裂解酶片段长度多态性分析在母婴垂直传播沙眼衣原体主要外膜蛋白基因分型中的应用

书书书 基金项目：国家自然科学基金资助项目（!"#$"%%#） 作者单位：&"""#& 重庆医科大学附属儿童医院新生儿科［钟晓云（现在重庆市妇幼保健院新生儿科 &"""#!）、 余加林、邓兵、刘官信］；重庆市妇幼保健院新生儿科（王佳、余友霞、王朝惠、张渝、李宜） ·感染性疾病· 裂解酶片段长度多态性分析在母婴垂直传播 沙眼衣原体主要外膜蛋白基因 分型中的应用 钟晓云’ 余加林’ 王佳’ 邓兵’ 刘官信’ 余友霞’ 王朝惠’ 张渝’ 李宜 ’ ’【摘要】’ 目的’ 建立沙眼衣原体（()）主要外膜蛋白基因（*+,#）上游引物 -.末端地高辛标记裂 解酶片段长度多态性（(/01）分型方法；了解重庆地区近年来临产孕妇 () 感染和母婴垂直传播状况 及常见基因型。方法’ 取临产孕妇宫颈刮片及其新生儿鼻咽拭子组成母婴配对标本 !"" 对 2"- 份， 采用 () *+,# 套式聚合酶链反应（*+,#341(5）检测 ()；用建立的 (/01 方法对临床 () 分离株进行分 型。结果’ 孕妇宫颈 ()检出率 ##6（!! 7 !""），母婴传播率 8&9 86（: 7 !!）。生后 8& ; 内和 - < #" = 采集 ()阳性母亲所生新生儿鼻咽拭子标本 () 检出率分别为 !9 "6（# 7 !!）和 !:9 %6（$ 7 #:），!> 8 ? :9 $%，! @ "9 "#。剖宫产和阴道分娩母婴传播率分别为 :9 !6（8 7 8&）和 229 $6（2 7 %），!> 8 ? %9 #2，! @ "9 "#。()阳性和阴性孕妇胎膜早破发生率分别为 !"9 !6（#" 7 !!）和 #!9 -6（!2 7 82$），!8 ? 29 &"，! @ "9 "-。: 对 () 阳性母婴配对标本 (/01 图谱呈 & 类，经测序证实分别为 A、/、B、C 型（各 !、8、8、# 对），各占 !$9 -6、8-9 "6、8-9 "6和 #89 -6，且每对母子 (/01图谱完全一致。结论’ 本研究结果在 一定意义上反映了重庆地区近年来临产孕妇 ()感染和母婴垂直传播状况及常见基因型；上游引物 -. 末端地高辛标记 () *+,# (/01分型方法灵敏度高、重复性好、操作简便、快速、花费相对低廉，没有放 射污染，是一种极具潜力的 ()分型方法。 【关键词】’ 衣原体，沙眼；’ 疾病传播，垂直；’ 细菌外膜蛋白质类；’ 基因型；’ 多态性，限制性 片段长度 !"#$%&’(#) $* +,-$. $/%". +"+0.,#" ’.$%"(# )"#" $* !"#$%&’($ )*$+",%$)(- 0& 12",3,4" *.,)+"#% 2"#)%5 ’$2&+$.’5(4+ ,#,2&4(4’ "#$%& ’()*+,-.，/0 1()+2(.，34%& 1()，56%& 7(.8，9:0 &-).+;(.， /0 /*-+;()，34%& <=)*+=-(，"#4%& /-，9: /(> 5?@)ABC?.B *D %?*.)B*2*8,，<=(2EA?. FG #*G@(B)2， <=*.8H(.8 0.(I?AG(B, *D J?E(K)2 LK(?.K?G，<=*.8H(.8 &"""#&，(;D4E 【604%.,1%】’ 70-"1%(3" ’ F* GH)EIJDH; E +G);G= *K >JGELEMG KNEM+G4) JG4M); ,*JO+*N,;DH+（(/01） E4EJOHDH PD); E ,ND+GN JEIGJG= E) );G -.3G4= PD); =DM*QDMG4D4 K*N MG4*)O,D4M *K <=2)C,E() BA)K=*C)B(G（()）9 F;G +G);*=H K*N =G)G>)D*4 *K () IO +ER*N *S)GN +G+INE4G ,N*)GD4（TUT1）MG4G（ *+,J）PD); 4GH)G= ,*JO+GNEHG >;ED4 NGE>)D*4（*+,J341(5）PGNG H)S=DG=9 F;G D4>D=G4>G *K () D4KG>)D*4 D4 ,NGM4E4) P*+G4，);G >*++*4 MG4*)O,GH E4= LGN)D>EJ )NE4H+DHHD*4 NE)G *K () D4 (;*4MVD4M ENGE =SND4M );G ,EH) *4G OGEN PEH EJH* D4LGH)DME)G=9 8"%5$94 ’ F;G HE+,JGH PGNG )EWG4 KN*+ >GNLD>EJ H>NE,GH *K ,EN)SNDG4) P*+G4 E4= 4EH*,;ENOMGEJ HPEIH *K );GDN 4G*4E)GH KN*+ X,NDJ 8""! )* /GI9 8""& D4 (;*4MVD4M Y*+G4 E4= (;DJ=NG4ZH BGEJ); (ENG [4H)D)S)G9 F*)EJJO !"" ,EDNH（2"- H,G>D+G4H）PGNG =G)G>)G= IO SHD4M *+,J341(5，*+,J31(5 （ D4HD=G ,EDN *K ,ND+GNH PEH SHG= =DNG>)JO）E4= ,JEH+D=31(59 F;G NGHSJ)H PGNG RS=MG= IO );G +*=DKDG= M*J= H)E4=EN=（T\]）9 F;G *+,J341(5 E+,JDKDG= C^X PEH ,SNDKDG= IO NG>*LGNO *K C^X KN*+ EMEN*HG MGJ GJG>)N*GJS)D*4 D4)* =DEJOHDH IEMH9 F;G C^X E+,JDKDG= KN*+ *+,J341(5 PEH HGVSG4>G= IO X_[ 15[]T !$$ C^X HGVSG4>GN9 (/01 EHHEO PD); E ,ND+GN JEIGJG= E) );G -.3G4= PD); =DM*QDMG4D4 PEH >NGE)G= K*N MG4*)O,D4M *K ()，E4= PEH ,ND+ENDJO E,,JDG=9 :"4/2%4 ’ F;G +D4D+S+ =G)G>)EIJG JGLGJH *K *+,J341(5 E4= *+,J31(5 >*NNGH,*4=G= )* 89 - GJG+G4)ENO I*=O（A_）E4= 8- A_，NGH,G>)DLGJO9 F;G HG4HD)DLD)O *K *+,J341(5 PEH #" )D+GH );E) *K *+,J31(59 F;G ,*HD)DLG NE)G *K () D4 );G HE+,JGH KN*+ );G ,NGM4E4) P*+G4 PEH ##6（!! 7 !""）‘ F;G LGN)D>EJ )NE4H+DHHD*4 NE)G *K () KN*+ +*);GNH )* );GDN D4KE4)H PEH 8&9 86（: 7 !!）9 F;G NE)G *K () ·-·中华儿科杂志 8""- 年 # 月第 &! 卷第 # 期’ (;D4 a 1G=DE)N，aE4SENO 8""-，b*J &!，^*9 # 万方数据 !"#$%&’( )*#+ ,%"#-.%*/,0’%$ "1%2" 3456 (%/" %)&’* 2!*&. 1%" 789 :;（< = 58），1.!>. 1%" "!0,!)!>%,&$/ 0*’%&’* &.%, &.%&［79 6;（5 = 77）］(’&’>&’( 1!&.!, ?@ .#A*" %)&’* 2!*&.（!> ? B 89 <:，! C 69 65）9 D) &.’ 77 E&4-#"!&!F’ "%+-$’" )*#+ -*’0,%,& 1#+’,，: .%( F%0!,%$ (’$!F’*/ %,( ?@ .%( >%’"%*’%, "’>&!#,9 G.’ F’*&!>%$ &*%,"+!""!#, *%&’" !, F%0!,%$ (’$!F’*/ 0*#A- %,( >%’"%*’%, "’>&!#, 0*#A- 1’*’ HH9 <;（H = :）%,( 89 7;（? = ?@），*’"-’>&!F’$/（!> ? B :9 5H，! C 69 65）9 I,>!(’,>’ #) -*’+%&A*’ *A-&A*’ #) +’+2*%,’ !, E&4-#"!&!F’ 0*#A- 1%" 769 7;（56 = 77），1.!>. 1%" 0*’%&’* &.%, &.%& #) E&4,’0%&!F’ 0*#A-"（579 3;，7H = ?H<，!? B H9 @6，! C 69 63）9 J#A* (!))’*’,& -%&&’*," 1’*’ #2"’*F’( !, &.’ 5H E&4-#"!&!F’ "%+-$’" )*#+ 8 -*’0,%,& 1#+’, %,( 8 +%&>.’( +%&’*,%$4!,)%,&" 2/ A"!,0 EJKL，1.!>. 1’*’ >#,)!*+’( 2/ MNO "’PA’,>!,0 $%&’*9 G.’/ 1’*’ &/-’ Q （7 -%!*"），&/-’ J（? -%!*"），&/-’ R（? -%!*"）%,( &/-’ M（5 -%!*）9 Q%>. -%!* #) +%&>.’( +%&’*,%$4 !,)%,&!$’ "%+-$’" -*’"’,&’( !(’,&!>%$ EJKL -%&&’*,9 !"#$%&’("#’S G.!" "&A(/ *’F’%$’( &.’ !,)’>&!#, *%&’ #) E& !, -*’0,%,& 1#+’,，F’*&!>%$ &*%,"+!""!#, *%&’ #) E& %,( &.’ >#++#, 0’,#&/-’" #) E& !, E.#,0P!,0 T#+’, %,( E.!$(*’, U" R’%$&. E%*’ I,"&!&A&’9 G.’ EJKL %""%/ 2/ A"!,0 % -*!+’* $%2’$’( %& &.’ 3V4’,( 1!&. (!0#W!0’,!, 1%" )!*"& A"’( )#* 0’,#&/-!,0 #) E&9 G.’ %""%/ ".#1’( % 0##( "’,"!&!F!&/ %,( *’-*#(A>!2!$!&/，,# *%(!#%>&!F’ >#,&%+!,%&!#,，%,( !" "!+-$’9 G.’*’)#*’ &.’ %""%/ !" % -#&’,&!%$ ,’1 +’&.#( )#* E& 0’,#&/-!,09 【)*+ ,"-.’】S E.$%+/(!% &*%>.#+%&!"；S M!"’%"’ &*%,"!+!""!#,，F’*&!>%$；S X%>&’*!%$ #A&’* +’+2*%,’ -*#&’!,"；S Y’,’&/-’；S L#$/+#*-.!"+，*’"&*!>&!#, )*%0+’,& $’,0&. S S 目前沙眼衣原体（>.$%+/(!% &*%>.#+%&!"，E&）感 染在世界各地呈日益增长趋势，已成为世界性的健 康和社会问 题 快递公司问题件快递公司问题件货款处理关于圆的周长面积重点题型关于解方程组的题及答案关于南海问题 。妊娠期由于免疫功能降低常发生 E&感染或复发，引起不良妊娠结局和垂直传播给胎 儿，造成严重后果。裂解酶片段长度多态性 （>$’%F%"’ )*%0+’,& $’,0&. -#$/+#*-.!"+，EJKL）分析 是近年来分子生物学领域出现的一种用于基因突变 和分型研究的技术。?66? 年 7 月 Z ?66@ 年 7 月，我 们建立 E& 主要外膜蛋白（+%[#* #A&’* +’+2*%,’ -*#&’!,，\D\L）基因（ #+-5）第 @ 可变区（ F%*!%2$’ (#+%!," "，]M"）上游引物 3V末端地高辛标记 EJKL分型方法，并用于 E& 临床分离株分型，报道 如下。 材料和方法 一、材料 5^ E&标准株：X = GT43［含 E& 原体（QX）5 _ 563 个 = +$］，由重庆医科大学儿科研究所组织培养室 提供。 ?^临床标本：采集 ?667 年 @ 月 Z ?66@ 年 ? 月重 庆市妇幼保健院临产孕妇宫颈刮片及其所生新生儿 生后 ?@ .内鼻咽拭子，组成母婴配对标本 766 对共 H63 份（3 对双胞胎）；对宫颈 E& 阳性者所生的新生 儿于生后 3 ‘ 56 (时复取鼻咽拭子标本 58 例。 7^套式聚合酶链反应（ ,’"&’( -#$/+’*%"’ >.%!, *’%>&!#,，,LEa）引物序列：外套引物用计算机软件 设计 领导形象设计圆作业设计ao工艺污水处理厂设计附属工程施工组织设计清扫机器人结构设计 ，为 E& #+-5 ]M# ‘"两端的稳定区，扩增片 段 :7< 2-， 其 上 游 引 物 序 列 为 3V4 OEGGYYGYGYOEYEGOGEOYE47V，下游引物为 3V4 YGGEEGOEGYEOOGOEEYEOOYO47V；内套引物参照 L##$’设计，为 E& #+-5 ]M"两端的稳定区，扩增片 段大 小 为 ?<< 2-，其 上 游 引 物 序 列 为 3V4 YYEOOYEOOYGGGOYEGEGEGEG47V，下游引物为 3V4YGGEEGOEGYEOOGOEEYEOOYO47V。 二、方法 5^孕妇宫颈和新生儿鼻咽拭子标本采集方法见 参考文献［5，?］。 ?^ MNO提取：参照沙眼衣原体 LEa检测试剂盒 说明进行（煮沸法）。 7^ LEa扩增及结果判断：用内套引物直接扩增 #+-5 ?<< 2-片段（#+-54LEa），用 ,LEa 扩增 #+-5 ?<< 2- 片段（ #+-54,LEa），扩增 ??3 2- 共有质粒 MNO 片段（ L$%"+!(4LEa），采用扩大金标准［7］ （+#(!)!’( 0#$( "&%,(%*(，\Yb）判断结果：即 #+-54 LEa、#+-54,LEa、L$%"+!(4LEa 阳性，#+-54LEa 和 L$%"+!(4LEa 阳性或 #+-54,LEa 和 L$%"+!(4LEa 阳 性，判为阳性；如 #+-54LEa和 #+-54,LEa中 5 种阳 性，用 MNO测序证实。766 对 H63 份母婴标本全部 用 #+-$4,LEa方法检测，其中 766 个宫颈标本用前 述 7 种方法检测。 @^ #+-54LEa、#+-54,LEa 的最低检测限：将 E& 标准株（含 5 _ 563QX = +$）按 56 倍递减稀释，对各稀 释度液体分别取 5 $$ 提取 MNO 作为模板，分别用 #+-54LEa、#+-54,LEa扩增。 3^ MNO纯化：采用透析袋电泳洗脱法。 H^内套上游引物 3V末端地高辛标记：由上海生 工生物工程有限公司进行标记。 <^裂解反应：按 EJKL 试剂盒（美国 G.!*( T%F’ G’>.,#$#0/公司）操作说明进行：将盛有 @ $$ 纯化 MNO和 : $$ MNO稀释缓冲液的反应管在热循环仪 中加热至 :3c并维持 53 "，冷却至 73c，在 73c时 加入酶混合物（56 _ EJKL 缓冲液 ? $$、? ++#$ = K氯 ·H· 中华儿科杂志 ?663 年 5 月第 @7 卷第 5 期S E.!, d L’(!%&*，d%,A%*/ ?663，]#$ @7，N#9 5 万方数据 化锰 ! !"、#$%稀释缓冲液 ! !"、裂解酶 " & !"），然 后将反应温度从 ’()以 *+ &) , -的速度逐渐上升到 .()，在 .()时加入 &/ !"停止液终止裂解反应。 .0裂解后 #$%片段的分离、转移和检测：.1变 性聚丙烯酰胺制板，室温聚合 2* 345，在 *+ ( 6 789 缓冲液中垂直电泳。加样前电泳预热 2* 345，待凝 胶温度升至 (*) :/*)时取裂解产物 &* : &( !"点 样（点样前将裂解产物加热至 .*)，! 345），继续电 泳至二甲苯蓝达底部。用干燥印迹法将电泳分离的 #$%转移至 *+ ! !3 孔径阳离子尼龙膜上（美国 ;<=">4<=>? @ ;<=A>"" 公司），转移时间 2 : &/ =。用 比色法（BC"C?43>D?4<）检测 BEFG图谱。 H0 #$%双链直接测序：将纯化 GBI产物送上海 生工生物工程有限公司测序（%8J GIJ;K ’LL 型 全 自动 #$% 测序仪测序）。将报告的 #$% 序列与 MAN5等［2］公布的序列对照。 &*0统计学处理：四格 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 变量用 #! 检验，敏感 性 O本方法与 KP; 均为阳性数 , KP; 阳性数，特异 性 O本方法与 KP; 均为阴性数 , KP; 阴性数，阳性 预测值（GGQ）O本方法与 KP; 均为阳性数 ,本方法 阳性数，阴性预测值（$GQ）O本方法与 KP;均为阴 性数 ,本方法阴性数。综合评价约登指数 O敏感性 R 特异性 S &**1。 结 果 一、BD母婴垂直传播情况 &0 ’ 种 GBI 方 法 C3T&UGBI、C3T&U5GBI、 G"N-34VUGBI 检 出 率 分 别 为 &*+ ’1、&&+ ’1、 &!+ L1，用 KP; 判定 BD 检出阳性 ’’ 例，检出率为 &&+ *1。C3T"U5GBI 敏感性、特异性、GGQ、$GQ 和 综合评价约登指数均最高，C3T"UGBI特异性和 GGQ 优于 G"N-34VUGBI，敏感性和 $GQ 低于 G"N-34VUGBI （表 &、!）。 !0 C3T&UGBI和 C3T&U5GBI的最低检测限分别 为 !( 98和 !+ ( 98，即后者比前者灵敏性高 &* 倍。 用 ! 种方法检测标准株，均为阳性；检测表皮葡萄球 菌、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、大肠杆菌和蒸馏 水空白对照，全部阴性。 ’0孕妇宫颈 BD 检出率 &&1（’’ , ’**），其所生 ’*( 名新生儿 BD 阳性 . 例，母婴传播率 !2+ !1（. , ’’）；母亲 BD阴性，所生新生儿 BD全部阴性。 20生后 !2 =内和 ( : &* V 采集 BD 阳性母亲所 生新生儿鼻咽拭子标本各 ’’ 份和 &. 份，BD 阳性 & 例和 L 例，检出率分别为 ’+ *1（& , ’’）和 ’.+ H1（L , 表 !" ’** 例宫颈标本的 ’ 种方法检查结果 ’ 种方法测定结果 C3T&UGBI C3T&U5GBI G"N-34VUGBI KP; 判定 病例 数 构成比 （1） R R R R !H H+ L S R R R ’ &+ * S R W S R & *+ ’ S R ! S S & *+ ’ R ! S S S ! *+ L S S R S / !+ * S S S S !(. ./+ * 合计 ’** &**+ *X X X 注：#$%测序，!未证实，W证实 表 #" 以 KP;判定为金标准对 ’ 种方法的效果评价 方法 检出率 例数 率（1） 效果评价 敏感性 （1） 特异性 （1） 阳性预 测值 阴性预 测值 综合评价 约登指数 （1） C3T&UGBI ’& &*+ ’ .L+ H HH+ ’ H’+ ( H.+ ( .L+ ! C3T&U5GBI ’2 &&+ ’ &**+ * HH+ / HL+ & &**+ * HH+ / G"N-34VUGBI ’. &!+ L HL+ * HL+ . .2+ ! HH+ / H2+ . &.），生后 ( : &* V 采集标本的 BD 检出率高于生后 !2 = 内采集的标本（ #! O &&+ ’2，#< ! O .+ LH，! Y *+ *&）。 (0在 ’’ 例 BD 阳性孕妇中，剖宫产 !2 例，其子 BD阳性 ! 例，剖宫产母婴传播率 .+ ’1（! , !2）；阴道 分娩 H 例，其子 BD 阳性 / 例，阴道分娩母婴传播率 //+ L1（/ , H），阴道分娩组母婴传播率高于剖宫产 组（#! O &!+ &’，#< ! O H+ &/，! Y *+ *&）。 /0在 BD阳性和阴性孕妇中，胎膜早破发生率分 别为 ’*+ ’1（&* , ’’）和 &’+ (1（’/ , !/L），孕妇 BD阳 性组胎膜早破发生率高于 BD阴性组（#! O /+ 2*，! Y *+ *(）。 二、BD母婴垂直传播常见基因型 . 对 BD 阳性母婴配对标本 BEFG 图谱呈 2 类 （图 &），经测序证实分别为 9、E、Z、#型（各 ’、!、!、 &对），且每对母子BEFG图谱完全一致；同一标本 图 !" . 对 BD阳性母婴配对标本 BEFG图谱呈 2 类 ·L·中华儿科杂志 !**( 年 & 月第 2’ 卷第 & 期X B=45 [ G>V4ND?，[N5AN?\ !**(，QC" 2’，$C+ & 万方数据 不同批次产生的 !"#$图谱和相同基因型的不同标 本的 !"#$图谱相同；以 %&变性聚丙烯酰胺凝胶电 泳、’()退火温度、*( + *, -./ 酶切时间获得的 !"#$电泳图谱较为理想。 讨 论 一、围产期 !0感染和母婴传播 *1临产孕妇宫颈标本 !0 阳性检出率和母婴传 播率：本研究临产孕妇宫颈 !0 感染检出率与 ’ + , 年前重庆该检出率［*，2］比较，无明显改变，在全国居 中下水平。母婴传播率较相关报道［,，3］低，分析可 能的原因为：!采集新生儿标本时间早，因为过早采 集标本，经产道传播婴儿时，!0 尚未在鼻咽部大量 繁殖。本次研究发现在生后 2’ 4内和生后 , + *( 5 采集新生儿标本，后者 !0 检出率较前者明显增高。 "采集标本部位单一，有报道新生儿结膜较鼻咽部 !0多，故增加新生儿结膜标本检查可提高 !0 检出 率。#剖宫产率高，66 例 !0阳性孕妇剖宫产 2’ 例， 剖宫产率达 76&。 21不同分娩方式 !0 母婴传播率：母亲的 !0 感 染可通过宫内感染、产道感染、产褥期感染等方式传 播给婴儿，其中以分娩过程中经产道感染最为重要。 本研究发现阴道分娩 !0母婴传播率较剖宫产 !0 母 婴传播率高。 61孕期 !0感染与胎膜早破：一方面孕妇宫颈 !0 感染上行可导致胎膜早破，另一方面胎膜早破使 !0 容易上行感染引起胎儿宫内感染。本研究发现孕妇 胎膜早破发生率 !0阳性组高于 !0阴性组。 二、!0母婴传播基因型 !0迄今为止已检出 *% 种血清型，引起泌尿生 殖道感染和婴儿感染的为 8、"、9、:、;、<= > <、?、@ > @=、A和 9=型，国内外文献报道以 8、"、9型最为常 见。在母婴配对研究中，@BCC 报道检出 !0 8 型 ** 例，"型 ’ 例，9、?型各 2 例，<型 * 例。近几年来国 内亦开展了 !0母婴传播基因水平的研究，用限制性 片段长度多态性分析法鉴定基因型，证实配对母婴 标本为同一基因型，其中 8型 , 对，9型 2 对，"型 2 对，: 型 * 对［3］。另有 2 篇报道采用单链构象多态 性分析和（或）9DE 测序证实 2 对母婴配对标本为 8型［*］。本研究用 !"#$方法检测 !0母婴传播基因 型，亦以 8 型最常见，其次为 "、A 型。国外已将 !"#$用于丙肝病毒［7，%］、脑膜炎奈瑟氏菌［F］、毛线 虫［*(］的基因分型，但尚无用于 !0 分型报道。 G=HI4=CC等［%］分别用 !"#$和 9DE测序检测了 A!J 在美国 %,&的基因型分布，两种方法达到 *((&一 致性。国内学者余加林等［**］针对 !0 K-LC J9$，用 ［%M6,N］5EO$标记的传统 !"#$ 方法对 , 份新生儿 鼻咽拭子标本进行了 !0 的基因分型，经 9DE 测序 证实为 8型和 "型，为本研究方法学的建立打下基 础。本研究在其基础上用地高辛代替同位素进行标 记，克服了同位素标记半衰期短、放射污染、不利于 推广应用等缺点，同时采用了变温 !"#$ 技术，探索 和优化了该技术用于 !0 K-L* J9$ 片段的条件，成 功地对临床标本的 ’ 种 !0 基因型进行了 !"#$ 分 型。本研究表明：用本研究建立的 !0 K-L* J9$上 游引物 ,P末端地高辛标记 !"#$ 分型方法进行 !0 基因分型，灵敏度高、重复性好、操作简便、快速、花 费相对低廉，是一种极具潜力的 !0基因分型方法。 参 考 文 献 * 张春平，朱道银，郭晓霞1 沙眼衣原体子宫内感染途径的研究 Q 中华妇产科杂志，2((2，67：*’FM*,*Q 2 吴仕孝，沈犁，刘官信 Q 母婴垂直传播沙眼衣原体多聚酶链反应 及测序研究 Q 中华儿科杂志，*FF7，6,：2%6M2%,Q 6 O4BRCI A，;/=HLB1 :，;/=HLB A，B0 =C1 8SL=/5K5 TKC5 I0=/5=H5 ./ 04B 5.=TKI.I KU !4C=-V5.= 0H=.4K-=0.I ./ = CKW LHBX=CB/YB LKLZC=0.K/： 5.=T/KI0.Y BUU.Y=YV KU 0.IIZB YZC0ZHB， 5.HBY0 .--Z/KUCZKHBIYB/YB， B/[V-B .--Z/K=II=V，$!\ =/5 IBHKCKTV1 ;B/.0KZH./ GB5，*FF’， 7(：6((M6(61 ’ ]Z=/ ]，^4=/T ]_，‘=0a./I D;，B0 =CQ DZYCBK0.5B =/5 5B5ZYB5 =-./K =Y.5 IBbZB/YBI UKH 04B UKZH X=H.=cCB 5K-=./I KU 04B -=RKH KZ0BH -B-cH=/B LHK0B./ TB/BI KU 04B *, !4C=-V5.= 0H=Y4K-=0.I IBHKX=HIQ