大鼠脑外伤后BDNF的表达及其死后稳定性的研究

重庆医科大学学报 2009年第 34卷第 l1期 (Joumal of Chongqing Medical University 2009．Vo1．34 No．11) 一 1 521 一 Il基衙研究 文章编号：0253—3626(2009)11-1521一-03 大鼠脑外伤后BDNF的表达及其死后稳定性的研究 王 敏 ，邓世雄 (重庆医科大学基础医学院法医学教研室，重庆 400016) 【摘 要】目的：探讨脑外伤后脑源性神经营养因子(Brain derived neurotrophical factor，BDNF)表达的变化和损伤时间的关系及 其死后稳定性。方法：将健康 sD大鼠 105只，随机分成 4组：正常组 、假手术组、脑外伤组、死后稳定性组。采用重物砸伤脑组织 建立脑外伤模型(创伤组、稳定性组)，运用免疫组化和图像分析技术，检测各组 BDNF的表达变化规律。结果：与正常组 、假手 术组比较，损伤后 0．5 h，BDNF的免疫反应阳性细胞在损伤区周围增多 ，损伤后 6 h BDNF阳性细胞数达高峰，以后逐渐下降， 24 h后降至接近正常；死后稳定性组各时间点 BDNF表达无显著性差异(尸>0．05)。结论：脑外伤后 BDNF表达与损伤时间具 有相关性 ；在 一．20~C条件下，死后稳定性好。 【关键词】法医病理学；免疫组织化学；脑外伤；脑源性神经营养因子；死后稳定性 【中国图 书 关于书的成语关于读书的排比句社区图书漂流公约怎么写关于读书的小报汉书pdf 分类法分类号】R892 【文献标识码】A 【收稿日期】2008—04—22 Study on expression and postmortem stability of BDNF after traumatic brain lnIUrV In rat WAⅣG Min，et al (Department of Forensic Medicine，College of日 c Medicine，Chongqing Medical University) 【Abstract]Objective：To investigate the expression of BDNF after traumatic brain injury and postmortem stability Methods：105 healthy SD rats were randomly divided into 4 groups：normal group，sham operation group，traumatic brain injury group and postmortem stability group．The model of brain injury were established by weight-drop impact(traumatic brain injury group and postmortem stability group)． After that，the regulation of BDNF expression in each group was detected by immunohistochemistry technique，and evaluated with image analysis technique and statistic system．Results：0．5 hour after impact，the BDNF positive neurons increased in each traumatic brain injury group compared with norm al group and sham group．6 hour after injury，The BDNF positive neurons reached the peak number．Then，the BDNF positive cells reduced to normal after 24 hours．but there was no significant difference in BDNF expression among each subgroups of postmortem stabihty group(P>O．05)．Conclusion：There is dependability between the BDNF expression after traumatic brain injury and brain injury time，and postmortem stability is nice at一20％． 【Key words】Forensic pathology；Immunohistochemistry；Brain injury；Brain derived neurotrophical factor(BDNF)；Postmortem stability 脑损伤在交通事故和其它机械性损伤最为常 见，如何利用比较客观的方法和 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 推断损伤时间 一 直是法医学的一大难题 ，脑源性神经营养因子 (Brain derived neurotrophical factor，BDNF)是 神经 营养因子 中的一种 ，在正常的脑组织 中微量表达 ， 在脑损伤时表达增强，不仅具有神经元保护作用 ， 还可以促进神经细胞的分化和再生，对大脑损伤后 脑功能的恢复起重要作用。目前国内外对 BDNF的 研究多侧重于其对神经损伤的治疗作用，对于内源 作者介绍：王 敏(1972一)，男，硕士， 研究方向：法医病理学。 通讯作者：邓世雄 ，男，教授，E—mail：deng8hixi0ngl963@163．com。 性 BDNF在脑损伤 的不 同时 间的表达 的强弱及死 后稳定性的研究甚少。本文拟运用免疫组化技术对 外伤性脑损伤后 ，BDNF的表达及其死后稳定性作 一 研究，以探讨其在法医学上的意义。 1 材料 关于××同志的政审材料调查表环保先进个人材料国家普通话测试材料农民专业合作社注销四查四问剖析材料 与方法 1．1 动物及 分组 健康sD大鼠105只，体重(240±30)g，雌雄不限(由重 庆医科大学实验动物中心提供)，随机分为正常组(5只)、假 手术组(5只)、脑外伤组(50只)、死后稳定性组(45只)。其 中脑外伤组分为 l0个亚组 ，即伤后 0、0．5、1、2、4、6、8、12、 重 庆 医科大学学报 2009 年第 34 卷第 1 1 期 (J ournalofC hongqing M edicalU niversity2009 ． V 0 1．34 No ． 1 1 ) ． -．． ： 。 ． 0-‘? 0一 ?一 ． 一． “ j：≯．：? j． ， ? + ． ． 。 。 。 ‘ ：． -． 。 ? ‘ 、 ． ． ， 、 ’ ? 。 ， ’ ‘ ’ ? ‘ ? ? ． ? - ’ ． 。 ． ， ， p ． ? ‘ ． ’ ‘ 。 ， ． r ．1 ， ’ ’ ． ． ： 。 ? ‘ 。 ． ， ：7 ． ’ j， 一 。‘ j一 。 一 。：?， ． ? ． ? ： ‘ ． ． ? ‘ ’ ’ ‘ ．- 。 ． 7 ． 。 ? ， ： ． 一 ‘ ． ．一 ● ’ t． 一 ． ．．．． ： ． 一 2 结 果 2． 1 光 镜 下 脑 组 织 H E 染 色显 示 正 常组 和 假手术组 脑组 织结构 清楚 ， 未见 明显 改变 ；损 伤组 大 鼠的损伤区皮质见 局 限性 的楔形挫裂伤区 ， 伴 出血 灶 形成 ， 损伤深 达 皮质的多形细胞层 。 挫裂伤区表面的蛛 网膜 下腔可 见 出血 ；部分细胞 体积 变小 ， 胞浆 和胞 核固缩 ， 嗜碱性 增强 ；部分神 经 元 及 胶 质 细 胞 出现 肿 胀坏 死 、 尼 氏小 体溶 解 ， 胞浆呈伊红 色颗粒状 ， 细胞边界模糊不 清 ， 灰质 中可 见囊 腔 变化 ， 白质 中有脱髓鞘变化 。 死 后 稳定性组 改变同损伤组 。 2． 2 免 疫 组 织 化 学染 色 B D N F 免疫组 织 化学染 色切 片 中 ， 阳性 表达 信号 为棕黄 色 。 正 常组 、 假 手术组 呈 弱 阳性 表达 ， 外 伤性 脑损伤组 伤后 0． 5 h后 出现 阳性 表达 ， 此 后 表达逐 渐增强 ， 至 6 h呈 强 阳性 表达 。 24 h后 基本降至 正 常 ，4 8h组 与 24 h组 B D NF 表达变 化不 大 。 死后稳定性各亚 组 表达情况与伤后 6 h组 相似 。 2． 3 免疫 组 织 化 学染 色图像 分 析与 统 计 学处 理 见 图 1 ～ 4 和表 I 、 2。 3 讨 论 B D N F 作 为 神经 营养 素 中 的 一 员 ， 是 由德 国神 经 化 学 家 B arde 及 其 同事 于 1982 年 首 次从 猪脑 中 分 离 纯 化 出具 有促 进 神经 生 长 活 性 的 一 种 蛋 白质 ， 能通 过 增 强 神经 细胞 的增 殖 、 分 化 和 移行 来 对 抗 脑 损 伤 。 G riesbachG S 等闭在 对 大 鼠冲击性 脑 损伤模 型 研 究 中发 现 ， 大脑 海 马 回 的 B D N F 的表达 量 与损伤 程 度 和 损 伤 时 间具 有 相关 性 。 由此 可 见 ， 外 伤性 脑 损 伤后 ， 可 以 引起 B D N F 表达 的上 调 。 在暴力 性 伤 害 死 亡 案件 中 ， 脑 外 伤 发 生 后 个 体 的存 活 时 间 推 断 ， 对 于 确 定 案 发 时 间 、 鉴 别 生 前 伤 和 死 后 伤 ， 划 定 犯 罪 嫌 疑 人 、 以 及 临 床法 医 活 体 鉴 定 等均具 有 重 要 意义 。 B D N F 主 要 在人 体 中枢神经 系统 中稳 定 表 达 ， 而 且 在 损 伤 发 生 的早 期 ． 其 表 达 就 开 始升 高 。 本 研 究 表 明 ， 大 鼠脑 损伤后 不 同时 间 段 B D N F 阳性 细 胞 的表 达 呈 时 相 性 变 化 ． 外 伤性 脑 损 伤 后 0． 5 h， 即 有 B D N F 阳 性 细 胞 表 达 增 加 ， 这 与 ：0 0 ． ． ：． ■ ．，． ． f ． √：， 一肇：毫：≮≥，!参 ．．_? ⋯ ： ‘ ∥ ‘ j ： ．．r， ‘ ：：：。 。 ：? ’ ” ≤j乏毫囊 ≯ ： f J P ， 一 ． 膏 、 一 ‘ ● 、 一j ’ 。 _ ’ ? ． '． ¨ ， ．二 一 一 ‘ ， ． 0 ．’：一 重庆医科大学学报2009年第 34卷第 11期 (Journal of Chongqing Medical University 2009．Vo1．34 No．11) 一 1523 一 注：各时间相临2组之间阳性细胞数和阳性反应灰度相比均有显著差异(P<0．01)，其中伤后6h组 BDNF阳性细胞数与其它各 时间组相比均有显著差异 表 2 伤后 6 h处死测定死后稳定性各时间段的数据 注：伤后6 h处死后不同时间段BDNF相临两组之间阳性细胞数，阳性反应灰度值和对照组(0 h)相比均无显著性差异(各组 P>0．05) 扬江河13j等的研究相符 ，在伤后 4 h，BDNF阳性细胞 数进一步增多 ，6 h达到高峰，24 h后基本降至正 常．24h与48 h变化不明显。这可能与损伤周围神 经细胞缺血缺氧引起 BDNF表达上调以阻断神经 元凋亡有关N,5]。 参照 GA／T148—1996标准 ，冻存尸体时间最长 不得超过 1周嘲，本实验将外伤性脑损伤 6 h后死 亡大 鼠存放 于一20℃环境 1周 ，以对 BDNF的死后 稳定性进行研究。结果显示 ，死后 6 h至 7 d，各时 间组 BDNF表达强度与死后 即刻 比较元 显著性差 异(P>0．05)，各组间比较也无显著性差异(尸>0．05)。 这表明，在一20~C条件下 ，l周内BDNF表达强度受 时间因素的影响不大，稳定性好。这可能与低温环 境下，各种酶活性处于很低水平，组织 自溶和蛋 白 质降解受到抑制有关。 综上所述，通过本研究可得出：外伤性脑损伤后 BDNF可迅速增量表达，与时间相关，呈一定的规律 性，且 BDNF的表达具有较强的死后稳定性，可作为 2 h以内的颅脑损伤时间推断的一个参考指标。 参 考 文 献 [11 吴 旭，王宝捷 ，张国华 ，等．大鼠脑损伤分级自由落体打击模型 的建立[J1．中国法医学杂志，2005，20(I)：1-3． [2】 Griesbach G S，Hovda D A，Molteni R，et a1．Voluntary exercise fol— lowing traumatic brain injury：bra／n—derived neurotrophic factor upregu- l~ion and recovery offunction[J]．Neuroseience，2004，125(1)：129—139． 【3] 杨江河，章 翔，宋少军，等．犬颅脑损伤后脑组织 BDNF蛋白的 表达及意义【JJ．第四军医大学学报，2003，24(22)：2063—2065． 【4] Tokuoka H，Saito T，Yorifuji H，et a1．Brain derived neurotrophic factor induced phosphorylation of neurofilament H subunit in primary cultures of embryo rat cortical neurons[J]．JCell Sci，2000，113(6)：1059— 1068． [5] Mamounas L A，Altar C A，Blue M E，et a1．BDNF promotes the re— generative sprouting，but not survival，of injured serotonergic axons in the adult rat brain[JlIJ NeuroL Sci，2000，20(2)：77l一782． 【6] GA／T148—1996，法医病理学检材的提取、固定、包装、送检方法 【s1． (责任编辑：冉明会)