null免疫血清的制备 免疫血清的制备 目的要求目的要求熟悉免疫血清制备的过程
了解动物实验的基本知识
原理原理 将抗原物质经适当途径,按照预先制定的免疫
方案
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免疫动物,经过一定时间,可刺激机体产生特异抗体并释放入血液,当血中抗体达到一定效价时采血,分离血清,即为特异性免疫血清(又称为抗血清)。因抗原具有多种
表
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位,可激活多个克隆的B细胞活化产生抗体,因此,这种免疫血清又称为多克隆抗体。
本实验以绵羊红细胞(SRBC)作为免疫原,以家兔为免疫动物,制备兔抗养红细胞免疫血清(也称为溶血素)原理原理适当的途径、方法一定时间原理原理优质免疫血清的产生主要取决于:
(一 )、抗原的纯度和免疫原性
(二 )、动物应答的能力以及免疫程序
免疫程序免疫程序影响因素 :免疫途径、抗原剂量、注射次数、时间间隔、有无佐剂等因素。适当的途径、方法一定时间材料材料1.动物 健康成年家兔,雄性,体重2-3kg;健康成年绵羊。
2.试剂 生理盐水、碘酒、75%酒精。
3.器材 剪刀、镊子、无菌注射器、量筒、无菌毛细滴管、无菌试管、离心管、三角烧瓶(200ml)、动物固定架、手术器械一套、塑料放血管等。null阿氏液(Alsever's Solution)
阿氏液是一种红细胞保存液,含有抗凝剂柠檬酸钠和细胞需要的养分葡萄糖。
阿氏液配方如下: 葡萄糖 2.05克 柠檬酸钠 0.8克 柠檬酸 0.055克 氯化钠 0.42克 加蒸馏水至100毫升,加热溶解后将pH值调到6.1,高压灭菌,放置在4℃备用。 方法
兔抗羊红细胞免疫血清(溶血素)的制备方法
兔抗羊红细胞免疫血清(溶血素)的制备1.抗原制备
(1)用碘酒和75% 消毒绵羊皮肤,抽取颈静脉血液,注入含有等量阿氏液的三角烧瓶内,混匀。阿氏液既有抗凝作用,又适于储存SRBC。分装后置4℃冰箱内,可使用3周。
(2)无菌取上述绵羊血于离心管中,用无菌生理盐水洗涤红细胞,2000r/min,离心5min,吸弃上清液和白细胞层,再用无菌生理盐水与SRBC混匀, 2000r/min,离心5min,重复3次。最后一次离心10min,以使血细胞沉积于管底,弃去上清液。
(3)根据红细胞积压,用生理盐水配成20%SRBC悬液。null2.免疫动物
(1)全班分为4组,每组选择健康雄性兔1只,用于免疫。
(2)用全血和SRBC悬液按下述方案免疫兔子。免疫日期 第1天 第3天 第5天 第7天 第12天 第15天注射途径 皮内 皮内 皮内 皮内 耳静脉 耳静脉
免疫原 全血 全血 全血 全血 20%悬液 20%悬液
剂量(ml) 0.5 1.0 2.0 1.0 1.0 2.0null(3)试血
末次注射后第7天,耳静脉采血1ml ,分离血清,用试管凝集试验滴定效价。(1:2000以上可用)
null3、分离血清
(1) 颈动脉放血(心脏采血)并收集于无菌三角烧瓶中凝固后4℃冰箱过夜,分离上层血清。然后2500r/min离心10min,收集收集上层血清。
(2)收集的血清经鉴定纯化后,小量分装,-20℃冻存。