氰烯菌酯对禾谷镰孢菌分生孢子萌发的影响

氰烯菌酯对禾谷镰孢菌分生孢子萌发的影响 氰烯菌酯对禾谷镰孢菌分生孢子萌发的影响 ? 陈 雨，周明国南京农业大学农业部病虫监测与治理重点开放实验 室，南京(210095) E-mail: mgzhou@njau.edu.cn 摘 要: 氰烯菌酯(2- 氰基-3- 氨基-3- 苯基丙烯酸乙酯, JS399-19) 是一种对禾谷镰孢菌(Fusarium graminearum)具有专化活性的新型杀菌剂。离体条件下，采用菌丝生长测定法 测定该药剂对禾谷镰孢菌抗性菌株和敏感菌株的生长抑制活性;同时采用孢子萌芽测定法测 定了其对禾谷镰孢菌分生孢子萌芽的影响。结果 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 明，氰烯菌酯能够强烈地抑制禾谷镰孢菌敏感菌株菌丝的生长，EC值分布在0.092~0.141 μg/mL之间;并可降低敏感菌株分生孢子的 50 萌发速率，以及影响其萌发的方式，使芽管从分生孢子基部和中间细胞萌发的比率增加;同 时氰烯菌酯使敏感菌株分生孢子膨大畸形，并使其芽管肿胀、扭曲，明显抑制其芽管的伸长 生长，但对抗性菌株的抑制作用和致畸作用不明显。 关键词: 氰烯菌酯;小麦赤霉病;禾谷镰孢菌;孢子萌发;致畸作用 中图分类号:S482.2 文献标识码:A 禾谷镰孢菌(Fusarium graminearum Schw.)，有性态为玉黍蜀赤霉(Gibberella zeae Petch),是许多植物病害尤其是小麦赤霉病的主要致病菌。小麦赤霉病一直是中国江淮流域， [1]西南冬麦区和东北春麦期最重要的小麦病害之一。目前, 病原菌的抗药性使我国面临着多 [1~6]菌灵等苯并咪唑类杀菌剂防治小麦赤霉病和水稻恶苗病失效的问 题 快递公司问题件快递公司问题件货款处理关于圆的周长面积重点题型关于解方程组的题及答案关于南海问题 ，研究开发其替代药 物势在必行。 氰烯菌酯(2-氰基-3-氨基-3-苯基丙烯酸乙酯，试验号:JS399-19)是由国家南方农药创 制中心江苏基地于1998年合成的一种对镰刀菌具有较高的专化活性的化合物，特别是对禾谷 [7]镰孢菌菌丝生长具有强烈的抑制活性。该产品2001年进入田间示范试验，显示出了防治小 麦赤霉病的良好市场前景。目前已获得中国发明专利，2005年完成农药临时登记，成为具有 自主知识产权的新型杀菌剂。但该药剂对禾谷镰孢菌分生孢子萌发的影响还不明确。作者对 经该药剂处理后的禾谷镰孢菌分生孢子萌发过程中孢子的细胞形态、芽管的伸长及萌发方 式、有无膨大、扭曲等形态毒理学特征进行观察，初步探索了其对孢子萌发过程的影响方式， 旨在为研究该药剂的作用机制提供依据。 1. 材料 关于××同志的政审材料调查表环保先进个人材料国家普通话测试材料农民专业合作社注销四查四问剖析材料 与 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 1. 1 供试材料 菌株:对氰烯菌酯敏感的单孢分离的野生型菌株S1、S2、S3、S7、2021和对氰烯菌酯的 抗性菌株Y2021和Y2021A。敏感菌株在4 μg/mL的氰烯菌酯处理下生长完全受抑制，而抗性 菌株在10 μg/mL氰烯菌酯处理下仍可以生长。 农药:95.5%氰烯菌酯(JS399-19)原药(国家农药创制中心江苏基地提供),以甲醇为溶剂 4 4 分别配成1.0×10μg/mL和4.0×10μg/mL母液备用。 培养基: 马铃薯蔗糖琼脂培养基(PSA)用于菌株的分离、纯化、一般培养与保存。3% [6]绿豆汤培养液用于菌株产生分生孢子。 基金项目:高等学校博士学科点专项科研基金(20050307028)。 - 1 - 1. 2 氰烯菌酯对敏感的和抗性的禾谷镰孢菌菌丝生长的影响 [2]采用菌丝生长速率测定法。分别在含氰烯菌酯0、0.025、0.05、0.10、0.20、0.40、0.80、 1.60 μg/mL的PSA平板上测定氰烯菌酯对敏感菌株的菌丝生长的抑制作用，在含氰烯菌酯0、 25、50、100、200、400、800、1600 μg/mL的PSA平板上测定氰烯菌酯对抗性菌株菌丝生长 的抑制作用，每个处理重复3次，试验重复2次，置于25 ?培养箱培养3 d。根据各浓度处理 下药剂对菌丝生长的抑制率，求出氰烯菌酯在PSA培养基上对抑制菌丝生长的有效中浓度 EC。 50 1. 3 氰烯菌酯对禾谷镰孢菌的分生孢子萌发率的影响 将菌株在 3%绿豆汤培养基中振荡培养 7 d(25 ?、光照 12 h/d、150 r/min),在无菌条 件下，用灭菌纱布滤去菌丝，将滤液在 4000 r/min 下离心 10 min，去除上清液，将分生孢子 5 重新悬浮于灭菌的去离子水中，调节孢子浓度至 10个/mL 制备成孢子悬浮液，吸取 0.1 mL 该孢子悬浮液涂布于含 0，0.1，0.5，50，100 μg/mL 氰烯菌酯的水琼脂(WA)平板(Φ = 9 cm)上，置于 25 ?培养箱中，分别观察 4、6、8、10 h 和 12 h 后敏感菌株和抗性菌株的萌 芽率。 1. 4 氰烯菌酯对分生孢子芽管伸长、孢子萌发方式、及其孢子和芽管的形态的影 响 按照 1. 3 的方法制作孢子悬浮液，取其 0.1 mL 涂布于含不同浓度氰烯菌酯的 WA 平板 9 cm)上，置于 25 ?培养箱中，分别于 6 h 和 8 h 后测定敏感菌株和抗性菌株分生孢 (Φ = 子芽管的长度，于 12 h 后测定敏感菌株和抗性菌株分生孢子从中间细胞或基部细胞萌发的 比率，于 8 h 和 12 h 后观察敏感菌株和抗性菌株的分生孢子及其芽管的形态，菌丝体的形成， [8, 9]有无畸形、膨大、扭曲等。 1.5 数据分析 采用SAS软件，对药剂影响禾谷镰孢菌分生孢子芽管生长的数据进行差异显著性分析 (LSD法)。 2(结果与分析 2.1 氰烯菌酯对禾谷镰孢菌野生敏感菌株的毒力 表1为氰烯菌酯对5个野生敏感菌株和2个抗性菌株的回归方程、EC及 EC值。结果表 5090明，氰烯菌酯对禾谷镰孢菌敏感菌株的菌丝生长有很好的抑制作用，EC值在0.092~0.141 50μg/mL 之间，而对两个抗性菌株的EC值较高，分别为111.052和186.490 μg/mL。 50 - 2 - 表1 氰烯菌酯对禾谷镰孢菌野生敏感菌株和抗性菌株菌丝生长的抑制作用Table 1 Inhibitory effect of JS399-19 against mycelia growth of sensitive wild-type and resistant isolates of Fusarium graminearum 1 ECEC 菌株回归方程相关系数5090 Strains Regress equation r /(μg/mL)/(μg/mL) S1 Y=6.861+2.188X 0.987 0.141 0.544 S2 Y=6.115+1.306X 0.912 0.140 1.341 S3 Y=6.875+1.937X 0.994 0.108 0.494 S7 Y=6.562+1.510X 0.977 0.092 0.652 2021 Y=6.896+1.890X 0.990 0.099 0.473 Y2021 Y=0.852+2.027X 0.995 111.052 476.064 Y2021A Y=0.287+2.076X 0.998 186.490 771.920 1. S1,S2, S3和S7是对氰烯菌酯敏感的菌株，Y2021和Y2021A是对氰烯菌酯抗性的菌株 1. S1, S2, S3 and S7 were wild-type isolates sensitive to JS399-19; Y2021 and Y2021A were resistant isolates to JS399-19 2.2 氰烯菌酯对禾谷镰孢菌分生孢子萌芽速率的抑制作用 药剂处理下，野生敏感菌株和抗性菌株的分生孢子在12 h后均可以萌发，且萌发率与对 照没有显著差异。但随着药剂浓度的提高，敏感菌株的萌发速率减慢，尤其在高浓度处理下， 只有在6 h后才有少数孢子萌发;而对于抗性菌株，低浓度药剂处理反而促进了孢子的萌发， 其萌发速率高于对照，在50和100 μg/mL处理下萌发速率有所减慢，但在8 h后几乎与对照相 同(图1)。说明药剂可以减慢孢子的萌发速率，但8 h后则不能抑制孢子的萌芽率。 S1 Y2021 100 100 CK CK 80 80 0.1μg/mL 0.1μg/mL Rate(%)Rate(%) 60 60 0.5μg/mL 0.5μg/mL 40 40 50μg/mL 50μg/mL 萌发率(%)20 20 萌发率(%) 100μg/mL 100μg/mL 0 0 GerminationGermination2h 4h 6h 8h 10h 12h2h 4h 6h 8h 10 h 12h 时间(Time) 时间(Time) 图 1. 氰烯菌酯对禾谷镰孢菌敏感(S1)和抗性(Y2021)菌株分生孢子萌芽速率的影响 Fig 1. Effects of JS399-19 on the conidia germination rate of the sensitive isolate (S1) and the resistant isolate(Y2021) of Fusarium graminearum 2.3 氰烯菌酯对禾谷镰孢菌分生孢子芽管伸长的抑制作用 虽然氰烯菌酯处理 8 h 后并没有抑制孢子的萌芽率，但对于与已经萌芽的敏感菌株的分 生孢子而言，其芽管的伸长受到很大程度的抑制，在药剂处理 8 h 后，随着药剂浓度的提高， 芽管伸长受抑制的程度更强烈;而药剂处理抗性菌株的分生孢子 8 h 后，低浓度药剂处理反 而促进了芽管的伸长，说明氰烯菌酯对抗性菌株分生孢子芽管伸长的抑制作用很小(表 2)。 2.4 氰烯菌酯对禾谷镰孢菌分生孢子中间细胞萌发的影响 在正常情况下，芽管是从分生孢子的顶端细胞萌发的，从基部细胞和中间细胞产生芽管 [10]的能力很低。不同浓度氰烯菌酯处理 12 h 后，敏感菌株和抗性菌株的分生孢子萌芽率都 接近 100%，但随着药剂浓度的提高，敏感菌株和抗性菌株的分生孢子从中间细胞和基部细 胞萌发的比率增加，在敏感菌株中表现尤为显著(图 2)。说明该药剂使禾谷镰孢菌分生孢 - 3 -