【doc】阿魏酸哌嗪对单侧输尿管梗阻大鼠肾脏的保护作用

【doc】阿魏酸哌嗪对单侧输尿管梗阻大鼠肾脏的保护作用 阿魏酸哌嗪对单侧输尿管梗阻大鼠肾脏的 保护作用 234西部医学2008年3月第2O卷第2期MedJWestChina,March2008,Vo1.2O,No.2 阿魏酸哌嗪对单侧输尿管梗阻大鼠肾脏的保护作用 马爱景,谢席胜,付平,李静,米绪华,冀玲,陶冶 (四川大学华西医院肾脏内科,四川成都610041) 【摘要】目的观察阿魏酸哌嗪(Piperazineferulate,PF)对单侧输尿管梗阻(Unilateralureteralobstruction, UUO)模型大鼠肾小管间质的转化生长因子一B1(Transforminggrowthfactor一岛,TGF—B1),a一平滑肌肌动蛋白(a—smooth muscleactin,a—SMA)和I型胶原(CollagenI,ColI) 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 达水平的影响,初步探讨其对小管间质纤维化的作用 机制 综治信访维稳工作机制反恐怖工作机制企业员工晋升机制公司员工晋升机制员工晋升机制图 . 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 将24只大鼠分为假手术(Sham—operatedrats,S0R)组,UUO组,氯沙坦(Angiotensin?receptorblocker,ARB)组和 PF组.运用免疫组化技术半定量 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 实验第14天各组大鼠肾组织中TGF一岛,a—SMA和ColI的表达水平.结果免疫 组化结果表明SOR组TGF—B,a—SMA和ColI均为少量表达,UUO组大鼠上述表达明显增加;ARB组和PF组TGF一 岛,a—SMA和ColI的表达均低于UUO组,但高于SOR组,两治疗组之间差异无统计学意义.结论阿魏酸哌嗪可以降 低肾小管间质TGF一8l,a—SMA和ColI的表达水平,延缓肾小管间质纤维化的进程. 【关键词】阿魏酸哌嗪;肾间质纤维化;TGF—B;a—SMA;ColI 【中图分类号】R693.2【文献标识码】A【文章编号】1672—3511(2008)02—0234-03 Protectiveeffectofpiperazineferulateonratkidney afterunilateralureteral0bstructi0n MAAi-jing,XIEXi—sheng,FUPing,etal (DepartmentofNephrology,WestChinaHospitalofSichuanUniversity,Chengdu610041,China) [Abstract]ObjectiveToexploretheeffectandmechanismofpiperazineferulateonregulatingtheexpressionof transforminggrowthfactor一岛(TGF—B1),a-smoothmuscleactin(a— SMA)andcollagenI(ColI)inrenal tubulointerstitiumintheratmodelofunilateralureteralobstruction(UUO)MethodsTwenty-fourSDratswere randomlydividedintosham—operationgroup,UUOgroup,angiotensm? receptorblockertreatmentgroup,and piperazineferulatetreatmentgroup.TheexpressionlevelsofTGF一8l,a— SMAandColIintheratsweredeterminedby immunohistochemistryassayat14daysoftheexperiment.ResultsImmunohistochemistryresultsshowedthatthere wasslightexpressionofTGF—B1,a—SMAandColIinsham— operationgroup,buttheexpressioninUUOgroupwas significantlyincreased(P<0.05).TheexpressionofTGF-~,,a— SMAandColIinangiotensin?receptorblocker treatmentandpiperazineferulatetreatmentgroupswaslowerthanthatinUUOgroupbuthigherthanthatinsham— operationgroup(P<0.05).Nosignificantdifferenceintheexpressionlevelswasfoundbetweenthetwotreatment groups(P>O.05).ConclusionPiperazineferulatecandecreasetheexpressionofTGF-~,,a—SMAandColI,suggesting itcandelaytheaggravationofrenaltubu1ointerstitialfibrosis. [Keywords】 Piperazineferulate;Renalinterstitialfibrosis;Transforminggrowthfactor-~l;a-smooth muscleactin;CollagenI 肾间质纤维化是多种慢性肾脏疾病进展至终末期 肾衰的共同病理表现,目前已经证实,肾间质肌成纤维 细胞是病理条件下合成细胞外基质,导致间质纤维化 最主要的效应细胞,肾小管上皮细胞向间充质细胞转 分化是产生间质肌成纤维细胞,并最终导致肾间质纤 维化的重要机制之一[】].a—SMA是肌成纤维细胞的标 基金项目:四川大学华西医院横向科研基金资助(No.H06—011) 通讯作者{付平,fupinghx@163.com 志性蛋白,现被普遍用于检测肾小管上皮细胞向肌成 纤维细胞的表型转化.阿魏酸哌嗪具有抗凝,抗血小板 聚集,扩张微血管,增加冠脉流量,解除血管痉挛等作 用,同时对糖尿病肾病和阿霉素肾病等具有明确的保 护作用[2].本实验将阿魏酸哌嗪用于单侧输尿管结扎 大鼠模型,通过观察TGF—,a—SMA和ColI的变化来 探讨阿魏酸哌嗪对肾间质纤维化的抑制作用,并为肾 病治疗寻找新的有效药物. 西部医学2008年3月第20卷第2期MedJWestChina,March2008,Vo1.20,No.2 1材料与方法 1.1实验动物及分组雄性SD大鼠24只,体重 (18o?20)g,购自四川大学实验动物中心.将大鼠适 应性饲养一周后随机分成四组,即SOR组,UUO组, ARB组和PF组,每组6只.将氯沙坦与阿魏酸哌嗪分 别溶于生理盐水中,于术前24小时开始,ARB组给予 氯沙坦溶液灌胃20mg/(kg?d),PF组给予阿魏酸哌 嗪溶液灌胃100mg/(kg?d),SOR组与uUO组则 予以同体积的生理盐水灌胃,连续14天. 1.2造模方法及取材用经典的左侧输尿管结扎手 术制备UUo模型,SOR组开腹后,分离出左侧输尿 管,但不结扎,其余步骤同手术组.于术后第14天,各 组均处死6只大鼠,用5水合氯醛麻醉大鼠,股动脉 放血处死大鼠.打开腹腔后从距肾f-jlmm处切取左 侧肾脏,取部分肾组织保存于4多聚甲醛中,固定后 经脱水,透明,浸蜡和包埋,切成3gm石蜡切片. 1.3免疫组织化学染色免疫组化按SP法常规进 行,切片经常规脱蜡,3HO室温孵育10min,消除 内源性过氧化物酶的活性,抗原修复,正常山羊血清室 温孵育20min进行封闭,滴加适当比例稀释的一抗: TGF-I~1为1:300,a-SMA为1:600,ColI为1:100, 用PBS代替一抗作阴性对照,4"C冰箱过夜,再加生物 素标记的?抗,37?孵育20min,滴加辣根酶标记链 酶卵白素工作液,37?孵育30min,DAB显色剂显色, 苏木素复染. 1.4图像分析每张切片随机选取至少10个视野, 采用日本OLYMPUSBX51倒置生物显微镜采集图 像,并用Image—ProPlus软件进行图像对结果进行分 析,阳性细胞内的染色量化为综合面积和灰度值所得 出的积分光密度值(IOD值),取均值.IOD值越大,说 明抗原表达水平越高,反之亦然. 1.5统计学方法数据用is表示,采用SPSS13. 0进行统计分析,组间差异采用单因素方差分析(One— wayANOVA),组间两两比较用独立样本q检验,以口 235 —0.05为检验水准. 2结果 2.1各组中TGF一8,a—SMA和ColI的表达从表1 看,TGF—B,a—SMA,ColI,四组比较均不同(F为 39.158,99.623,均P=0.000);除PF组与ARB组 三项指标均相近外(g为1.53,2.68,均P>O.05),其 余任意两组比较三项指标均不同(g为4.88~24.29, 均P<0.01). 表1各组大曩肾组织中TGF-p,a-SMA和ColI的表达比较 allgroul~ analysisofTGF—pl,a-SMAandColIin 注:调整口,=0.017 2.2TGF一8.,a—SMA和ColI的免疫组化结果 TGF—BSOR组在皮髓交界的肾间质中TGF—B有少 量表达,治疗组和UUO组肾问质中TGF—p表达明 显,见图1.a—SMA:SOR组中除血管壁平滑肌细胞 外,肾小球,肾小管及问质内均未见表达;治疗组和 UUO组a—SMA除血管壁有表达外,肾间质细胞胞浆 中有大量表达,同时部分小管上皮细胞浆中也有表达, 见图2.ColI在SOR组肾间质中有少量表达,治疗组 和UUO组ColI大量表达于肾间质中,见图3. 3讨论 肾间质纤维化是各种肾脏疾病进展至终末期肾衰 的最终共同途径[4],它与肾功能的相关性比肾小球硬 化更为密切[5].目前研究认为,TGF—B在肾间质纤维 化发生发展的多个环节中起重要作用,是主要的致纤 维化因子之一.川芎是我国传统中药,其有效成分之一 为阿魏酸,阿魏酸哌嗪系由阿魏酸经化学方法合成的 药物.研究表明[2矗],阿魏酸哌嗪对糖尿病肾病,阿霉 (A)SOR.@t(B)UUO.~]I(C)ARB.~]I(DPF~]t 图1各组大鼠术后肾组织TGF—pl免疫组化表达结果(×400) Fig.1lmmunohistoehemiealanalysisoftheexpressionofTGF-13linallgroups(X400) rA)SOR组 西部医学2008年3月第2O卷第2期MedJWestChina,March2008,Vo1.20,No.2 (B)UUO组(C)ARB组(D)PF组 图2各组大鼠术后肾组织a—SMA免疫组化表达结果(×400) analysisoftheexpressionofa—SMAinallgroups(×400) (A)SOR~(B)UUO组(C)ARB组(D)PF组 图3各组大鼠术后肾组织Coll免疫组化表达结果(X400) Fig.3lmmunohistochemicalanalysisoftheexpressionofCoilinallgroups(X400) 素肾病及5/6肾大部切除等大鼠的肾脏有明显保护作 用,并推测与其降低TGF—的表达有关.另一项试验 研究表明[7],由阿魏酸合成的另一种药物阿魏酸钠作 用于肺纤维化模型大鼠后,大鼠肺内胶原纤维沉积显 着降低. 本实验中,我们通过建立经典的肾间质纤维化模 型即UUO大鼠模型,观察阿魏酸哌嗪对小管间质 TGF,,a—SMA和ColI表达的影响,研究其对肾间质 纤维化的抑制作用及可能机制.我们的实验表明,术后 第14天,模型组肾间质TGF—的表达较对照组明显 增多,而阿魏酸哌嗪治疗组肾间质TGF—的表达虽 较对照组增多,但较模型组明显下降,且与氯沙坦组相 比差异无统计学意义.表明阿魏酸哌嗪能够通过下调 TGF,p的表达,从而发挥抑制肾间质纤维化的作用. 细胞外基质的过度沉积是肾间质纤维化的主要特 点,由肾小管上皮细胞转分化而来的肌成纤维细胞是 产生细胞外基质的主要细胞,a—SMA是其标志性蛋 白.我们的实验表明,术后第14天,模型组肾组织 a—SMA的表达较对照组增多,而阿魏酸哌嗪治疗组肾 组织a-SMA的表达虽较对照组增多,但较模型组下 降,且与氯沙坦组差异无统计学意义.表明阿魏酸哌嗪 能够减少肾小管上皮细胞向肌成纤维细胞的转分化, 从而使细胞外基质生成减少,肾间质纤维化程度减轻. 本实验结果提示,阿魏酸哌嗪可抑制TGF—和 a—SMA表达,减少Coll的积聚,减轻肾间质纤维化程 度,且和氯沙坦差异无显着性.本研究为阿魏酸哌嗪治 疗肾间质纤维化提供了新的理论依据,也为肾间质纤 维化的治疗提供了新的方法. 【参考文献】 [1]LanHY.Tubularepithelial—myofibroblasttransdifferentiation mechanismsinproximaltubulecells[J].CurrOpinNephrol Hypertens.2003.12(1):25—29. 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