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等电聚焦电泳 介绍
等电聚焦电泳 介绍
等电聚焦电泳介绍
点击次数:315 作者:佚名 发表于:2008-08-07 00:00 转载请注明来自丁香
园 来源:互联网
主要仪器试剂
仪器:微型电泳系统、电源、注射器、固定和染色用容器 试剂:丙稀酰胺、双,丙稀酰胺、载体两性电解质、尿素、过硫酸胺、TEMED、
TritonX,100、2,巯基乙醇、溴酚蓝、磷酸、氢氧化钠、氯化钾、三氯乙酸、
考马斯亮蓝、甲醇、乙酸。
储存液:1)30%(w/v)丙稀酰胺,1%(w/v)双,丙稀酰胺;2)20%Triton X100;3)10%三氯乙酸;4)1%三氯乙酸;5)1%溴酚蓝;6)考马斯亮蓝染色液;7)考马斯亮蓝脱色液;
灌胶
以灌制8cm×7cm×0.75mm pH4-6变性等电聚焦凝胶的配方。其他pH范围等电聚焦可以参考表格来配置。
水:5.4ml; 储存液1):2.0 ml; 载体两性电解质溶液pH3.5-10 48μl; 载体两性电解质溶液pH4-6 240μl; 超纯尿素 6.0 g ;10%过硫酸胺25μl; TEMED:20μl
灌胶步骤:
1.组装灌胶器;
2.将尿素、水、溶液和载体两性电解质溶液混匀,避免剧烈摇动,轻微加热尿素溶解更快(带手套,丙稀酰胺有毒);
3.加入过硫酸胺和TEMED,轻轻混匀(开始聚合,操作要迅速); 4.将上述混匀溶液倒如灌胶器(尽量避免气泡产生);
5.插入梳子,将梳子侵入胶内(不要产生气泡);
6.聚合约1小时;
7.聚合完成,小心拔去梳子;
8.将凝胶同冷却装置连接后插入电泳池,蛋白样品上样前最好用阳极电极液注入上槽中确定是否有渗漏。
注意:
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