人体毛囊蠕形螨、皮脂蠕形螨和羊蠕形螨的ISSRPCR与遗传分析

人体毛囊蠕形螨、皮脂蠕形螨和羊蠕形螨的ISSRPCR与遗传分析 分类号: ,,,,(, 单位代码: ,,,,,密级: 学号: ,,,,,,,,, ?厶茹,孥 硕士学位论文 ,, ,, ,,,, ,, ,,,,,,,, ,,,,,,”, ,, ,,,, 论文 题 快递公司问题件快递公司问题件货款处理关于圆的周长面积重点题型关于解方程组的题及答案关于南海问题 目:人体毛囊蠕形螨、皮脂蠕形螨和山羊蠕形螨的 ， ,,,,,,,与遗传分析，,,,—,,, ,,, ,,,,,，,, ,,,,,,，, ,,,,, ,,,,, ,,,,,,, ,，,,, 专 指导教师姓名 塞左堕 专业技术职称 教授 ,,, ,年,,月 , ,日 原创性声明 一 本人郑重声明:所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独 立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不、 包含任何其他个人或集体己经发 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 或撰写过的科研成果。对本文的研 究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明 的法律责任由本人承担。 一论文作者签名:麦,『手色靶 日期: ， , 关于学位论文使用授权的声明 本人完全了解山东大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学 校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论 文被查阅和借阅;本人授权山东大学可以将本学位论文的全部或部分 内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段 , 保存论文和汇编本学位论文。 (保密论文在解密后应遵守此规定) 论文作者签名毒,粒彖导师签名:豸?刍 日期: 目 录中文摘 要…………………………………………………(英文摘 要…………………………………………………(说 明……………………………………………………(( 材料 关于××同志的政审材料调查表环保先进个人材料国家普通话测试材料农民专业合作社注销四查四问剖析材料 与方 法…………………………………………………,,实验结 果…………………………………………………((,,讨 论………………………………………………………,,附 图………………………………………………………,,参考文 献…………………………………………………((,,致 谢………………………………………………………,,攻读硕士期间发表的学术论文…………………………………((,, ,,,,,,,,,,,,,,;,(,,,,,,,)……………………………………………………………………,,,,,,,; 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,,,,,,, ,,,,,,, ,,,,,;,,,, ,, ,,,,,,,, ;,,,,,,,,, ,,, ,;,,,, ,,,,,,, ,,, ,,,,,—,,,,,, ,,？,,,;,,,,,,—,,;,,,,,(，,,,,,,,),, ,,,,,,,，, ,, ,,,,,,, ;,,,,,(,(,(),,,, ,,,,,, ,,, ,, ,,, ,,,,,,,,(,,, ,,,, ,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,, ,, ,,;, ,, ,;,,,,,, ,,,,,,, ,, ,,,,;,,, ,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,, ;,,,, ,,,;,,,,(,,,)(，,,,,,,, ,,,,,,,;,,,,,, ,,, ;,,,,;,,, ,,,,,,,,,,,; ,,, ,, ,,,,,,, ,,,,,;,,,,,,(,(,()，,,,,,,, ,,,,,,(,(,(),,, ,(,(，,,,;,,,,,,,, ,,, ,,, ,,,,,,; ,,,,,,,,, ,,,,,,;, ,, ,,,,,,, ,,,, ，,,, ,,,,(,,, ,,,,,,, ,,,,,,,,; ,,,,,,,,, ,,, ,,,,;,,,, ,,,,,,;, ;,,,,,,,;,,,,, ,, ,(,((,(,(,,, ,(,(;,,, ,,,,,,, ，,,,—,,, ,,,,,,,;,,,,,,(,,,,,,, ,,,,,;,,, ,,,,,, ,(,(,,, ,(,(,,,,, ,,,,,,,,, ,,,, ,, ,,,,,,,,,(,,,,(,(,,,, ,,, ,,,,’, ,,,, ,,,,,,,(,,,,, ,,, ,,,,,;,,,, ,,;,,,;,,,，,,, ,,,,, ,,,,;,,,,,,, ,,, ,,,,,,,, ,,,, ,,, ,,,,, ,,,, , ,,,;,,, ,,,,,, ,,,, ,, ,,,,,,,,,，,,, ,,,, ,,,,,,,,,,, ,,,, ,,,, ,,,,,,,,,,,(,,, ,,,,,, ,,, ,, ,(,(,,, ,(,(,,,, ,,,,,;,,, ,,,, ,, ,,,;, ,,,,,,; ,,, ,,,,,, ,,,,,;,,,, ,,,，,,, ,,,,,, ,,, ,, ,(,(,,,, ,,,,,;,,,,,,, ,,,, ,,,,,, ,,,, ,,,,,, ,,,,,, , ,,,，,,,, ,;,,,,,, ,,,,,,, ,,,, ;,,,,,, ,,, ,,,,,,,, ,,, ,, ,(,(,, ,,, ,,,,,,,, ,,, ,, ,,,,, ,, ,,, ,,,,,, ,,,, ,,,, ,,,,,,,, ,, ,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,(,,, ,,,,,, , ,,,, ,,,,;,,,，,,,;, ,,,, ;,,,, ,,,,,，,,,, ,,,,,,,,,,,,,,, ,,,, ,,,,,,,,,,(,,,,,,,，,,, ,,,, ,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,, ,, ,,;, ,, ,;,,,,,, ,,,,,,, ,,,,,,;,,, ,, ,,,,,,,, ,,,,,,,,,, ;,,,, ,,,;,,,,(,,,)(,,,, ,,, ,,,,;,,, ,,,,,,,，,(,。,(,(,,, ,(;(,,,,,, ,, , ,,,,,,,, ,,, ,,,,,,, ;,,,, ,,,。,,, ,,,,,,, ,,, ,,,,, ,,,,,,,,,—,,,, ,,, ,,,;,,,,,,,,,,,，,,, ,,,,,,,,;,, ,,,,,,,, ,, ,,,, ,, ,,,,,,,,,, ;,,,, ,,,(,,,,,,, ,,, ,,,,,, ,, ,(,((,(,(,,, ,(,(,,, ;,,,,;,,,(,,, ,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,, ,,,,, ,,,,,,, ,,,,, ,,, ,,,,,,,,(,,,,,, ,,, ,, ,(,(,(,(,,, ,(, ,,,, ,,,,,;,,, , 山东大学硕士学位论文 ,,,,,;,,,,,, ,,,, ,,,,(,,,,, ,, ,,,,,,, ,,,;,,,, ,,,,,, ,, ，,,,—,,, ,(,(,,, ,,,,,,,,,,,， , ,,,,,,, ,,,,,, ,,, ,;,,,,,, ,,, ,,, ,,,, ,, —,,, ,,,,,,,;,,,,,, ,, ,(,(,(,(,, ，,,, ,, ,(,(,,,, ;,,,,,, ,,,(,,, ,,,,,,, ,,,,,, ,,,, , ,, ,,,,, ,, ，,,, ,,,,,,, ,,,, ,,,,,,,,, ,,,, , ,,,,,,,, ,,,,,,,，,,, ,,, ,,,,,, ,, ,,, ,,,,,,,, ,,,, ,,,,,, ,,,, ,,, ,, , ,,, ,,，,,, ,, ,,,,, ,,,, ,,,,,,,,,,;，,,, ,,, ,,,;,,,,,, ,, ,,,,,,,,,,,, ,,,,, ,,,;,,, ,,,(,,,,,,; ,,,,,,,,,, ;,,,,,;,,,, ,, ,(,(,,, ,(,(，,(,(,,, ,(,，,(, ,,, ,(, ,,,, ,,,,,;,,,,,, ,(,,,、,(,,,、,(,,,(,,, ,,,,,,; ,,,,,,;, ,, ,,,,(,,),,, ,,,,,;,,,,,, ,(,,,、,(,,, ,,, ,(,,,(,,, ,,,,,, ,,,,, ,,,, ,,,,, ,,, ,,, ;,,,,,, ,,,,,,,,,,,, ,,,,,,, ,(,(,,, ,(,(，,,,, ,, ,(, ,,, ,(,(,,, ,,,,,,，,,, ,,,,,,,,,,,, ,, ,(,(,,, ,(, ,, ,,, ,,,,,,,,(,,,;,,,,,, ,,,,,,; ,,, ,, ,(,((,(,(,,, ,(,(,,,, ,,,,,;,,,(,,, ,,,,,,, ;,,,,,,,,,,, ，,,,—,,, ,,, ,,,,,,, ,, ,,,,,, ,,, ,, ,,,,,,, ,,,, ,;,,,,,,(,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,, ,,,,,,, ,,,,, ,,,, ,,,,,,,, ,,,, ,,, ,,,,,,, ,, ，,,,—,,,(,,, ,,,,,, ,,,,,,,,,,,,, ,,,, , ,,, ,,, ,,,,, ,, ,,,,,,, ,,,,;,,,, ,,,,,,,;,, ,,,,,,;, ,, ,,,,,,, ,,,,,(,,, ,,,,, ,,,,,,,，, ,,,—,,,，,,,;,,,,, ,,,，,,,,,, ,;,,,,,,,，,,,,,,,, ,,,,,,,, , 山东大学硕士学位论文 说 明,(,(:,,,,,,, ,,,,,, 皮脂蠕形螨,(,(:,,,,,,, ,,,,,;,,,,,, 毛囊蠕形螨,(,(:,,,,,,, ;,,,,, 山羊蠕形螨，,,,—?,,,:,,,,,,,,,,,,, ,,？,,,;, ,,,,,, 简单重复序列聚合 ,,,,,,,,,, ;,,,, ,,,;,,,, 酶链式反应,,,:,,,,,,,,,,,;,,,; ,;,, 脱氧核糖核酸,,,:,,,,,, ,,？,,,;, ,,,,,, 简单重复序列,,,:,,,,,,,,,, ;,,,, ,,,;,,,, 聚合酶链式反应,,,,:,,,,,, ,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,; ,,, 随机扩增多态性,,,,,,,:,,,,,,;,,,, ,,,,,,,, ,,,,,, ,,,,,,,,,,,, 限制片段长度多态性,,,,:,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,, 三羟甲基氨基甲烷,,,,: ,,,,,，,,,,;,,,,,,, ,,,,,,,,,,,, 脱氧三磷酸核糖苷,,,:,,,,,, ,,,,,,,,, ,,,,, 双蒸水,,:,,,,,,,, ,,,,,,, 溴化乙锭,,,,:,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,, 三羟甲基氨基甲烷“,:,,;,,,,,,, 微升,,:,,,,,,,,, 毫克,,:,,,,,,,,,, 毫升,:,,,, 克,,:,,,,,,,, 千克,:,,,, 小时,,,:,,,,,,, 分钟,:,,;,,,, 秒,,,:,,,,,,,,,,, ,,, ,,,,,, 每分钟转数,,:,,,, ,,,,, 碱基对 山东大学硕士学位论文 人体毛囊蠕形螨、皮质蠕形螨和山羊蠕形螨， ,,,的引物筛选和 遗传分析 研究生:刘艳荣 导师:袁方曙教授 专业:病原生物学 ,?‘,—量 刖 置,蠕形螨简介,(,蠕形螨的分类地位 蠕形螨属于节肢动物门(,,,,,,,,,,)，蛛形纲(,,,;,,,,,)，螨亚纲(,;,,,)，食肉螨总科(,,,,,,,,,,,,)，前气门亚目(,,,,,,,,,,,)，真螨目(,;,,,,,,,,,)，蠕形螨科(,,,,,,,,,,,)。… 蠕形螨俗称毛囊虫，是一种小型的永久寄生螨，共分,属，其中与致病关系最密切的是蠕形螨属，至今己发现的蠕形螨约有,,,种及亚种，分别寄生于, ,个目的哺乳动物和人。 目前确定能在人体寄生的蠕形螨有两种:毛囊蠕形螨(,,,,,,,,,,,,;,,,,,)和皮脂蠕形螨(,,,,,,, ;,,,,,),,】，分别寄生于毛囊内的皮脂腺内。我国学者谢禾秀(,,,,)发现外国人描述的毛囊蠕形螨，与国内学者描述的毛囊蠕形螨在度量和形态上都存在差异，所以，她认为寄生在中国人体的毛囊蠕形螨为一个亚种，并定名为毛囊蠕形螨中华亚种。〔,,,】,(,蠕形螨的形态 蠕形螨成虫细长，体长,(,,,,(,,,,，乳白色半透明，呈蠕虫状，体表有明显的环形纹。螨体分颚体、足体、末体。雌螨体型稍大于雄螨。毛囊蠕形螨体型细长、末端钝圆，末体占虫体全长,,,以上。皮脂蠕形螨和山羊蠕形螨比较短、末端锥状，末体占虫体全长的,,,;通过光学显微镜从外观即可区分毛囊蠕形螨、皮质蠕形螨和,,,羊蠕形螨。【,?,】,(, 蠕形螨的生活史 毛囊蠕形螨和皮脂蠕形螨分别寄生在毛囊和皮脂腺内，通过毛囊孔迁徙。其发育过程包括卵、幼虫、前若虫、若虫和成虫阶段。繁殖。一代约需,,天。雌螨寿 , 山东大学硕士学位论文命约,,,天。口。叫? 毛囊蠕形螨一次只产一个卵，卵呈窄蘑菇状，乳白色，半透明，约,,,孵出,对足的幼虫。幼虫活动不明显，蜕皮后发育为前若虫。前若虫细长，足,对，基节处有骨突，末体较长。前若虫蜕皮后发育为若虫，若虫细长杆状，颚体大而突出， ,叫们有足和基节骨突各,对，足体部最宽，末体细长。若虫蜕皮发育为成虫。, 皮脂蠕形螨的卵椭圆形，发育中的幼虫体内有粗大的颗粒状物质，成虫体内未见颗粒状物质。,羽 山羊蠕形螨的卵为长椭圆形，卵壳薄，光滑透明。幼虫末体短小，呈锥状。山羊蠕形螨成虫外形更像皮脂蠕形螨，特点是颚体长而突出。,,,,(,蠕形螨的习性 人体的蠕形螨主要寄生在额、下颌、鼻、鼻沟、颊部、外耳道和眼睑周围，也寄生于头皮、颈、胸部、乳头、大阴唇、肩背等的毛囊和皮脂腺中，皮脂腺丰富的面部感染度相对较高。孟阳春定量法研究蠕形螨在面部的分布显示:毛囊蠕形螨由多到少依次为:颊上、颊中、颊下、额、鼻、眼眶下、口旁、鼻沟、耳旁、口上、下颌、鬓角:皮脂蠕形螨在脸颊部最多，其他部位均匀。人体可同时感染毛囊和皮脂蠕形螨，但毛囊蠕形螨的感染率和感染度均超过皮脂蠕形螨。,,,〕 毛囊蠕形螨的颚体朝向毛囊底部，足紧靠在毛囊的上皮上。一个毛囊内一般生活着,”,,’,只螨虫，最多可达,,只。毛囊皮脂腺管上端经常发现毛囊蠕形螨的成虫和若虫，毛囊皮脂腺管内和皮脂腺内常有卵和幼虫出现。皮脂蠕形螨常单个寄生于人体的皮脂腺和毛囊内，游离于毛囊间的表皮，其颚体全部朝向腺体基底，末体无确定的方向。蠕形螨主要刺吸宿主细胞和取食皮脂腺分泌物，也以皮脂、角质蛋白和细胞代谢物为食。,,,,,,, 山羊的背部、腹部、面部、臀部、四肢、颌下、颈部、肩胛等部位出现大小不等的结节，可以触摸到，大的肉眼可见，结节内有数个至数千个不等的山羊蠕形螨。展开患病山羊的羊皮，内表面有大小不等的淡黄色脓疱样结节，结节内有乳白色的干酪样物质，即为山羊蠕形螨和皮脂混合物。患病的羊毛乱、疏密不均、脱落、无光泽，体消瘦，局部皮肤有豆状结节灶甚至痘疤。患病羊皮结节处皮肤变薄甚至出现筛孔样洞，造成畜牧业巨大经济损失。,,,, 吴建伟研究离体蠕形螨活动能力发现，温度在,,,,,?之间时，随温度的升高其活动能力增强，,,?是其活动高峰，,,?为致死温度。蠕形螨生活史各期均不需光，但对温度较敏感，发育最适宜的温度为,,?，皮脂蠕 , 山东大学硕士学位论文形螨的运动能力明显比毛囊蠕形螨强，这可能与前者虫体短小，足爪发达有关。低温条件下，人体蠕形螨的存活时间较长，,。,时可存活,,天，,。,可存活,天，因此从人体取出的蠕形螨和皮脂的混合物可暂存在,。,冰箱中备用。在干燥环境中螨仅能存活,,,天，在挑取蠕形螨时，一定要保持螨体湿润。,,,,,,〕,(,蠕形螨的致病 蠕形螨的致病性与宿主免疫力、感染度、虫种和并发细菌感染等因素有关。绝大多数感染蠕形螨的人没有明显的症状，仅有轻微的痒感、毛孔扩张、皮肤粗糙。只有部分感染者出现皮损，表现为局部皮肤弥漫性充血、潮红，小结节、丘疹、痤疮、脓疱、脱屑、脱发等。 蠕形螨的致病机理:(,)机械性刺激:蠕形螨螨体直径与毛根相比，有带刺须肢、刺吸式口器、足爪和爪距，这些锐性结构对毛囊、皮脂腺造成机械性损伤，破坏上皮屏障，虫体会堵塞皮脂排出道，造成毛囊角化扩张、继发感染和皮脂腺囊肿。(,)化学刺激和免疫病理损害:蠕形螨的分泌物、排泄 物、蜕下的老皮、残体都可刺激宿主组织。同时这些物质具有免疫原性，可引起局部的免疫反应。 (,)病理改变:皮脂腺腺细胞增生，腺腔扩张。毛囊上皮过度角化。基底细胞增生，真皮层毛细血管增生扩张，非特异性炎症细胞浸润，纤维组织的增生。残体周围可有肉芽肿样反应。【,,,,, 寄生在山羊皮脂腺内的山羊蠕形螨形态和生活习性与皮脂蠕形螨类似。大量的山羊蠕形螨寄生引起皮脂腺增生和皮脂腺囊肿。病羊出现剧痒、皮炎、脱毛、皮肤结节等症状，目渐消瘦，严重时甚至造成死亡。【,,】 与蠕形螨致病有关的因素有:(,)蠕形螨的虫种:毛囊蠕形螨比皮脂蠕形螨诱发面部皮损的感染率高;(,)感染度:一般情况下皮损的严重程度与蠕形螨的感染程度成正比，感染严重的皮损明显，感染轻微的皮损不明显;(,)卫生习惯:调查发现，讲卫生，爱清洁的人也存在蠕形螨感染，但极少出现皮损或仅有轻微皮损;(,)过敏体质:人体的免疫状态与皮损有一定的关系，过敏体质的人感染蠕形螨容易出现皮损，非过敏体质的人感染蠕形螨不容易出现皮损。【,,】,(,蠕形螨的流行与防治 , 山东大学硕士学位论文 中国人患蠕形螨病的感染率一般在,,(,,,以上，最高时达,,(,,,。以毛囊蠕形螨感染度为高，同时感染毛囊蠕形螨和皮脂蠕形螨的人常见。蠕形螨可通过直接或间接接触而传播。预防感染，要尽量避免与他人共用枕巾、盥洗器具等。被褥要勤洗勤晒。山羊蠕形螨也是通过接触传播，发现病羊早隔离、早治疗是预防和控制山羊蠕形螨病的关键。对羊舍及其周围经常消毒，提高羊的抵抗力等有效的预防疫病的发生和传播。【,,】,(，,,,,,,,技术,(,(，,,,(,,,技术原理 在真核生物基因组的非等位编码区内，由,,,,,作为核心单位，在基因链上串联排列多次重复序列，称为微卫星体,,,(,,;,,,,,,,,,,, ,,,)或称简单重复序列(,,,,,, ,,？,,,;, ,,,,,, ,,,)，如(,,),、(,,,),、(,,,,),、 (,,,,,),等。乜副 ,,,,年，,,,,,,,研究寄居蟹基因组的卫星,,,，发现寄居蟹的基因组内存在大量的,,,序列;,,,,,,报道从酵母到脊椎动物的所有真核生物的基因组，都有以,,,,(,,,,),为核心序列的多重拷贝短序列;,,,,,、,,,,,,,,研究发现在老鼠、鸡和人以及多种植物的基因组中广泛存在,,,序列。,,,序列不仅存在于外显子、内含子序列中，也出现在在两个或多个,,,之间的基因片段中，而且种属亲缘关系越接近，,,,侧翼序列的同源性越高;同属的不同物种的,,,序列的侧翼序列存在差异。瞳,。,叫 ，,,,,,,,技术是,,,,,,,,,;,在,,,,年创建的一项新型分子标记技术，其分子生物学基础是根据真核生物的基因组中存在的,,,的,,,,,短核苷酸序列为基本单位设计引物，即，,,,,,;,的引物，其通常由,”,,,个碱基组成的串联重复或者几个非重复的锚定碱基组成的,,,,,个碱基序列，这些重复的短序列能使引物与基因组,,,中的,,,的,’或,’末端结合，又可以降低其靶标退火的温度、引起特定序列位点退火，还可以避免引物在基因组上的滑动，提高了,,,扩增反应的专一性。。““，,,,标记是用,,,,,个重复的碱基为引物锚定在,,,寡聚核苷酸链上，引导,,,之,’白,的,,,序列进行,,,扩增，而不是扩增,,,本身的标记技术。 , 山东大学硕士学位论文 ,,,在真核生物中的分布广泛，进化变异速度快，，,,,,,,,同时检测基因组多个位点的差异，根据其电泳图谱携带的信息，可以分析物种问遗传信息。，,,,—,, ,扩增产物经过电泳及染色观察结果，每个泳道产生的条带数与不同的物种和引物有关，因此对物种进行，,,,,,,,分析时必须进行引物的筛选。。“,坦,,(,(，,,,—,,,特点: 第一，，,,,—,,,标记不需要样品具有生命特征，取材不受发育阶段的限制，同一个个体体细胞所得的带型，不容易受外界环境的影响;第二，相对于其他标记技术不需进行基因文库构建、杂交、同位素显示，也不需预克隆和测序获得微卫星的侧翼序列，不必知道靶标序列的,,,背景信息，对与锚定碱基的重复序列选择是随机的，降低了技术难度和实验成本。因此，,,,—,,,标记以其简便、快捷适用于任何含有,,,序列的物种分析，本实验采用，,,,标记对蠕形螨进行遗传分析;第三，，,,,—,,,的引物增加了锚定碱基，待扩增基因组中的重复序列与锚定核苷酸的位点匹配才能被靶定，增强了结合的专一性;第四，对模板需求量少，一般不需纯化，已发表的有关，,,,标记的报道引物多.