍提取物有抗肿瘤作用的主要机理. 蟾酥,蟾皮的化学成分相当复杂,按其溶解性质 的不同可分为脂溶性甾体和水溶性吲哚生物碱两大 部分(杨立宏,2000),目前认为它们的脂溶性成分可 以抑制Na.K.ATP酶的活性(金向群,1989;孙建 华,1997),而它们的水溶性成分则认为对麻醉犬正 常心脏有类似于洋地黄类药物的作用(吴建东等, 1997),但没有关于对Ca".ATP酶和Ca"一Mg". ATP酶影响的报道,仅见赵明芳等(2007)报道华蟾 素可抑制小鼠肝癌细胞Mg"一ATP酶活性.蟾衣作 为蟾蜍的蜕皮目前研究几乎为空白,经缪细泉等 (2000)初步研究认为,蟾衣有蟾酥的主要成分,具有 和蟾酥相同的药用价值. 本实验结果表明,蟾蜍各种成分的水溶性和脂 溶性组分均可以抑制Na一K一ATP酶,Ca"一ATP酶 和Ca.Mg.ATP酶的活性,但同时作用特点略有 不同,脂溶性成分对Na一K一ATP酶抑制作用略强 于水溶性成分,这和以往金向群(1989)报道相一 致;在对Ca"一ATP酶和Ca"一Mg"一ATP酶的抑制能 力,又以水溶性成分作用略强.这提示我们在使用 蟾蜍制品时,用于强心治疗可首选脂溶性组分,而用 于抗肿瘤及诱导细胞凋亡以用水提物较合理.蟾衣 作为蟾蜍的脱皮,其脂溶性成分几乎无任何作用,而 其水溶性组分有部分与蟾酥有相同作用,具有一定 的开发价值. 4参考文献 金向群.1989.蟾蜍化学及药理研究的发展[J].沈阳药学院,6 (3):204,211. 缪细泉,吴赵云,李智,等.2000.药用动物中华大蟾蜍蜕皮的观察 [J].湖北农学院,20(4):330,331. 钮亚珍,薛平贵.2002.蟾酥的药理作用研究进展[J].张家口医学 院,l9(3):58,59. 孙建华.1997.澳洲蟾蜍脂溶性提取物对肿瘤细胞的作用[J].天津 师大,l7(4):33,39. 吴建东,陈洪江,郭密娟.1997.华蟾素对麻醉犬正常心脏血流动力 学影响的初步观察[J].徐州医学院,l7(3):284,286. 薛开先.1974.关于蟾蜍的实验研究与临床应用的综述[J].新医药 学杂志,(1):39,44. 杨立宏.2000.中华大蟾蜍化学成分的研究[J].沈阳药科大学学 报,l7(4):292,295. 赵明芳,王哲,魏龙春,等.2007.华蟾素对H22荷瘤小鼠肝细胞 Mg"一ATP酶,葡萄糖_6一磷酸酶活性的影响[J].山东医药,47 (4):25,26. 周衍椒,张镜如.1978.生理学(第二版)[M].北京:人民卫生出版 社:121,122., WolffAA,HinesDK,KarlinerTS.1989.Refinedmembranepreparations maskischemicfallinmyocardial8一receptordensity[J].AmJPhysi— ol,257:H1032. 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