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药物的吸收.doc 药物肠吸收的研究方法进展 摘要:药物在肠内的吸收过程，是决定口服药物生物利用度的重要因素。科学的肠吸收研究方法可以让我们了解肠上皮细胞和肠内酶对药物吸收的影响。并获得药物在肠道的吸收动力学参数、有效吸收部位、吸收机制、影响吸收的因素等信息。本文对外翻囊法、Caco一2细胞模型法、肠襻法、分离肠黏膜法等几种方法，就模型自身及应用作一综述。 关键词:Caco一2细胞模型法;肠襻法;分离肠黏膜法 ;外翻囊法 口服给药是最方便、最常用的临床给药方式，药物经口服给药的主要吸收部位是小肠(药物能否被吸收，除了与药物的理化性质有关外，主要取决于肠黏膜的构造、肠内酶对药物的代谢作用及肠上皮细胞对药物的屏障作用。目前研究药物在肠内吸收的实验方法主要有体外法、在体法、体内法等，现简要介绍各种肠吸收模型的操作方法和特点。 1、体外法 1(1分离肠黏膜法 大鼠麻醉状态下开腹，在肠腔内插管，用生理氯化钠溶液冲洗净肠内容物，取出肠管置于Krebs.Henseleit (pH 7(4)的缓冲液中，套在玻璃棒上，用解剖刀刮掉上皮下层组织，制得分离肠黏膜，固定于扩散池上。本法测定药物透过上皮细胞的情况，适用于研究药物的吸收机制。 该方法的干扰因素少, 且快速准确。但因私膜易于破损, 分离黏膜的操作比较困难。 1.2外翻囊法 首先将动物豚鼠或兔子麻醉, 或实验前处死。然后将动物固定于手术板上。剖开腹腔, 多选用下段空肠或回肠, 上下两端用丝线结扎, 取出肠段约10cm置于盛有预先通以O2和CO2的溶液的小玻璃杯中, 洗去小肠上所附的血块, 将洗净的肠段放在干净滤纸上, 吸去肠浆膜面的液体。这样小肠外翻后, 肠浆膜表面所附着的液体很少, 从而能较精确地了解吸收后浆膜侧液体的容积和成分。 小肠外翻法用一根直径约4毫米的塑料管, 长10-20cm, 一端剪成斜口, 一端为平口, 将塑料管的斜口由肠段的肛门端轻轻插人, 直至小肠的肛门端刚刚盖住塑料管的平口, 用丝线扎紧, 再用镊子夹住小肠口端的断缘, 将肠翻转, 轻轻地向下拉, 待整个肠段外翻后, 将翻出肠段的游离端结扎。经针头向肠段内注人7一10ml溶液后, 置于含有药物的溶液中, 37?恒温, 在95%O2+5%CO2气流下, 定时从肠管内外两侧取样, 测定药物浓度的变化。 外翻囊法不仅是一个很好的观察吸收的方法,而且还能用于研究生物膜的转运机制。 1(3 Caco-2细胞模型法 Caco-2细胞系来源于人类结肠癌细胞，药物透过Caco一2细胞单层的体外过程与药物口服后在肠内的吸收和代谢有良好的相关性。在研究药物跨膜转运机制方面:关溯等研究了隐丹参酮的吸收机制，主要是由载体介导的主动转运，且该主动转运 的载体位于Caco-2细胞单层的顶端。韩曼等研究了三七总皂苷(包括Rbl和R91)的口服吸收机制为单纯被动扩散，不受细胞膜内P—gP和MRP外排载体的调控。在研究P—gP外排作用方面:以三甲氧基芦竹碱 (TMF)作为P-gp抑制剂(提高了紫杉醇从AP到BL的转运，降低了BL到 AP的转运，且呈浓度依赖性，从而提高了紫杉醇的生物利用度。Luo L等利用MTT法，以聚氧乙烯(40)硬脂酸酯(PS40)作为P—gP抑制剂(减少了长春碱(VBL)的外排，VBL+PS40组可明显降低肿瘤的平均体积和重量，所以PS40可作为提高P--gp底物疗效的有效辅剂，从而提高癌症的化疗效果。Wahenberger B等研究了肠道菌群对药物的作用，实验显示番泻荚中的导泻成分一番泻苷是前体药，无活性(口服后在胃肠道难以吸收，它们以原型直接进入结肠，在大肠菌群作用下。将番泻果苷分解成具有缓泻活性的代谢产物一大黄酸蒽酬，在结肠发挥靶向作用。 Caco-2细胞模型已成为研究药物吸收、转运和代谢最经典的体外模型之一，能够判断药物的吸收方式，求出药物吸收的动力学参数，是阐明药物吸收机制的有力工具，但该法具有缺乏分泌粘液的杯状细胞、细胞紧密联结程度比正常小肠细胞离、过量表达P--gP等缺点，因而实验结果要与整体及其他肠吸收实验数据相结合。 2、在体法 2(1肠襻法 将大鼠麻醉, 开腹结扎肠腔, 需作部位研究时,可分段结扎肠腔, 将含有一定浓度的人工肠液注人肠襻中, 经过一定时间后, 取出肠襻, 收集肠襻冲洗液, 测定药物剩余量, 进而了解药物吸收情况。该法较在体肠回流法操作简单, 但由于肠腔内容物存在, 样品处理较复杂, 实验数据的准确性较差。 2(2在体肠灌流法 该法是目前运用最广泛的方法之一，国外采用最 多的是单向灌流法，国内比较倾向于使用循环灌流法。许英爱等研究了灯盏花素的吸收部位和机制，结果表明，灯盏花素在小肠的吸收多于在结肠的吸收，吸收机制为被动扩散，吸收过程为一级动力学过程。Persson EM等在猪体空肠部位进行单向灌流实验以考察食物对亲脂性药物吸收的影响，结果显示食物中油脂成分可形成胶柬(增大药物的溶解性，混悬液中药物在胶束层和水层中分配并从两相中被吸收，这种增溶和在不同结构的分配对于溶解性差的药物在药物一食物相互作用中起着重要的作用。该法可以在不同时间测定灌流液内药物浓度的变化。以获得药物透过肠上皮细胞的情况。但该法只限于溶液状态给药，pH值、药物浓度、吸收部位等因素均有可能影响其测定的准确性。 3、体内法 灌胃给药后，不同时闷点采集血液，测定血药浓度，计算Cmax、Tmax等药动学参数来评价药物吸收的速度和程度。此法能够真实反映药物体内的总体吸收情况，但很难从细胞或分子水平研究药物的吸收机制。不能替代上述诸法，而由于其周期长，操作繁琐，影响因素较多，故不能特异性的反映肠道的吸收情况，不适用于药物开发早期的快速筛选和大规模评价。 4、结语 近年来(药物新剂型的不断涌现，新的给药方式用于临床，又给药物吸收的研究提出了更高的要求。目前通过简单的口服吸收模型与数学模型的结合不能预测所有的化合物，而采用多种实验方法研究同一药物，进行综合评价，结合实验结果和模型因素对药物的肠道吸收 行为作出科学评价，能增加实验结论的可靠性。在不同肠段，十二指肠、空肠、回肠、结肠的吸收无显著差别，吸收机制为被动扩散，吸收和分泌过程受P-gP外排载体的调控，P—gP抑制剂可提高其吸收。采用PAMPA和Caco一2细胞模型相结合的方法共同评价已上市药品和候选药品的被动扩散和主动吸收。研究药物的肠吸收能够指导人们选择合适的剂型，控制药物溶出的部位、速度以及药物在吸收部位的停留时间等，从而提高制剂的生物利用度，同时有利于新药 设计 领导形象设计圆作业设计ao工艺污水处理厂设计附属工程施工组织设计清扫机器人结构设计 和剂型的改进，在新药的研发阶段，对吸收过程进行研究和预测，可以降 低新药研发投资的风险。 5、参考文献: 【1】关溯，毕惠嫦，陈孝(等(隐丹参酮在Caco-2细胞模型中的吸收机制[J](中国临床药理学杂志，2005，21(4):268—71( 【2】韩曼，韩丽妹，王青松等(三七皂苷的口服吸收机制[J](药学学报，2006(46(6):498,505( 【3】蒋学华, 贾运涛。Caco一2细胞模型在口服药物吸收过程研究中 的应用[J].中国药学杂志, 2002，37(5):325—327. 【4】梁桂贤, 刘谦民，药物肠吸收研究方法近况[J],国外医药一合 成药?生化药?制剂分册, 1998,19(4):251—252. 【5】梅愚华, 胡维杨，小肠的吸收[A].赵轶千, 王雨若生理学实验 指导[M].北京:人民卫生出版社,1985,111—112. :