灰霉抗性鉴定1 转基因植株对灰霉病的抗性鉴定 采用离体叶片接种法。当幼苗长至 4～5片真叶时 ,剪取叶龄相同及大小适中的叶片 ,叶柄以湿润无菌脱脂棉包裹 ,用移液枪取20μL灰霉菌 (B. cinerea )的孢子悬浮液 ( 106cfu·mL - 1)点于叶正面 ,在光周期 12 h /12 h,温度 20℃ 左右条件下培养。以无菌的 1%葡萄糖溶液接种为对照。分别在接种后 4、 6、 8天调查发病情况。灰霉病分级标准参照等。病情指数计算参照方中达的方法。每个处理取 10片叶 ,重复 3次。
2. 参照Viaud等[...
1 转基因植株对灰霉病的抗性鉴定 采用离体叶片接种法。当幼苗长至 4～5片真叶时 ,剪取叶龄相同及大小适中的叶片 ,叶柄以湿润无菌脱脂棉包裹 ,用移液枪取20μL灰霉菌 (B. cinerea )的孢子悬浮液 ( 106cfu·mL - 1)点于叶正面 ,在光周期 12 h /12 h,温度 20℃ 左右条件下培养。以无菌的 1%葡萄糖溶液接种为对照。分别在接种后 4、 6、 8天调查发病情况。灰霉病分级标准参照等。病情指数计算参照方中达的方法。每个处理取 10片叶 ,重复 3次。
2. 参照Viaud等[1]的离体叶片接种法:在培养皿内铺双层滤纸,加少量水,进行灭菌。剪取生长整齐一致的各供试寄主幼苗的第1片平展真叶,冲洗后用75%的酒精表面消毒30 s,用灭菌水冲洗3遍,待吸干叶表水后,展平铺到灭菌培养皿上。用直径为3mm的打孔器在培养好的各地灰霉菌菌落边缘打取菌饼,反接于叶片的不同部位。每片叶接4块菌饼,每个菌株在每个寄主上接5片叶,对照接相同大小的PDA培养基块。接种后置于25℃恒温光照培养箱内,3 d后调查发病情况。按照十字交叉法测量病斑大小,并根据各处理的病斑大小评价各菌株致病力的差异。参照朱建兰等[9]的灰霉病斑调查方法,其分级标准为:0级,无症状或症状不明显;1级,形成直径2~5 mm(包含2 mm)水渍状黄褐色病斑;2级,形成直径5~10 mm(包含5 mm)水渍状黄褐色病斑;3级,形成直径10~15 mm(包含10 mm)水渍状黄褐色病斑;4级,形成直径15~20 mm(包含15 mm)水渍状黄褐色病斑;5级,形成直径≥20 mm水渍状黄褐色病斑。采用DPS统计软件对供试灰霉菌株引起的病斑直径数据进行方差分析,采用Duncan’s新复极差检验(LSR test)进行多重比较。
3. 采用孢子悬浮液点滴法。取幼苗的第3片复叶接种，在小叶中心近轴处用移液器加5μL孢子悬浮液，以无菌水作对照。将接种后的叶片置于直径9 cm的培养皿内，封口膜封口。在20℃、相对湿度100%的黑暗条件下培养24 h后进行光照培养，光照时间为12 h·d
-1，光照强度为3 000 lx。接种4 d后计算病情指数。每份试材3次重复，每重复10株，每株3片小叶。
病害分级标准为:0级,无病斑;1级,病斑面积占叶面积5%以下;3级,病斑面积占叶面积5%～15%;5级,病斑面积占叶面积15%～25%;7级,病斑面积占叶面积25%～50%;9级,病斑面积占叶面积50%以上。
病情指数的计算公式如下:病情指数=Σ(各级病叶数×各级代表值)调查总叶数×最高级代表值×100
以病情指数为基础,采用相对抗病性方法评价其抗病程度,根据相对抗性指数进行抗性
划分。抗性水平分为:免疫(I)、高抗(HR)、中抗 (MR)、中感(MS)、高感(HS);相对抗性指数:免疫(I)为1.00、高抗(HR)为0.70~0.99、中抗 (MR)为0.40~0.69、中感(MS)为0.20~0.39高感病(HS)为<0.20
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