冰冻切片和石蜡切片之比较

实用医学进修杂志 2003年第3l卷第4期 jot,qUqA1 OF P1L~Lq'ICAL IT~AINING OF MEDICINE Vo|．31 No．4 ． xB 冰冻切片和石蜡切片之比较 李红军 三峡大学 医学院 解剖学教研室 (宜昌 443003) 多年来 ，人们一致认 为石蜡切片是组 织学 和科 研标 本制 作 的常规 方 法。冰冻 切片一般 只用 于组 织 学研 究 和病理外 科 检查诊 断 ，很 少 用 于 组 织 学 教 学 片 的制 作。近年来 我们 在研究 生 的组 织学 教学 和科研制片中少用石蜡切 片 ，多用 冰冻切 片 ，发现冰冻切 片 和石蜡 切 片各有 所长 ， 在有些 方 面甚 至优 于石蜡 切 片。现 把两 者从方 法 到结 果进 行 比较 ，供 同仁们 参 考 。 1 材料与方法 1．1 材料 动物 和人 死 后 2h的 材 料 均 可 供 取 材。石蜡 切 片所 取 材 料 一般 应 限制 在 3 mm～5 mm以内，冰冻切 片组织 块一般 小 于 2 cm ×2 cm×2 cm。 1．2 方 法 应用冰冻切 片的材料取好后 ，用蒸馏 水 冲洗干净 ，直接冷冻于恒 冷箱内的组织 托 上 ，根 据 材 料 的 不 同 将 温 度 调 至 一2Oc【=～25 c【=之间 ，1 5 min左 右材料就 可冻硬进行 切片。如果组织块较 大 ，不加 任何包埋剂 ，组 织块 小于 0．5 cm，应 用包 埋剂包埋 ，包埋剂常用庶糖 、浆糊 、水等视 材料不同而宜 ，以防切片和贴 片困难 。如 果组织 块较 薄 ，又 需 沿 组 织 块 长轴 切片 时 ，可在组织块下面衬垫一层其它组织或 加一定厚 度的包埋 剂。如果 12 h不 能完 成全部切片内容 ，不论组织块大小均应用 包埋剂包埋 。为使组织基 部牢固，在组织 和组织托接 触处 的周 边加 少许 水。切好 的组织片贴于载玻片上干燥 10～20 mim， · 255· 直接进人苏木素 染色 3～4 S，盐酸酒精分 色 1～2 S，伊 红 染 色 1～2 S，经 70％ ～ 1 00％酒精 、二 甲苯 透 明 同石 蜡 切 片 川。 而石蜡切片从取材到染色封 片，要 经过固 定 、冲洗 、脱水 、(从 7O％一8O％一95％一 95％一l 00％一 100％酒精脱 水 1～2 h)、 透明 、浸蜡 、包埋 、切片 、贴片 、烤片 、脱蜡 、 复水 、染色 、脱水 、透明 、封片。 2 结 果 与讨 论 我们把 石蜡 切 片和恒 冷 切 片进行 对 比观察 ，结果如下 ： 2．1 恒冷 切 片 2．1．1 优点 ① 步骤 少 、需 时短。从 取 材到完成切片制作 ，由石蜡切 片的几 十个 小时减少到十几秒 ；② 由于冰冻切片是把 组织块快速冷冻 ，短期 内切其全部组 织 内 容 ，几乎不存 在脱 水 现象⋯ 。因此 ，所 见 细胞 比石蜡切片的镜下结果大 ，细胞 间隙 明显增宽 ，可清楚 的反应 细胞 间的相互关 系 ，更能反应组织 的活体状态。尤其是组 织 内的脂 类及一些 酶能很好地保存下来 ， 对显示神 经 系统 的某 些微 细结 构效 果更 好 ；③节 省试剂 ：可 省 出固定 剂 、石蜡 、和 大量 的二 甲苯 和酒精 ，既节约资金又减少 对人体危害；④取材较大：一般 比石腊包 埋 用的组织 大 4～5倍 ，保 留 了结构 的完 整性 ；⑤容易定位 。 2．1．2 不足之处 ①冰冻切片机价值昂 贵，一般单位不易购买；②切片较厚 ，制作 连续 切片麻 烦 ，不易切 出骨组 织 ；③所 切 组 织块 不易长期保存 ，在不加 包埋 剂的情 况 下，组织块容易脱水冻干。 维普资讯 http://www.cqvip.com · 256· 实用 医学进 修 杂志 2003年 第 3I巷 第 4期 JOUT~NM OF PI~A(rl’ICAI TI~MNqN(；OF MEDICINE Vo1．31 N(，．4 Ih ’．2(n3 2．2 石 腊 切 片 2．2．I 优点 ①此 方 法操 作简 便，虽较 费时 ，但 便于 大量制 作连 续切 片标本 ，特 别使 人感到满意的是能切 出极薄 的切片 ， 骨组织更为适用 ；②经过石腊包埋 的组织 可长期保 存 ，反 复切片 观察 ，节 约 了原 材 料 ；③在切片过程 中能充分地 自由安排 时 间 ，不像 冰 冻 切 片必 须 在 规定 时 间 内切 完。由于有 以上优点 ，目前本 科教学 中还 是以石腊切片为主 。 2．2．2 缺点 ① 步骤 多而结果慢 。从取 材到封 片要 经过 20多 个步骤 ，几 十个 小 时才能 出结 果 ；② 在 固定 、脱 水 、透 明、浸 腊过程 中，组 织块 严重 脱水 收缩 ，改变 了 组织 内部 的形态 和位 置 ，细胞 变小 ，细胞 间隙变窄 明显 ，细胞之间 的一些稀少细胞 如心肌 内的间充质细胞 、肝脏 内的枯 否细 胞等不易辨认 ，而 冰冻切片则改变 了这一 问题 ，使之清晰可见。实 际上显微镜下 所 见到 的结构 已不 能完 全反应 各种 组织 的 活体状态。 目前 ，不少 书上记载 的组织 和 细胞 的大小 都是 在石蜡 切 片下 的测量 结 果。虽然 我们 没有对 两种 切片 的镜 下结 果作定量 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 ，但 大量 的 切片观察已经得 出结论 ；石蜡切片的结果不 能确 切证明活 体情况 ，不宜进 行组织学研究 和研究 生教 学 ；③ 为了防止组织块在 固定 、脱水 、浸腊 等不彻底 ，不得 不将 研究 对象 分割取 材 ． 结果破 坏 了结 构 的完 整性 ，导 致 在包 埋 时 ，不易对组织 块定 位 ，尤 其是 较 差的组 织 ；④所需设 备 相对 较 多，消耗 化学 试 剂 多 ，且不少试剂(如二 甲苯 、甲醛 、乙醇等) 均对人体皮肤 、粘膜有害。给组织标本 制 作带来诸多不便 。 综上所 述 ，可 以看 出 ，石 腊 切片和 冰 冻切片各有长 短之 处 ，使 用 得 当，两者 可 以互补。随着 人们对 冰 冻切 片 的认识 不 断深人 ，冰冻切片将更广泛地在教学和科 研 中应用 。发挥越来越大的作用 。 参考文献 I 杜桌民 ．实用组织 学技术[M]．北京：人 民TJ生出版 社，1981：60 健心“八戒” (2003—09—29 收稿 ) 美国哈佛大学的一些学者用了 4O年的时间调查 ，在 2I岁和 46岁之间 ，过着舒畅精神生活的 59人中 ， 只有 2人在 53岁时得了重病 ，其 中 1人死亡。而在同一时期 内，得不到舒畅精神生活 的 48人中 ，都在 55 岁前死去。鉴此 ，华东师范大学谭惟翰教授提出养生“八戒”，也许会对你有所启示 。 一 戒疑 ：疑心病者 ，总 以为别人在暗算 自己，一言一行都得提防，因此坐立不安，经常失眠 ；二戒妒 ：妒忌 别人的成就 ，不考虑怎样 奋起猛追 ，却希望别人栽跟头；三戒卑 ：觉得 自己处处不及旁人 ，在人前仿佛矮三 分。不喜欢和人共事 ，愈来愈孤僻 ，越来越古怪 ；四戒傲 ：自以为是 ，老子天下第一。周 围的人对 他敬 而远 之 ，他却 自呜得意。生活空虚，无所寄托，缺少乐趣；五戒躁 ：容易发脾气 ，脸红脖 子粗或吵或 闹，甚至骂人 、 打人、毁坏物件，然后心理上得到一种莫名其妙的满足；六戒愁：整天生活在忧虑之中，愁容满面，心事重重； 七戒慎 ：时时提心吊胆 ，怕说错话 ，怕做错事 ，怕得罪人 ；八戒悲 ：一生 当中，一些不幸 的事常常 浮现在眼前 ， 不觉悲亦从中来。 (耿志国 摘自《健康报》J 维普资讯 http://www.cqvip.com